结核分枝杆菌clpP2抗原表位预测与分析

【摘要】 目的 预测结核分枝杆菌酪蛋白酶蛋白水解亚基单位2（clpP2）的抗原表位,为结核病疫苗、药物研制等提供新的靶点。方法 以clpP2蛋白的氨基酸序列为基础,采用生物信息软件DNA Star预测二级结构;运用SWISS-MODEL在线软件进行同源建模;运用VaxiPred软件综合预测T 细胞抗原表位,用ABCpred、COBEPro和BepiPredPred 软件综合预测其B 细胞抗原表位;采用DNA Star Protean、SignalP、TMHMM在线软件和NCBI数据库分析其免疫学相关信息。结果 clpP2蛋白结构丰富,含有较多潜在细胞毒性T细胞和辅助T细胞表位; 也含有较多的B细胞线性和构象优势表位,这些区域亲水性、表面可能性和柔韧性指数都较高。结论 clpP2蛋白具有诱导免疫应答的潜能,可以作为结核监测、治疗、预防的新靶点。     

平山病的影像学研究进展

 平山病(Hirayama disease)是以单侧上肢远端肌萎缩起病为特点的一种良性自限性疾病。早期因诊断技术限制及临床认识不足导致误诊率较高。近年来由于肌电图和影像学检查手段发展,临床病例增多,平山病逐渐为人熟知。X线、CT可以清晰显示患者颈椎曲度、局部节段稳定性及椎间小关节退变程度、后纵韧带是否骨化,而中立位颈椎MRI示失连接现象及屈颈位MRI发现硬膜前移则是最重要的影像学征象。本文将对平山病的临床表现和肌电图特点作一简要介绍,并对其影像学诊断技术及征象进行详细综述。     

Pure Total Flavonoids from Citrus paradisi Macfad Induce Leukemia Cell Apoptosis In Vitro

Objective

To investigate the potential effect of pure total flavonoids from Citrus paradisi Macfad peel (PTFC) on the proliferation of human myeloid leukemia cells Kasumi-1, HL-60 and K562, and the underlying mechanisms.

Methods

PTFC was extracted from Citrus paradisi Macfad peel and was identified by high performance liquid chromatography. The effect of PTFC on the proliferation and apoptosis of leukemia cells were determined by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, fluorescent microscopy and flow cytometry, respectively. The effect of PTFC on the expression levels of apoptosis-related regulators was determined by Western blot assay.

Results

Treatment with PTFC inhibited leukemia cell proliferation in a dose- and time-dependent manner and triggered Kasumi-1 cell apoptosis. Treatment with PTFC significantly increased the levels of activated poly adenosine diphosphate-ribosepolymerase and caspase-3/-9, but reduced the levels of Mcl-1 expression in Kasumi-1 cells. However, PTFC did not obviously induce HL-60 cell apoptosis.

Conclusion

PTFC inhibited leukemia cell proliferation and induced their apoptosis by modulating apoptosisrelated regulator expression in leukemia cells in vitro.

     

鼻内镜及微型吸切器结合支撑喉镜在声带息肉摘除术中的应用

目的:分析鼻内镜及微型吸切器结合支撑喉镜治疗声带息肉的效果.方法:选取声带息肉病人62例,分别采用传统的支撑喉镜下手术(对照组,30例)和鼻内镜及微型吸切器结合支撑喉镜下手术(观察组,32例)切除,手术均在全身麻醉下进行,术后3~12个月进行随访,观察2组病人的住院时间、临床疗效、复发情况.结果:所有病人手术均一次性成功,观察组住院时间(6.94±0.76)d明显短于对照组(7.83±1.26)d(P<0.01),治愈率为90.6%明显高于对照组的63.3%(P<0.01).结论:鼻内镜及微型吸切器在治疗声带息肉中为病人缩短了住院时间,治愈率明显提高,是此类声带息肉病人较好的手术方式.     

