酸性微环境下大蒜素增强大鼠自然杀伤细胞的功能活性

目的 观察体外酸性培养环境下大蒜素对自然杀伤(NK)细胞功能活性的影响,并探讨其机制.方法 以pH 5.6、pH 6.5和pH 7.2的完全RPMI 1640培养基对大鼠脾脏CD3-NKR-P1+NK细胞进行悬浮培养,并给予30 mg/L浓度的大蒜素进行处理.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中干扰素(IFN)-γ的分泌水平,流式细胞仪检测NK细胞的增殖和凋亡率,乳酸脱氢酶法检测NK细胞的功能活性.结果 酸性培养环境下大鼠脾脏NK细胞的增殖能力明显下降,NK细胞功能活性明显受阻.在pH 7.2、pH 6.5和pH 5.6三种不同的培养条件下,大蒜素对NK细胞增殖率的影响表现为随培养环境的pH降低反而升高,以pH 5.6、培养16 h时达最高33.3%.与之相对应,NK细胞分泌的IFN-γ达(64.59±0.09)ng/L,较培养4 h时升高28%,且对小鼠淋巴瘤Yac-1细胞的杀伤活性也达到最高水平.结论 大蒜素可通过提高NK细胞IFN-γ分泌水平明显改善酸性培养环境下NK细胞的功能活性.

Abstract：

Objective To investigate the role of allicin on rat nature killer (NK) cell activity in vitro under acidic microenvironment, and its possible mechanism. Methods CD3- NKR-P1+ NK cells isolated from the rat spleen were cultured in the complete RPMI 1640 medium ( pH 5. 6, pH 6. 5, or pH 7. 2 respectively), and treated with allicin at final concentration of 30 mg/L. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to determine supernatant interferon (IFN)-γ levels. The percentage of NK cells proliferation and apopotosis was analyzed by flow cytometry. NK cell cytotoxicity toward YAC-1 tumor cells was detected by LDH release assay. Results Proliferation and cytotoxicity of NK cells were significantly suppressed by acidic microenvironment in vitro. Under the cultured condition of acidic pH below 7. 2, allicin seemed to promote NK cells proliferation, which reached to highest level of 33% at pH 5. 6 cultured for 16 h. Correspondingly, at pH of 5. 6, allicin induced a marked increase of IFN-γ concentration in the supernatant from (50. 07 ± 0. 38) (cultured for 4 h) to (64. 59 ± 0. 09) ng/L ( cultured for 16 h). The cytotoxicity of NK cells toward YAC-1 tumor cells was also found strongest under the condition of pH 5. 6 cultured for 16 h. Conclusion Allicin favored to enhance the cytotoxicity of NK cells under the acidic cultured condition, which might be related to the increase of IFN-γ production.     

多模态功能MRI在糖尿病脑病中的应用研究

【摘要】目的 探讨多模态功能MRI用于早期诊断2型糖尿病（T2DM）脑病及其病情严重程度评估。方法 纳入2016年3月～2017年5月我院收治的49例T2DM合并脑病患者,按照病程长短分为A组（23例）（＜10年）与B组（26例）（＞10年）,同时招募健康志愿者21名为志愿者组。采用磁敏感加权成像（susceptibility weighted imaging,SWI）与MR波谱成像(magnetic resonance spectroscopy,MRS)对受试者左侧海马部位进行扫描,计算各组受试者相位值与蒙特利尔认知（Montreal of Cognitive Assessment,MOCA）评分之间是否存在相关关系。结果 3组MoCA评分差异无统计学意义（P＞005）;B组的SWI相位值、Ins/Cr值、Cho/Cr值均高于A组（P＜005）,A组高于志愿者组（P＜005）;A组NAA/Cr值高于B组（P＜005）,但显著低于志愿者（P＜005）;MoCA评分与A组、B组受试者SWI相位值成正相关关系,与A组、B组受试者的Ins/Cr、Cho/Cr、NAA/Cr均具有负相关关系。 结论 多模态功能MRI有助于早期诊断并评价T2DM糖尿病脑病(diabetic encephalopathy,DE)病情严重程度。     

