软骨细胞上清液诱导BMSC向软骨细胞转化的实验研究

目的:体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞(BMSC)向软骨细胞表型转化,并对诱导进行鉴定。方法:从SD大鼠中分别分离出BMSC和软骨细胞进行体外培养。收集软骨细胞培养上清液,作为BMSC诱导液从第2代开始进行诱导分化。7d后取出标本,甲苯胺蓝染色和Masson染色检测软骨基质的分泌,免疫组织化学检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan的mRNA表达。结果:镜下见细胞形态由梭形向多边多角形转化。甲苯胺蓝染色和Mas-son染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化检测阳性,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA呈阳性表达。结论:软骨细胞上清液可诱导BMSC向软骨细胞转化。     

长寿老人主观幸福感及其相关因素研究

目的:了解长寿老人主观幸福感及其影响因素。方法:采用横断面整群抽样调查方法,对732例都江堰市90岁以上老人进行费城老年中心信心量表(PGCMS)、家庭关怀度指数(APGAR)、中文版简易智能状态检查(MMSE)、日常生活能力量表(ADL)及社会支持量表(SSRS)调查。结果:PGCMS在90-108岁老人中呈负偏态分布,PGCMS总分为1-23分,M(QL-QU)为17(13-19)。各年龄组间PGCMS的差异无统计学意义,PGCMS与SSRS中的主观社会支持、客观社会支持及APGAR、MMSE、ADL中的躯体生活自理分量表的相关有统计学意义。结论:PGCMS在90-108岁老人中呈负偏态分布,分值不随年龄的增加而变化。对90—108岁长寿老人主观幸福感有影响的因子及强度依次为主观社会支持、客观社会支持、认知功能状况、家庭关怀情况及日常生活中躯体生活自理能力。     

放射损伤对于移植的骨髓间充质干细胞在受体大鼠不同器官中植入的影响

目的： 探讨放射损伤对于骨髓间充质干细胞（MSCs）移植后在受体大鼠不同器官中植入的影响以及可能的机制。方法：采用DNA缺口末端标记法(TUNEL)检测正常对照组和单纯放射组大鼠心脏、肾脏、肝脏、肺脏的细胞凋亡率。应用密度梯度离心法结合贴壁法提取雄性大鼠骨髓MSCs，培养后把MSCs移植到［60COγ］照射和未经照射的雌性大鼠体内，通过PCR和Y染色体荧光原位杂交（Y- FISH）示踪雄性大鼠MSCs在雌性大鼠体内的分布情况。结果：照射后大鼠心脏、肾脏、肝脏、肺脏细胞凋亡率显著高于对照组。PCR结果显示照射后移植MSCs的大鼠心脏、肾脏、肝脏、肺脏和外周血中可以扩增出Sry基因的DNA序列，而且Y- FISH显示照射后移植MSCs的大鼠在心脏、肾脏、肝脏、肺脏中可发现Y染色体阳性的细胞。但是未经照射行MSCs移植的大鼠在上述器官中未发现Y染色体阳性的细胞。结论：全身放射促进组织细胞的凋亡，并导致移植的MSCs在受体大鼠心脏、肾脏、肝脏和肺脏的植入。     

慢性乙型肝炎患者肝细胞凋亡的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者肝细胞凋亡与肝组织诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、肝脏病理及血清转氮酶水平之间的相关关系.方法 取37例CHB患者和10例正常对照,采用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测肝组织中的细胞凋亡情况,免疫组化法检测肝组织iNOS的表达,并常规测定患者肝组织炎症分级和纤维化分期、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、HBV DNA水平.结果 所有CHB患者的肝组织中均见到不同程度的TUNEL染色阳性.正常对照肝组织中未见到TUNEL阳性肝细胞.在CHB肝组织中,凋亡指数(A1)与炎症分级(r=0.404,P=0.015)及肝组织iNOS水平(r=0.465,P=0.004)明显相关并有统计学意义,而与血清ALT水平、HBV DNA以及组织学纤维化分期无明显关系.结论 慢性乙型肝炎患者体内氧化应激水平可能是肝细胞凋亡的诱导因素之一,细胞凋亡参与了CHB的肝细胞损伤过程,但并不影响患者的生物化学指标.     

基于 C/S与B/S混合模式的重症肌无力管理系统的设计与研制

重症肌无力临床医生在就诊过程中收集了大量的临床资料,但是面对庞大而又杂乱的临床资料,人工对其进行管理、查询、统计分析等显然不可取,费时费力且更不用说从中“挖掘”出有用的信息以辅助诊断;此外,对于病人服药情况、疗效的随访等也难于开展,更不用说在医院各科室内部、Internet上共享临床资料。基于此,本文开发了以C/S和B/S混合模式的重症肌无力信息系统,以期为临床和科研做出一定的贡献。     

伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ所致心肌细胞蛋白质合成和肌球蛋白重链表达的影响

目的 观察伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）所致心肌细胞中蛋白质合成速率及肌球蛋白重链（MHC）基因表达改变的影响.方法 以AngⅡ及伊贝沙坦分别或同时作用于培养的细胞.采用放射性同位素[^3H]-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率.应用荧光定量PCR方法检测心肌细胞心房利钠肽因子（ANF）以及α-MHC、β-MHC的表达.结果 AngⅡ处理使心肌细胞中[^3H]-Leu掺人增加（P＜0.05）,同时ANF mRNA的表达明显高于正常（P＜0.05）;α-MHC mRNA的表达显著低于正常（P＜0.05）,而β-MHC mRNA的表达显著高于正常（P＜0.05）,α-MHC/β-MHC的比值下降（P＜0.05）.当伊贝沙坦与AngⅡ共同作用于培养的心肌细胞时,与AngⅡ组比较,[^3H]-Leu的掺入明显下降（P＜0.05）,与正常组比无统计学意义（P＞0.05）;同时ANF的表达下降,与正常组比无统计学意义（P＞0.05）;心肌细胞中α-MHC的表达明显增高（P＜0.05）,而β-MHCmRNA的表达显著降低（P＜0.05）,α-MHC/β-MHC的比值上升（P＜0.05）.结论 伊贝沙坦能抑制AngⅡ所致的心肌细胞肥大和细胞中α-MHC向β-MHC表达的转换.     

不同年龄高血压大鼠血管平滑肌中ERK和MKP-1的表达

目的：研究不同年龄的自发性高血压大鼠（SHR）和Wistar Kyoto大鼠（WKY）主动脉平滑肌中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及其磷酸酶（MKP-1）的表达及其与高血压的关系。 方法： 用tail-cuff测量大鼠尾动脉血压；分别用Western blotting法和RT-PCR法半定量测定血管平滑肌中磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）和MKP-1的蛋白表达以及MKP-1 mRNA的含量。 结果： （1）SHR的血压自8周龄起明显高于WKY（P<0.01），且随年龄增长而升高（P<0.05）至14周以后趋于稳定；（2）SHR主动脉平滑肌中的p-ERK表达明显高于同年龄的WKY（P<0.01），随年龄增长而递增（P<0.05），与血压呈正相关；（3）SHR主动脉平滑肌中MKP-1蛋白明显高于同龄WKY，而mRNA的表达在5周龄时明显高于WKY，之后均随年龄的增长而递减（P<0.05），与血压和ERK呈负相关，而WKY下降不明显。 结论： MKP-1在高血压的发生和发展过程中起重要作用，其表达逐渐下降可能是导致ERK激活增加，从而导致血管平滑肌细胞增殖、血压升高的重要原因。     

Early-life epileptiform discharges exert both rapid and long-lasting effects on AMPAR subunit composition and distribution in developing neurons

The perinatal period of brain is characterized by dynamic changes in structure and high propensity for epilepsy. Animal models have shown that alterations of AMPA receptor (AMPAR) assembly or function may be related to seizure-induced cell damage, long-lasting impairments in brain development and seizure threshold. However, effects of earlier epileptiform discharges on AMPAR composition and sub-cellular distribution remain understudied. In this study, we analyzed age-dependent variation of relative GluR1 and GluR2 protein levels in primary cultured rat cortical neurons at 7 DIV, 12 DIV, 17 DIV and 21 DIV. By inducing a single event of epileptiform activity at 6 DIV, we tested the effects of early-life seizure-like insults on AMPAR subunit distribution. We found a significant increase in synaptosomal membrane GluR1 expression in magnesium-free (MGF) medium-treated neurons at each time point detected (p < 0.05), while GluR2 expression increased at 7 DIV, and declined at 17 DIV and 21 DIV respectively (p < 0.05). That is, a trend of high GluR1 with much lower GluR2 expression on the surface membrane of epileptiform discharges experienced neurons over time in culture was presented. These findings in an in vitro model of early-life seizure may inform rodent models of epilepsy, as well as the cellular mechanism involved in epilepsy-associated brain dysfunction.     

无精子症及严重少精子症患者Y染色体AZF微缺失及点突变的研究

目的通过对无精子症和严重少精子症患者Y染色体AZF微缺失的检测,确定AZF微缺失的发生率及高发位点;同时,对正常生育男性、无精子症及严重少精子症患者进行sY254、sY255点突变检测,从分子水平探讨精子发生的机制,建立基因型与表型的关系。方法多重PCR技术对Y染色体上AZF 4个区域内的15个序列标签位点进行微缺失检测,采用SSCP方法进行sY254、sY255点突变检测;结果无精子症和严重少精子症患者Y染色体AZF微缺失率分别为9.80%和9.68%,显著高于少精子症组的3.34%(P<0.05);其中sY152、sY239、sY243、sY254、sY255在Y染色体上的位置相互毗邻,其联合缺失39例,占总缺失率的65.0%,AZFb+AZFd+AZFc联合缺失的有8人,占总缺失的13.3%;本研究中,正常生育男性、无精子症及严重少精子症患者均未发现sY254、sY255的点突变。结论Y染色体AZF微缺失是导致无精子症和严重少精子症的重要因素,sY152、sY239、sY243、sY254、sY255联合缺失是AZF的缺失热点;未发现sY254、sY255点突变。     

急性胰腺炎发病机制和治疗的实验研究进展

在致病因素的作用下，各种消化酶和细胞因子、活性氧簇、内毒素、NF-κB等炎症介质的生成增加以及它们之间的相互作用，共同造成胰腺和远处器官的损伤。急性胰腺炎的治疗以一般治疗、抗氧化剂、生长抑素、糖皮质激素治疗为主，NBD多肽是研究的重点。