红参发酵产物对高糖下大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质降解的影响

目的：探讨红参发酵产物（FRGE）对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖和细胞外基质（ECM）降解的影响,阐明FRGE对糖尿病肾病（DN）的防治作用及可能机制。方法：将GMCs分为正常对照（NG）组、高糖（HG）组、高糖＋不同浓度（3.75、7.50和15.00 mg·L^-1）FRGE组。四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法观察各组GMCs的增殖率,酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养细胞上清中Ⅳ型胶原蛋白（Col Ⅳ）的水平,蛋白免疫印迹技术（Western blotting）检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶组织抑制物2（TIMP-2）蛋白表达水平。结果：与NG组比较,HG组GMCs增殖率升高（P<0.01）,Col Ⅳ水平升高（P<0.01）,TIMP-2蛋白表达水平上调（P<0.01）,MMP-2蛋白表达水平下调（P<0.01）;与HG组比较,高糖＋不同浓度FRGE组GMCs增殖率均降低（P<0.01）,Col Ⅳ水平降低（P<0.01）,TIMP-2蛋白表达水平下调（P<0.01）,MMP-2蛋白表达水平上调（P<0.01）。结论：FRGE可通过抑制高糖诱导的大鼠GMCs增殖,促进ECM的降解,延缓DN的发生发展。     

HSV-2糖蛋白D在昆虫-杆状病毒表达系统中的表达及免疫原性分析

目的：在昆虫细胞中表达2型单纯疱疹病毒（HSV-2）糖蛋白D（gD2）胞外区基因,检测其免疫原性。方法：以HSV-2病毒基因组为模板,PCR扩增得到gD2片段,构建至杆状病毒质粒Bacmind中,转染sf9细胞,包装重组杆状病毒,收集后连续感染sf9细胞,收获第4代重组杆状病毒（P4）,通过Western blotting法鉴定蛋白表达情况,采用空斑实验检测重组病毒滴度,将P4代重组病毒作为种子大量感染sf9细胞,上清经镍柱亲和层析进行纯化,将纯化后的蛋白在第0、2和4周免疫BALB/c小鼠（gD2组）,以PBS作为阴性对照（PBS组）,ELISA检测小鼠血清中gD2特异性IgG滴度。结果：PCR鉴定和DNA测序,重组表达质粒gD2-Bacmind构建正确,空斑实验检测重组病毒滴度为2.0×10⁹ pfu·mL^-1,纯化的gD2重组蛋白在相对分子质量37000处出现目标条带,纯度达90%以上。第6周gD2组小鼠免疫血清中gD2特异性IgG抗体滴度Log10平均值达到4.34,与PBS组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：利用昆虫-杆状病毒表达系统表达的gD2胞外区蛋白具有良好的免疫原性,可作为HSV-2疫苗的候选。     

丝氨酸羟甲基转移酶2在小鼠肝再生过程中的变化规律及作用

目的 探索丝氨酸羟甲基转移酶2(serine hydroxymethyl transferase 2,SHMT2)在小鼠肝再生过程中的表达规律,以及其对小鼠肝再生是否有促进作用.方法 SPF级C57BL/6小鼠120只分为肝切除组(2/3 PH)、假手术组(SHAM)、腺病毒干扰组(siSHMT2)及注射生理盐水对照组(Control),每组30只;肝切除组下设1、3、5、7、9d5个时相点,每个时相点6只.小鼠肝切除之后分别取1、3、5、7、9d的肝脏组织及血清,采用qPCR、Western blot和免疫组化检测SHMT2及其下游分子甘氨酸脱氢酶(glycine dehydrogenase,GLDC)的变化规律、血清中丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)的浓度.取注射腺病毒干扰SHMT2第5天的肝脏组织,通过Westernblot和观察荧光强度,确定转染效果,并检测血浆中ALT和AST水平,免疫组化检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA).结果 SHMT2及其下游分子GLDC在小鼠肝再生的后第5、7天表达最高,qPCR检测结果显示,SHMT2第5天的表达量是第1天的1.63倍(P＜0.05).在干扰SHMT2之后,小鼠第5天再生肝脏的质量由(0.79±0.13)g降低至(0.63 ±0.ll)g(P ＜0.05),再生度由(36.37±2.21)％降低至(31.33±1.92)％,肝指数由(3.76±0.44)％降低至(3.13±0.29)％,并且肝功能指标ALT由(70.00±9.52) U/L升高至(154.15±16.49) U/L,AST由(140.09±32.85) U/L升高至(403.41±68.63) U/L(P＜0.05),PCNA阳性率从(53.6±2.3)％降低至(39.0±3.2)％(P＜0.05).结论 SHMT2在肝脏再生的后期高表达,促进残肝的再生,其机制可能与增强肝脏对缺血、缺氧的耐受,提高三磷酸腺苷水平有关.     