四种污染源气体颗粒物对大鼠血清肌红蛋白和脑钠肽的影响

【摘要】 目的 观察四种不同污染源气体颗粒物对大鼠血清肌红蛋白和脑钠肽水平的影响。方法 将70只成年SD大鼠随机分为对照组10只、汽车尾气组15只、煤烟组15只、燃烧秸秆组15只和自然空气组15只;按1mg/ml的相同的浓度气管内分别滴注汽车尾气、煤烟、燃烧秸秆、自然空气颗粒物悬液每天1次,一次01ml,连滴10天后,采用化学发光法动态检测5组的血清肌红蛋白（Mb）和脑钠肽（BNP）水平;计算HM/BM;CCK 8法检测大鼠心肌细胞的存活率,并观察心肌细胞的病理变化。结果 各研究组大鼠血清Mb的水平均有所升高,均在一定时间内达到峰值。血清中BNP水平也存在此类波动变化,BNP达到峰值的时间及恢复正常水平的时间比Mb水平晚,但升高的幅度大。汽车尾气组、煤烟组和自然空气组大鼠HM/BM明显升高,出现了不同程度的心肌细胞浸润、水肿、变性、坏死、纤维化;心肌细胞存活率明显下降;秸秆组大鼠HM/BM变化不明显,心肌病理出现了轻度的心肌细胞水肿、变性,HM/BM无明显升高,心肌细胞存活率下降不明显。结论 高浓度的汽车尾气、煤烟、燃烧秸秆、自然空气颗粒均可以引起大鼠的心肌损害。检测大鼠血清中肌红蛋白(Mb)和脑钠肽 (BNP)的水平对判断污染物对大鼠心肌损害程度具有重要意义。     

子宫内膜增生症及早期子宫内膜癌保留生育功能后冻胚移植妊娠结局

目的 探讨子宫内膜复杂性增生/不典型增生/早期子宫内膜癌保留生育力治疗后冻胚移植子宫内膜准备方案对妊娠结局的影响。方法 回顾性分析2015年1月至2020年12月于山东大学附属生殖医院门诊经体外受精或卵细胞质内单精子注射行冻胚移植的经保留生育功能治疗后逆转的子宫内膜复杂性增生/不典型增生/早期子宫内膜癌患者的临床资料,纳入了112例患者的179个冻胚移植周期,按冻胚移植子宫内膜准备方案分为4组：自然周期组(n=29)、促排卵周期组(n=38)、直接替代周期组(n=89)、降调+替代周期组(n=23)。比较分析各组的临床特征和妊娠结局,采用二分类Logistic回归分析影响患者活产率的因素。结果 在179个周期中,促排卵周期组与自然周期组、直接替代周期组和降调+替代周期组比较,其妊娠周期活产率(34.2%、31.0%、31.5%、30.4%)、活产率(46.7%、31.8%、34.8%、22.2%)、妊娠周期临床妊娠率(52.6%、37.9%、49.4%、43.5%)、妊娠周期生化妊娠率(65.8%、44.8%、64.0%、47.8%)更高,自然周期组妊娠周期流产率低于其他3组(18.2...     

Adv-HIF-1α^mu转染内皮祖细胞对CXCL12表达影响的研究

目的研究转染低氧诱导因子-1α突变型（hypoxiainduciblefactor-1α^mu,HIF-1α^mu）后的外源性内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells,EPCs）中CXCL12的表达情况及对EPCs的影响。方法密度梯度离心结合差速贴壁法分离、培养EPCs并进行鉴定;以Adv—HIF-1α^mu的最佳转染指数转染EPCs,获得含有目的基因处理的EPCs细胞,设为A组。B组为单纯转染Adv的EPCs。设未转染Adv—HIF-1α^mu的EPCs为C组。WesternBlot检测转染后的EPCs中HIF-1的表达,检测转染后的EPCs培养液上清液中的CXCL12浓度及其对外源性EPCs迁移的影响。结果密度梯度离心结合差速贴壁法获得的EPCs能够结合UEA-1和摄取ac—LDL,并具有成血管作用;转染Adv—HIF-1α^mu的EPCs表达的HIF-1及CXCL12高于单纯转染Adv的EPCs及未转染Adv—HIF-1α^mu的EPCs（P〈0．05）,且能诱导外源性EPCs的迁移。结论密度梯度离心结合差速贴壁法能够分离、培养符合特征的EPCs,转染Adv—HIF-1α^mu的EPCs能够在常氧条件下高表达HIF-1及CXCL12,并诱导外源性EPCs的迁移。     

妇科疾病患者HPV感染及其影响因素分析

  目的  探讨河北省承德地区人乳头瘤病毒（HPV）感染影响因素及不同治疗方法干预效果。  方法  选择2013年1月 — 2016年1月期间承德市8县3区自愿参加本研究并接受调查问卷的4 250名女性作为研究对象,对所有对象同时进行宫颈液基薄层细胞学检测及HPV DNA检测,对HPV16/18型和细胞学显示ASCUS及以上患者进行阴道镜检查、定点活检和病理检查。分析承德地区HPV感染现状及相关危险因素,同时对HPV感染高危患者采用不同的治疗方式加以临床护理,比较其治疗效果。  结果  承德地区4 250名研究对象中,有770例HPV感染患者,总感染率为18.12 %,其中高危亚型11种共710例,感染率为16.71 %,低危亚型3种共60例,感染率为1.41 %,高危亚型感染患者以16型、51型、53型、56型、58型为主,低危亚型感染患者以6型、11型、12型为主;单因素及多因素结果表明,承德地区HPV感染率与生活地址、首次性生活年龄、性伴侣数、生产次数、流产史、性伴侣包茎或包皮过长、生产方式、宫颈癌家族史均为HPV感染的危险因素（P < 0.05）;对于HPV感染高危患者药物治疗效果有效率明显低于手术治疗及物理疗法,手术治疗其治疗效果最佳,差异有统计学意义（P < 0.05）。  结论  承德地区HPV感染率较高,且发生率影响因素较多,应根据可能危险因素制定有效的措施进行干预,降低HPV感染。     

