土壤环境基因组技术及其在新药发现中的应用

土壤是微生物最重要的生境，土壤微生物具有极大的多样性。然而传统培养技术只能得到约1％的微生物纯培养，其余都是未被纯培养微生物。利用土壤环境基因组技术，可以把未被纯培养微生物的基因克隆到载体中并在宿主中进行表达，获得比已培养微生物丰富的代谢产物多样性，这为我们发现新颖结构先导化合物以及新药开辟了新的道路。本文介绍应用环境基因组技术构建土壤DNA文库的思路和方法。     

糖耐量试验对评价肝癌患者肝脏储备功能的价值

绝大多数肝细胞性肝癌患者合并肝硬变，为预测其对肝切除的耐受性，给正确选择切肝患者提供依据，作者对６２例切肝者和４９例未切肝者手术前后的糖耐量试验（ＯＧＴＴ）和肝组织病理学进行了对比研究。结果：术前ＯＧＴＴ曲地Ｐ型者切肝后恢复顺利；Ｌ型者对肝切的耐受性差，术后易发生肝功能衰竭等并发症，其肝硬化和蔼多为ＣⅢ或ＣⅣ级，曲线形态界于Ｐ和Ｌ型之间的Ｉ型患者２９例用肝门区域血管阻断法切肝，并在阻断血管前使用预     

胸大肌肌皮瓣在口腔颌面部缺损修复中的应用

报道２１９例口腔颌面部肿瘤，其中良性肿瘤１８例，恶性肿瘤２０１例，在肿瘤切除后，均采用胸大肌肌皮瓣修复缺损。采用单皮岛肌皮瓣２０１例，双皮岛肌皮瓣１６例，肌皮骨瓣２例。成功２０１例，失败１８例。讨论了胸大肌皮瓣的优点及适用范围。介绍了手术设计、操作方法。分析了成功与失败的影响因素，认为正确，精细的手术技巧是成功的关键因素。     

慢性低氧大鼠肺动脉内皮素mRNA的表达及定位

目的：探讨慢性低氧大鼠肺动脉内皮素－1基因表达及分布。方法：采用生物素标记cRNA探针，对Wistar大鼠肺动脉进行原位杂交。结果：低氧1周组及低氧2周组大鼠大部分肺动脉内皮细胞ET－1mRNA表达呈阳性信号，而对照组大鼠仅极少数阳性信号（P＜0．01）；低氧1周组大鼠部分显示强阳性信号。低氧1周组及低氧2周组大鼠部分肺动脉平滑肌细胞呈现ET-1mRNA表达阳性信号，而对照组大鼠则无阳性信号表达（P＜0．01及0．05）。结论：慢性低氧对大鼠肺动脉ET－1分泌的影响是在基因转录水平进行，且主要细胞定位在肺动脉内皮细胞，此外还包括肺动脉平滑肌细胞。     

白细胞介素-18基因修饰的胎肝细胞经脾移植对小鼠免疫功能的影响

目的：观察表达mIL-18的重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞（AdmIL-18/BNL.CL2)经脾移植对正常小鼠免疫功能的影响。方法：实验组小鼠经脾移植AdmIL-18/BNL.CL2，同时设LacZ病毒对照组（Ad-LacZ/BNL.CL2),BNL.CL2细胞对照组及空白对照组。2周后处死，留取血清，制备腹腔巨噬细胞、脾淋巴细胞、肝组织匀浆液，提取肝组织总RNA。采用ELISA法检测各组小鼠血清、腹腔Mφ和脾细胞培养上清、肝匀浆中细胞因子的含量；采用半定量RT－PCR法，检测肝组织细胞因子mRNA相对表达量；以LDH释放法测定腹腔Mφ杀伤活性和脾NK细胞活性，用MTT还原比色法测定脾淋巴细胞的增殖活性。结果：实验组小鼠血清、细胞培养上清及肝匀浆中，IL－18、IL－2、IFN－γ、TNF-α稔均高于其它对照组，而IL－4、IL－10水平则低于对照组；半定量RT－PCR结果与ELISA检测结果一致；同时，实验组腹腔Mφ的杀伤活性和脾NK细胞活性，及脾淋巴细胞增殖活性也明显高于对照组。结论：AdmIL-18能有效转染至胎肝细胞并稳定表达mIL-18;AdmIL-18基因修饰的胎肝细胞经脾移植后，可显著提高肝脏、脾脏免疫细胞活性，活化腹腔Mφ，促进Th1类细胞因子表达，抑制Th2类细胞因子的分泌。     

胞嘧啶脱氨酶的原核表达和多克隆抗体的制备

目的：在原核系统中表达并纯化大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase,CD)，制备鼠抗大肠杆菌CD多克隆抗体，方法：亚克隆CD基因到原核表达载体pMAL-c2和pBV222中，并转化入大肠杆菌DH5α内，诱导表达并纯化MBP-CD和6his-CD融合蛋白，用纯化的MBP-CD融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果：通过重组质粒的酶切筛选出重组阳性克隆，成功地表达和纯化出MBP-CD和6his-CD融合蛋白，用纯化的MBP-CD成功制备了鼠抗CD多克隆抗体，并用6his-CD和GST-CD重组蛋白进行Western印迹分析，证实了抗体的正确性，结论：应用多克隆抗体可以检测体内外CD基因的表达，为临床前和临床上深入开展CD基因的生物治疗研究提供重要的实验材料。     

