重组人Bcl-2腺病毒载体的构建与鉴定

目的　构建人bcl-2重组腺病毒载体。方法　通过酶切分析获得正向插入目的基因的真核表达载体pcDNA/bcl -2 ,然后将bcl -2定向克隆到腺病毒穿梭质粒pAdCMV中 ,通过体内同源重组 ,重组质粒与质粒pJM17共转染 2 93细胞 ,获得复制缺陷型重组腺病毒AdCMV/bcl -2 ,进行扩增、纯化。通过PCR检测病毒DNA ,空斑实验检测病毒滴度。结果　腺病毒穿梭质粒与pJM17体内同源重组后获得含目的基因的重组腺病毒 ,病毒滴度为 2 0× 10 1 0 pfu/ml。结论　基因重组腺病毒载体能成功获得高滴度含目的基因的腺病毒     

足月小样儿的听功能评估

目的　探讨胎儿在母体内营养不良对听觉神经系统发育的影响。方法　对研究组中 19例足月小样儿 (termsmallforgestationalage ,TSGA)和对照组中 2 0例正常体重足月儿母亲的身高、体重、头围、胸围、血红蛋白等方面进行比较 ,再应用丹迪诱发电位仪对出生 3～ 5天的两组新生儿进行听性脑干反应 (auditorybrainstemresponse ,ABR)测试 ,分析ABR的波潜伏期及波间期。结果　研究组中母亲和对照组在血红蛋白含量方面差异有高度显著性意义 (P <0 .0 1) ,而在身高、体重、头围、胸围等方面差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;研究组中新生儿ABR各波潜伏期和波间期均比对照组延长。结论　可以用ABR检测新生儿来反映胎儿在母体内营养不良时对听觉神经系统发育的影响 ,提示注意加强母体的营养     

实时荧光聚合酶链反应定量检测LASIK术后兔角膜纤维连接蛋白1的表达

目的　定量检测纤维连接蛋白 1(fibronectin 1,FN1)在LASIK术后不同时段角膜中的表达水平 ,探讨FN1与LASIK术后早期伤口愈合的关系。方法　 2 0只新西兰白兔 ,左眼按近视 4D行LASIK术 ,右眼作对照组。分别于术后 4、4 8h ,1、2周取角膜 ,荧光半定量PCR方法检测中央手术区及周边非手术区角膜FN1mRNA的表达。结果　LASIK术后 4h左眼手术区FN1的mRNA表达水平比右眼相应对照区明显升高 ,4 8h降低至对照组水平 ,其后随时间的延长无明显改变。结论　实时荧光定量PCR定量检测FN1在角膜中的表达结果提示 ,FN1参与LASIK术后角膜瓣与基质床的粘附过程     

Bcl-2对免疫抑制剂培养中胰岛细胞的保护作用

目的探讨免疫抑制剂对体外培养的大鼠胰岛细胞的毒性作用以及抗凋亡基因Bc l-2对胰岛细胞的保护作用。方法腺病毒介导的基因转染后表达Bc l-2的大鼠胰岛细胞和对照胰岛细胞分别加入不同浓度的他克莫司培养基中,48 h后检测胰岛细胞的凋亡率和分泌胰岛素的功能。结果低剂量和高剂量的他克莫司都能诱导胰岛细胞凋亡,减少胰岛素分泌,Bc l-2能抑制凋亡,改善胰岛素分泌。结论他克莫司对体外培养的大鼠胰岛细胞有直接的损害作用,而Bc l-2能防治这种损害作用。     

经皮经肝穿刺胆道引流管周腹膜组织粘连实验研究

目的探讨经皮经肝穿刺胆道引流管周围组织组织粘连情况及其与时间关系,以期为临床缩短经皮经肝胆道内镜(PTCS)治疗间期的可行性提供科学实验依据。方法雄性小家猪随机分为4组:即术后第3、5、7、14 d共4组。开腹逆行穿刺置管形成模型,观察引流管周围腹膜之间的组织组织粘连情况并分级。结果所有模型管周腹膜间出现组织粘连,注入美蓝未见变色,而除管周外其他腹膜间没有组织粘连。其中3 d组组织粘连以Ⅱ级为主;5 d后各组组织粘连以Ⅲ级为主。经秩和检验统计学分析示3 d组与其他各组比较,差异有统计学意义(D≥176.2,P<0.05);5 d组、7 d组及14 d组组间比较,差异无统计学意义(D<176.2,P>0.05)。结论经皮经肝穿刺胆道引流(PTCD)术后第5 d经皮肝穿刺胆道引流引流管周围己形成完整致密组织粘连。     