时间分辨荧光微球免疫层析技术定量检测人血清胃蛋白酶原Ⅰ的实验研究

目的 研制快速定量检测人血清胃蛋白酶原Ⅰ (pepsinogens Ⅰ,PGⅠ)试纸,并评价试纸性能.方法 以包裹有时间分辨荧光的纳米微球作为标记示踪物,运用免疫层析试纸技术,研制PG Ⅰ检测试纸;考察试纸的检测线性、灵敏度、精密度、与对比试剂的符合率.结果 试纸定量检测的线性良好,方程为Y=0.027 9+0.004 8X,r=0.997 8;灵敏度为0.27 μg/L;批内CV小于10％,批间CV11.03％;与市售PG Ⅰ试剂平行检测489份血清样本,有良好的相关性(YTRFIA =0.856 6Xstrip+7.545 6,R2 =0.989 1,P＜0.01).结论 PG Ⅰ时间分辨荧光纳米微球免疫层析试纸操作简单、快速、经济、可定量,满足临床检测血清PG Ⅰ的需求.     

血清学生物标志物对急性呼吸窘迫综合征进展及预后的预测研究

目的 探讨血清学生物标志物对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)早期诊断预警及预后判断的预测效果.方法 采用多中心、前瞻队列研究的方法,从2014年1月开始纳入各中心收治的ARDS与ARDS高危病例.采集患者的人口学资料,检测患者在入组24 h内的血清学指标(sRAGE、CC16、Ang-2、sICAM-1、PAI-1、SuPAR、HMGB1).采用Logistic回归分析对影响高危ARDS患者发展成为ARDS危险因素和影响ARDS预后的危险因素.用ROC曲线比较单个危险因素或联合多个危险因素对ARDS发生的预警及ARDS死亡预后的预测效果,计算其预测的灵敏度、特异度及约登指数.结果 共纳入ARDS患者59例,ARDS高危患者41例.ARDS发生的独立危险因素有HMGB1、sICAM-1、Ang-2、CC16、PAI-1.其中HMGB1预测效果最好(AUC=0.908),其次根据AUC大小顺序为CC16(AUC=0.861),Ang-2(AUC=0.858),PAI-1(AUC=0.801),sICAM-1(AUC=0.773).单指标分析中,敏感度最高的单指标为HMGB1与sICAM-1,皆为79.7％,特异度最高的指标为HMGB1、CC16与Ang-2,皆为87.8％.在联合预测中,HMGB1与Ang-2联合预测,特异度最高,为95.1％,其AUC也为最高(0.92).HMGB1、Ang-2与PAI-1指标联合预测,敏感度最高,为89.9％.多指标联合预测,可以在一定程度上提高对ARDS诊断预测的灵敏度和特异度.对ARDS预后分析,sRAGE与Ang-2是其死亡的独立危险因素.sRAGE(AUC=0.791)比Ang-2(AUC=0.67)对ARDS患者死亡预测效果好.两指标联合可以提高ARDS死亡预测的特异性.结论 在ARDS高危患者中,HMGB1、sICAM-1、Ang-2、CC16、PAI-1是其发展成为ARDS的独立危险因素.HMGB1与Ang-2联合预测有较好的特异性,HMGB1、Ang-2与PAI-1联合预测有较好的敏感性.对于ARDS患者,sRAGE与Ang-2的增高预示着ARDS患者预后不良,两者联合预测可以提高预测的特异性.     

柳州地区502例围绝经期女性阴道微生态失衡状况分析

目的了解本地区围绝经期女性阴道微生态状况,探讨围绝经期女性阴道微生态失衡的因素。方法采用病例对照研究设计,将2017年1月至2018年12月在柳州市妇幼保健院确诊为围绝经期的患者502例为观察组,以同期在本院进行健康体检的1 044例育龄女性为对照组,在月经干净3～7 d后对两组受检者阴道分泌物进行阴道微生态检测及评价。结果观察组女性阴道微生态失衡率为73.71%,明显高于对照组的52.78%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组女性阴道内检出阴道炎的致病菌分别为需氧性阴道炎(AV) 14.94%、念珠菌性阴道炎(VVC) 11.55%、细菌性阴道炎(BV) 19.32%、滴虫性阴道炎(TV) 0.40%,对照组女性阴道内检出阴道炎致病菌分别为AV 12.64%、VVC 12.93%、BV 13.31%、TV 0.38%,除两组间BV比较差异有统计学意义(P<0.05)外,余比较差异均无统计学意义(P>0.05);观察组患者的阴道乳杆菌缺失、菌群密集度低和菌群多样性低比例分别为51.20%、8.76%和8.76%,明显高于对照组的29.50%、2.59%、2.59...