颈丛阻滞、硬膜外阻滞下甲状腺手术应激反应的比较

目的 :比较颈丛阻滞、硬膜外阻滞下甲状腺手术应激反应的大小。方法 :选择ASAⅠ～Ⅱ级 ,女性 ,甲状腺手术患者 30例 ,年龄 2 2～ 5 5岁 ,术前无呼吸、循环和内分泌疾病 ,随机分为颈丛阻滞组 (颈丛组 ) 15例 ,硬膜外阻滞组(硬膜外组 ) 15例 ;颈丛阻滞选用 0 .8%利多卡因和 0 .2 5 %布比卡因混合液 ,以C4一点法行双侧深浅丛阻滞 ;硬膜外阻滞选用 1.3%利多卡因和 0 .15 %丁卡因混合液 ,穿刺点选择C4～ 5或C5～ 6间隙 ,采用侧卧位直入法 ,并向头置管 3cm ;分别测定并记录麻醉前、麻醉后 2 0min、切皮、分上极、切腺体和术毕共六个时点的血糖、血压和心率的变化。结果 :两组病例各时点血糖均逐步上升 ,于分上极、切腺体和术毕血糖值与麻醉前比较有显著性差异 (P <0 .0 1) ;硬膜外组只在分上极时SBP与麻醉前比较有差异外 (P <0 .0 5 ) ,而颈丛组在分上极、切腺体时DBP与麻醉前比较有差异 (P <0 .0 5 ) ,SBP、MAP与麻醉前比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :本研究表明颈丛阻滞、硬膜外阻滞均不能完全抑制甲状腺手术的应激反应 ,在稳定甲状腺手术循环功能方面硬膜外阻滞优于颈丛阻滞     

Laparoscopic Local Resection Based on Sentinel Node Evaluation for Early Gastric Cancer: A Preliminary Report

We previously reported that lymphatic mapping using isosulfan blue can be used to identify sentinel nodes (SNs). This study was undertaken to evaluate the feasibility of using the SN technique in treating early gastric cancer and to explore its usefulness for minimal invasive surgery. Twenty-three patients with early gastric cancer who underwent SN biopsy were retrospectively evaluated. Based on SN evaluation, individualized surgery was performed in five patients with T1N0M0 gastric cancer. When pathological examination of frozen sections revealed metastasis in SNs, we performed a standard D2 gastrectomy. Laparoscopic local resection was applied when the SN biopsy was negative. Our results showed that the success rate with SN biopsy in early gastric cancer was 100%, as were the accuracy, sensitivity, and specificity. All five patients with early gastric cancer had SNs negative for metastases both by frozen section and by postoperative pathology. Thus, all these patients underwent laparoscopic local resection without extended lymphadenectomy. We conclude that SN biopsy is a useful tool to individualize the operative procedure, and laparoscopic local resection can be safely performed using SN guidance in selected patients with early gastric cancer.     

端粒酶逆转录酶、环氧化酶-2在乳腺癌中的表达及其意义

目的 探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)和环氧化酶(cox)-2在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义.方法 使用免疫组织化学法分别检测45例乳腺浸润性导管癌和22例乳腺良性病变标本的hTERT和COX-2蛋白表达情况.结果 hTERT在乳腺浸润性导管癌中阳性表达率fig71.11%,明显高于乳腺良性病变9.09%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).hTERT阳性表达与乳腺浸润性导管癌患者的年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移情况及雌、孕激素表达水平无相关性(P>0.05),与Her-2表达存在显著相关性(P<0.05).COX-2在乳腺浸润性导管癌中的阳性表达率为82.22%,明显高于乳腺良性病变50.00%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).COX-2阳性表达与乳腺浸润性导管癌患者腋窝淋巴结转移情况、Her-2、ER阳性表达有关(P<0.05).在乳腺浸润性导管癌中hTERT阳性表达与COX-2阳性表达呈正相关(r=0.557,P<0.01).结论 hTERT与COX-2在乳腺浸润性导管癌中的表达显著高于在乳腺良性病变中的表达,hTERT与COX-2在乳腺癌的发生、发展中起重要作用.hTERT表达与COX-2表达存在显著相关性,COX-2的过度表达可能是端粒酶激活和调节的机制之一.     

外科交接班存在的问题及对策

对于新病人。护理人员可为病人拟订护理计划并自己执行护理活动。但多数时间。护理人员是连续其他护理人员已执行的护理活动，因此交接班的好坏对护理质量有极大的影响。做好充分的交接班准备和一个能把握住重点的报告，可以得到真实完整的资料，使护理活动一开始就进入良好状况，保证原来护理工作的连续进行，提高护理质量。为此，2004年5月-2006年5月我科开始规范临床护理交接班工作，收到较好的效果。现将工作中存在问题进行分析并提出对策。