MMP-9和iNOS在胎膜早破胎膜组织中的表达及相关性研究

目的: 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在胎膜早破胎膜组织中的表达及相关性。 方法: 选择2010年4月-2011年1月我院在临产前行剖宫产终止妊娠的孕妇60例,分为早产胎膜早破组(pPROM)、足月胎膜早破组(tPROM)和正常足月妊娠组(对照组),每组各20例,采用免疫组织化学方法检测胎膜中MMP-9和iNOS的 表达,分析其差异性及相关性;同时取静脉血及羊水,应用ELISA法进行MMP-9 定量检测;采用HE染色检测胎膜,分析MMP-9、iNOS与绒毛膜羊膜炎的关系。结果: MMP-9在tPROM组和pPROM组胎膜组织、母血及羊水中的表达水平均高于对照组(P<0.01),iNOS在pPROM组胎膜中的表达水平高于对照组(P<0.01)。绒毛膜羊膜炎孕妇胎膜中的MMP-9(P<0.05)和iNOS(P<0.01)表达水平均高于非绒毛膜羊膜炎,二者呈正相关(P<0.01)。结论: MMP-9和iNOS表达升高与pPROM及绒毛膜羊膜炎的发生相关;MMP-9和iNOS在PROM发病机制中存在关联作用。     

小鼠骨髓源性树突状细胞体外诱导培养方法的比较研究

目的 探讨最佳体外诱导培养小鼠成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)的方法.方法 分离、纯化6周龄C57BL/6小鼠骨髓单核细胞,以含10 %胎牛血清、20 ng/ml重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和10 ng/ml重组小鼠白细胞介素-4(IL-4)的RPM I-1640培养基培养7 d,然后将细胞分成对照未刺激组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激组和TNF-α+脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激组.继续培养48 h后,观察各组细胞形态,检测IL-12、IL-6浓度及细胞表面标志CD11c、CD80、CD86 和MHC Ⅱ.结果 培养9 d后,两刺激组培养的细胞经相差显微镜观察有DC生长.TNF-α刺激组细胞培养上清液中IL-6、IL-12含量显著高于对照组(P＜0.01),但显著低于TNF-α+LPS刺激组(P＜0.05).3组均高表达CD11c,各组间无显著差异;而CD80、CD86和MHCⅡ表达阳性率TNF-α刺激组显著高于对照组(P＜0.01),TNF-α+LPS刺激组显著高于单纯TNF-α刺激组(P＜0.05).结论 联合使用TNF-α与LPS刺激可使DC成熟度提高,分泌IL-6、IL-12增加.     

电磁波的生物学窗效应

本文分别以人的肝癌细胞和动物脑组织为生物学对象，以荧光标记和同位素示踪为实验方法，以激光扫描共聚焦显微镜和液体闪烁计数器为检测仪器，以荧光强度和放射性强度为检测Ca^2 量的特征指标，进行了电磁波生物学非热效应的典型代表--电磁波生物学窗效应的实验研究。两种实验均表明了电磁波生物学频率窗效应和强度窗效应的存在且有相同的窗频率。基于本文的实验研究并结合其他文献的结果，可发现电磁波生物学窗效应具有以下基本特征：(1)不同生物组织都会在15—16Hz左右存在一个频率窗；(2)生物学窗效应既可由ELF(极低频)正弦(调制波)振幅调制的高频电磁波(载波)产生，又可由ELF连续波或ELF脉冲波产生，只是前者的频率窗只体现在调制波频率上而不体现在载波频率上，而且，前者的窗效应频率与后者的窗效应频率是相同的；(3)频率窗分布的一般规律为fn＝(2n 1)fc，式中，n＝0，1，2…，fn为第n个窗频率，fc为基频即最低的那个窗频率。实验研究还表明，这-分布规律在0—135Hz范围内是正确的，且基频fc≈15—16Hz；(4)只有特定频率参数与特定强度参数恰当组合的电磁波才能产生生物学窗效应，或者说，窗效应是电磁波频率和强度的二元函数。     

RNA干扰对过表达Hlrg的Hep G2细胞的影响

为观察RNA干扰对过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞的影响,构建了封闭Hlrg基因表达的shRNA表达载体pAVU6+27-Hlrg,将pAVU6+27-Hlrg稳定转染到过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞中;分别用相差倒置显微镜、FCM、SABC-FITC、RT-PCR、Western blot等观察细胞改变。测序结果表明pAVU6+27-Hlrg构建成功;针对Hlrg的RNA干扰已完成;相差倒置显微镜发现细胞突起增加;FCM显示干扰组G1期明显缩短。针对Hlrg的RNA干扰能促进过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞的生长。     

