浙江畲族DYS287、DYS440位点的多态性研究

目的　研究浙江畲族人群中DYS2 87和DYS44 0位点的多态性。方法　采用聚合酶链反应扩增DYS2 87和DYS44 0 ,PCR产物用 2 %的琼脂糖电泳分析 10 0名畲族个体的基因型。结果　 10 0名个体DYS2 87位点全部是YAP-;没有发现YAP ;10名为DYS44 0 3 ,占总人群数的 10 % ,其余 90名是DYS44 0 4。结论　浙江畲族人群DYS2 87和DYS44 0多态性与属于汉藏语系的其它民族之间存在着明显的不同 ,因此这两个基因位点对研究人类的进化是一种稳定的、重要的遗传标记。     

早期HIV-1感染env基因的动态变异研究

目的 追踪观察HIV-1新发感染者体内CRF07_BC重组毒株膜蛋白基因的变异性.方法 从HIV-1感染者血浆中提取总RNA,通过逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)获得HIV-1 gp120全长及C2-C5区段基因.纯化后装入T载体,转化至Top10大肠埃希菌内增殖,通过蓝白斑筛选获得阳性克隆,运用PCR方法进行鉴定,最后对所获得的目的克隆测序.结果从两个感染者血浆样品中获得感染后半年到2年半间多个时间点的gp120基因克隆共135个及gp120基因C2-C5区段克隆15个,分析显示这些克隆均为HIV-1 CRF07_BC亚型.随感染时间的延长,HIV-1 env基因的离散率与多样性均有增加的趋势.env基因同义突变与非同义突变比较结果显示,C1、C3与V4区段非同义突变比率比gp120基因的其他区域都高.基因多态性分析的结果显示,同一时间点内不同毒株基因在不同区段的变异是不同的,基因多样性介于0与0.066±0.028之间.结论 随着患者感染时间的推移,HIV-1膜蛋白基因的变异逐渐增大.C1、C3和V4区的高突变率提示,该基因区可能是HIV-1病毒生存与宿主免疫压力相互作用的主要位点.     

用逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒分型诊断

目的 建立一种逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒(CVB1～6)进行分型诊断。方法 一对通用PCR引物，它能有效扩增所有CVB1-6型的特异性DNA片段；另选取6条各型特异性寡核苷酸探针，将它们分别共价结合在不同的微孔板上。经过一次PCR扩增，扩增后的产物分别与包被有不同探针的微孔板进行杂交检测，从而有效鉴别CVB各型。结果 本法与ELISA法的分型比较显示它们具有很好的一致性，无错误分型。对152例IgM抗体阳性标本的检测，该方法阳性率为71．7％。结论 本法可准确对CVB进行分型，为CVB的临床诊断及流行病学调查提供了一种有效的方法。     

人类胚胎生殖细胞体外分化为心肌细胞的研究

胚胎生殖（EG）细胞是来源于胚胎原始生殖细胞（PGCs）的多潜能干细胞。采用无饲养层细胞、无细胞因子等的基础培养液（DMEM＋20％NBS＋0．1mM 2Me）培养EG细胞，部分在基础培养液添加10μmol／LRA＋0．75％DMSO或10μmol／L 5-氮胞苷（5-AZA）诱导人类EG细胞向心肌细胞分化，以检测其是否具有向心肌细胞自发分化的能力。9例（8．49％，9／106）胎儿EG细胞在体外分化得到20个节律性心脏跳动样细胞团，其搏动节律为20～120次／min，体外维持节律性搏动最短2d，最长至15d，呈PAS，Myoglobin，α-actin阳性；对K^＋、Ca^＋、肾上腺素等具有与在体心脏相似的反应性；透射电镜观察具有心肌细胞样结构。添加DMSO和RA或5-AZA诱导未得到跳动样心肌细胞，但可提高心肌α-actin免疫组织化学染色阳性率；表明人类胚胎生殖细胞具有向心肌细胞分化的潜能。     

大鼠脑底动脉降钙素基因相关肽能神经纤维分布的形态学观察

目的　探讨 14只成年鼠和 14只老年鼠脑底主要动脉降钙素基因相关肽能神经纤维的分布特征。方法　应用免疫组织化学ABC法、神经交点计数法。结果　成年鼠脑底各主要动脉壁上均含有呈线状黑色的CGRP能免疫反应阳性神经纤维 ,分布密度以大脑前动脉最高 ,其次是大脑中动脉、大脑后动脉、基底动脉。各动脉间CGRP能神经纤维密度比较具有统计学意义 (P <0 .0 1) ,成年鼠脑底动脉壁CGRP能神经纤维以环行分布为主 ;老年鼠脑底动脉壁CGRP能神经纤维密度以大脑前动脉最高 ,走行方式以网状分布为主 ;老年鼠脑底各主要动脉壁CGRP能神经纤维分布密度低于成年鼠相应脑底动脉。结论　不同脑底动脉CGRP能神经纤维分布特征各异 ,老年鼠较成年鼠脑底动脉CGRP能神经纤维的分布密度为低     

2型糖尿病患者外周血CD146检测的临床意义

目的 探讨外周血CD146水平在诊断2型糖尿病患者肾损伤中的临床意义.方法 检测58例2型糖尿病患者和20例正常对照组外周血CD146(ELISA法)和U-MAlb(散射比浊法)的水平.结果 2型糖尿病患者肾损伤后外周血CD146、U-MAlb水平显著高于对照组,尿蛋白定性阳性组CD146与U-MAlb呈正相关.结论 2型糖尿病患者肾损伤后外周血CD146水平显著升高.     