不同胎龄人胎脑神经干细胞发育特征探讨

目的:探讨不同胎龄胎脑纹状体神经干细胞的发育特征。方法:收集胎龄16~28周的水囊引产胎儿60例,采用免疫组织化学及光镜技术对人胎脑纹状体神经干细胞的分布、形态以及数量进行检测。结果:不同胎龄胎脑纹状体均存在神经干细胞,神经干细胞主要分布在豆状核和尾状核,内囊处较少,呈圆形、椭圆形、三角形及多角形细胞,以椭圆形细胞多见,细胞有0~3个突起,胞核呈圆形和椭圆形,1~4个核仁不等,大部分细胞染色质疏松,少部分细胞染色质致密。随着胎龄的增加,纹状体神经干细胞逐渐减少。结论:不同胎龄人胎脑纹状体神经干细胞在形态及数量上存在一定的差异,而在分布部位无明显差异。     

吡格列酮对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞中CT-1的影响

目的：观察心肌营养素 1(CT 1)在高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞中的表达，以及吡格列酮对其表达的影响。方法：体外培养乳鼠心肌细胞，分组给药后，检测心肌细胞肥大的指标：心肌细胞的表面积(图像分析法)、蛋白含量(考马斯亮蓝法)、心房利钠因子(ANF) mRNA的表达(RT PCR法)；同时用半定量RT PCR检测CT 1 mRNA的表达。结果：高糖高胰岛素组心肌细胞表面积、蛋白含量、ANF mRNA表达以及CT 1 mRNA水平均升高(P<0.01)，而吡格列酮治疗组降低(P<0.05)。结论：高糖高胰岛素诱导的肥大心肌中CT 1表达上升，而吡格列酮能抑制其表达，推测CT 1可能参与了高糖高胰岛素所引起的心肌肥大的发生，而吡格列酮抑制心肌肥大的作用可能是通过抑制CT 1介导的。     

IRS-1的表达和泛素化在KKAy及C57BL/6J小鼠糖尿病发展过程中的意义

目的:探讨胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白表达和泛素化水平在糖尿病发展过程中的作用。方法:20只8周龄C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(正常饲料喂养,n=10)和胰岛素抵抗组(高脂饲料喂养,n=10)。8周龄KKAy小鼠8只,高脂饲料喂养,为2型糖尿病组。检测各组小鼠体重、血糖和血胰岛素水平。12周后免疫印迹检测各组动物肝组织IRS-1的表达量,同时采用剥离免疫印迹法检测肝组织IRS-1的泛素化水平。结果:高脂喂养12周后C57BL/6J小鼠出现胰岛素抵抗,KKAy小鼠出现肥胖和糖尿病。2型糖尿病组IRS-1的表达显著低于正常对照组和胰岛素抵抗组(P<0.05),而IRS-1的泛素化水平则显著高于胰岛素抵抗组(P<0.05),与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论:2型糖尿病时IRS-1的表达下调,IRS-1泛素化水平增加是导致胰岛素信号转导障碍的重要原因。     

出生体重对学龄前期儿童生长发育影响分析

【目的】分析出生体重对儿童在其婴儿至学龄前期体格发育的影响及其血红蛋白（hemoglobin，Hb）水平改变。【方法】3～6岁儿童268名，孕周〉36周，性别不限。记录人体测量指标：出生体重及6个月、1岁、3～6岁时身高、体重。问卷调查其早期喂养特点包括完全母乳喂养时间、辅食添加起始月份、母亲育龄、家庭经济状况等内容。血液检查测定外周Hb值。按出生体重和性别分成四组，A组（男）和C组（女）出生体重2000～2999g；B组（男）和D组（女）出生体重3000～3999g。【结果】婴儿期B组和D组体重均分别明显高于A组和C组（=P〈0．05）；学龄前期B组和D组身高均分别明显高于A组和C组（P〈0．05）。B组和D组儿童身长、体重均数值位于1995年中国城区儿童身高体重百分位数表P45～P85之间，A组和C组则位于P3～P30之间。出生体重较轻婴儿0～6个月中体重增速快于出生体重较重组（P〈0．05）。出生体重较高的女童（D组）Hb水平轻度降低（110〈Hb〈120g／L）发生率明显高于其他各组（P〈0．05）。【结论】在早期喂养和家庭经济状况相当的情况下．出生体重影响婴儿至学龄前期体格增长。出生体重较轻者易发生长迟缓，追赶生长多发生在O～6个月中。出生体重较高者体格增长较理想，然而在学龄前期较易发生Hb轻度下降，考虑应作为铁营养重点关注人群。     

人工耳蜗植入"井喷"的判断与术中处理的体会

目的：探讨人工耳蜗植入发生“井喷”的术前判断与术中处理的方法。方法：327例人工耳蜗植入患者术前均行颞骨高分辨CT（HRCT）筛查，并行术前准备及术中处理。结果：11例术前颞骨HRCT显示内耳畸形并发内听道底骨性缺损与耳蜗、前庭相通，术中均有脑脊液喷出，经过术中对植入口的严密封闭，术后未见脑脊液耳鼻漏等并发症的发生。结论：人工耳蜗植入发生“井喷”的原因为内耳与蛛网膜腔有异常开放的通道。术前行颞骨HRCT检查不仅能对内耳畸形的患者作出准确的判断，还能为术中进行正确的处理提供准确的科学依据，从而避免并发症的发生。