丙泊酚诱导血管内皮细胞中eNOS激活机制的最新研究进展

丙泊酚是目前临床上用于麻醉诱导和维持最常用的药物之一,但是常伴血压降低,这对心脏储备低下的患者极为有害。丙泊酚的血管效应复杂,在体实验显示,丙泊酚对动静脉循环都有影响。丙泊酚似乎影响血管系统的许多细胞分子过程,如钙信号、内皮功能和交感神经传递等。现探讨丙泊酚诱导血管内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶激活的机制,以期为实验研究提供参考。     

基于社会变革理论社区医生使用基本药物现状研究

建立国家基本药物制度,不仅有利于优化卫生资源配置,保障群众基本用药需求,保证基本药物公平性,同时能够有效地减轻人民群众的医药费用负担.通过对山东省社区医生进行问卷调查,了解其对基本药物制度的认知及评价情况,在社会变革理论视角下探讨社区医生处方时使用基本药物的动机及促进策略,为确保基本药物制度的推进和改善提供参考.     

两种二线化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌疗效的比较

 目的 比较国产培美曲塞二钠或多西他赛单药用于治疗一线化疗失败的晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的疗效与安全性。方法 86例既往一线化疗失败或不能耐受的ⅢB或Ⅳ期NSCLC患者分别入培美曲塞二钠组（A组）或多西他赛组（B组）,28例患者接受培美曲塞二钠500 mg·m-2治疗,58例患者接受多西他赛75 mg·m-2治疗。入组患者至少接受2个周期以上化疗。结果 入组的86例患者均可评价疗效,治疗1年后随访83例,A组27例,B组56例,失访3例。A组和B组的总有效率分别是7.14%和10.34%,疾病控制率分别是67.86%和70.69%,1年的生存率分别为44.44%和55.36%,中位生存期为11.2个月和12.2个月,两组的不良反应主要表现在骨髓控制、肝损伤、恶心/呕吐、乏力及皮疹。A组骨髓抑制的发生率明显低于B组,但皮疹的发生率却明显高于B组。结论 对于既往一线化疗失败或不能耐受的晚期NSCLC患者,单药使用培美曲塞二钠或多西他赛进行化疗疗效相似;不良反应各有特点,患者都可以耐受,值得临床推广。     

重组葡萄球菌肠毒素B突变体蛋白D9N的表达、纯化及生物学活性的研究

 目的表达、纯化重组葡萄球菌肠毒素B突变体蛋白D9N(rSEB-D9N),了解表达产物rSEB-D9N的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和肿瘤生长抑制作用。方法不同浓度IPTG诱导SEB-D9N突变体原核表达系统pET32a-SEB-D9N-E.coliBL21DE3表达rSEB-D9N,经Ni-NTA亲和层析法纯化rSEB-D9N,10%SDS-PAGE和高效液相色谱检测其纯度。以Vero细胞为靶细胞,进行rSEB-D9N的细胞毒性作用,并计算TCID₅₀值。采用MTT法分别检测不同浓度的rSEB-D9N促人淋巴细胞增殖及抑制KB及MCF-7癌细胞株生长的作用。流式细胞术检测rSEB-D9N刺激人淋巴细胞后CD3、CD4、CD8的表达。结果rSEB-D9N表达产量约占细菌总蛋白30%,纯化后获得纯度为90.48%的rSEB-D9N。rSEB和rSEB-D9N对Vero细胞的TCID₅₀值分别为3.12,8.85μg,10.0,20.0mg·L^-1的rSEB-D9N具有显著的促PBMC增殖的作用(P<0.05),且主要上调CD3,CD4和CD8的表达。5.0～20.0mg·L^-1rSEB-D9N作用的PBMC上清对KB和MCF-7细胞生长均可产生明显抑制作用(P<0.05)。结论获得并纯化了重组葡萄球菌肠毒素B突变体蛋白(rSEB-D9N),其细胞毒性作用有所降低,但促人淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用仍较强,可作为研制升白细胞、抗肿瘤相关药物的候选突变体。