病毒性心肌炎小鼠心肌组织中趋化因子表达谱的改变及其意义

目的：研究病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌组织趋化因子（ChKs)表达谱变化，探讨ChKs在VMC发病中的可能作用及意义。方法：B3型柯萨奇病毒（CVB3）腹腔注射雄性BALB／c小鼠；RTPCR定性和定时定量分析心肌组织MCP－1、IP－10、Ltn和FKN等12种ChKs表达。病理切片和血清CKMB分析判定病变和病程程度。结果：（1）在所检测的12种ChKs中，VMC组呈阳性表达的有9种，显著多于正常组心肌组织的6种，有3种ChKs(BLC、Eot和LARC）两组均未检出；（2）VMC组9种阳性表达的ChKs中CVB3诱导性表达的为MIP－2、MIG和IP－10，6种组成性表达的ChKs在VMC时上调表达的有MIP－1β、MCP－1、MCP－2、Ltn等4种，下调表达的有RANTES，与正常对照组比未呈现明显差异的为FKN。（3）ChKs的表达消长存在一定的差异，感染4d后MIP－2等达高峰，随后下降；9d后出现MCP－1和RANTES表达上升峰；FKN在感染9d内表达较稳定。（4）亚急性早期、中期、中后期和晚期心肌组织ChKs表达谱有明显区别，各期ChKs表达谱中优势表达的ChKs分别为IP－10、IP－10、MCP－1、MCP－1。结论：VMC心肌组织ChKs呈成簇性方式改变，表达谱改变的复杂性可能与发病机制的复杂性有关，优势表达的ChKs可能在病毒性心肌炎发病中扮演着更重要的角色。     

家兔腓肠肌在电刺激下力学行为的实验研究

目的 获得肌肉收缩力学特性与其电生理特性间的实验关系。方法 用肌电仪发出不同波宽、不同强度的脉冲电流，对家兔的胫神经进行刺激，记录其复合动作电位及收缩力。结果 得到了收缩力与各种肌电信号的实验关系曲线。结论收缩力与刺激电流之间呈正相关关系、与复合动作电位幅值(CAMP)之间呈线性关系，且收缩力与肌电积分值之间也呈较好的线性关系。     

Rp-cAMP与缺氧神经元Bcl-2表达和细胞凋亡关系的研究

目的探讨培养神经元缺氧后蛋白激酶A(PKA)活性变化及其与神经元缺氧凋亡的关系。方法建立体外培养W istar大鼠胎鼠皮层神经元模型及培养神经元缺氧模型,用不同浓度的PKA抑制剂(Rp-cAMP),在不同的缺氧时相点观察神经元细胞膜和细胞质中PKA的活性、Bc l-2和TUNEL表达的规律。结果随着缺氧时间的延长,培养神经元细胞膜PKA的活性显著增加,Bc l-2表达降低,TUNEL荧光染色阳性率及平均荧光强度显著升高。而应用Rp-cAMP后细胞凋亡情况显著减轻。结论PKA和Bc l-2均参与了缺氧神经元凋亡;PKA抑制剂Rp-cAMP可减轻缺氧神经元凋亡,且该作用与Bc l-2表达降低有关;PKA的激活在缺氧神经元凋亡中起促发作用。     

塞姆利基森林病毒翻译增强序列对HIV Gag DNA疫苗抗原表达和免疫原性的调节

目的 研究塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus，SFV）衣壳蛋白5’翻译增强区对基于该病毒复制子的HIV Gag DNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响：方法将SFV衣壳蛋白（capsid，C蛋白）基因的5’端102bp翻译增强区插入到SFT复制子DNA疫苗载体pCMV-Rep的SFV亚基因启动子下游，得到DNA疫苗载体pCMV-RepC。将删除ATG的HIV-1 gag基因插入pCMV-RepC，使gag编码区与翻详增强区融合，得到DNA疫苗质粒pCMV-RepC-gag。同时，构建携带未融合翻译增强序列的DNA疫苗质粒pCMV-Rep-gag。Western blot检测翻译增强序列对Gag表达水平的影响。用上述两种DNA疫苗分别免疫BALB／c雌性小鼠，ELISA检测Gag特片的抗体反应，ELISPOT和细胞内因子染色技术检测细胞免疫应答。结果衣壳蛋白5’翻译增强区增强了Gag表达水平，对体液免疫应答没有显著影响，但显著增强了特异性细胞免疫应答水平。结论SFVC蛋白翻译增强区能显著提高SFV复制子DNA疫苗的抗原表达和抗原特异性细胞免疫反心。