重组hCGPx腺病毒对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧再复氧损伤的保护作用

目的:研究重组腺病毒介导的人胞质型谷胱甘肽过氧化物酶(hCGPx)转染对人肾小管上皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用。方法:将含hCGPXcDNA的质粒pGEM-T-hCG-Px和重组腺病毒穿梭质粒pACCMV-pLpA重组,构建pACC-MV-hCGPx穿梭质粒后,与包装质粒pJM17共转染293细胞,构建重组腺病毒AdCMV-hCGPx。以重组腺病毒载体AdCMV-hCGPx转染体外培养的人肾小管上皮细胞株HK-2,以转染空载体的HK-2细胞为对照组,检测转染细胞中CGPx的表达水平。将HK-2细胞经缺氧再复氧损伤处理后,分别检测细胞的存活率、凋亡率及死亡率。结果:各转染组细胞中CGPx的表达率显著高于对照组(P<0.01)。经缺氧再复氧损伤处理后,AdCMV-hCGPx转染组细胞的存活率较对照组明显增强,死亡细胞明显减少,细胞凋亡明显受到抑制。结论:重组腺病毒介导的hCGPx转染人肾小管上皮细胞可保护缺氧再复氧引起的损伤。     

结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达

目的：检测大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）模型不同时期，肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）、转化生长因子β1（TGF-β1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达，观察比较在间质纤维化不同阶段，3者的动态变化及关系。 方法： 采用雄性SD大鼠36只，分为假手术组和模型组，模型组行左侧输尿管结扎术，再分3、7、14、21和28 d共6组，每组6只，于各时点处死大鼠，取肾组织，常规HE、Masson染色，按小管间质损害的特征进行半定量评分。免疫组化检测CTGF、TGF-β1和α-SMA表达。 结果： 随梗阻时间的延长，小管间质纤维化加重，28 d间质已基本被纤维化组织所代替。随间质纤维化程度的加重，CTGF和α-SMA表达逐渐增加，两者与小管间质损害积分呈正相关，CTGF与α-SMA的表达之间也呈正相关。TGF-β1表达在7-14 d达高峰后，逐渐减少，但仍高于对照组。 结论： UUO致CTGF表达增加可能与TGF-β升高有关，CTGF可能通过促进间质中肌成纤维细胞的形成而参与肾间质纤维化。     

中华眼镜蛇毒组分H对实验性动脉粥样硬化的影响

本实验在新西兰兔食饵性动脉粥样硬化模型上,观察了中华眼镜蛇毒组分H预防性给药和治疗性给药对血清胆固醇、过氧化脂质及一氧化氮的影响。发现组分H(2mg·D-1)与2%胆固醇同时喂服或喂胆固醇4周后以组分H(4mg·D-1)治疗数周,均能有效抑制高脂所致的一氧化氮降低和过氧化脂质升高,并能保护超氧化物歧化酶活性和降低血清总胆固醇及甘油三酯的水平。     

维拉帕米-普鲁卡因合剂防治危重手术后急性呼吸窘迫综合征的临床观察

目的观察维拉帕米普鲁卡因合剂(维普合剂)防治危重患者手术后急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的效果,探讨适宜推广应用防治ARDS的简便、实用、价廉方法。方法符合ARDS高危因素的各科危重手术患者150例,在常规基础综合治疗基础上随机分为3组:维普合剂组给予质量分数为5%的葡萄糖500ml+普鲁卡因1250mg+维拉帕米10mg;普鲁卡因组给予5%葡萄糖500ml+普鲁卡因1250mg;对照组仅给予5%葡萄糖500ml。3组均以0.5ml·h-1·kg-1持续静脉滴注,确诊急性肺损伤(ALI)或ARDS后,维普合剂组和普鲁卡因组的普鲁卡因和维拉帕米剂量均加倍,滴速不变。均应用金科威UT4000F持续无创监测血压(BP)、心电图(ECG)、脉搏血氧饱和度(SpO2)、呼吸及体温,间断测定动脉血气分析和外周血常规。依据全身炎症反应综合征(SIRS)、ALI与ARDS诊断标准确定诊断,并进行SIRS评分和急性生理学与慢性健康状况(APACHE)评分。结果维普合剂组、普鲁卡因组和对照组24hSIRS确诊数分别为11例、26例和42例,组间比较差异均有显著性(P均<0.01);术后72h3组ALI确诊数分别为4例、7例和19例,维普合剂组与普鲁卡因组组间比较差异无统计学意义,维普合剂组和普鲁卡因组与对照组比较差异均有显著性(P均<0.01);术后2周仅对照组有12例确诊ARDS,其中5例并发多器官功能衰竭后死亡,     

心脏直视手术过程中循环细胞因子的变化及其与术后肾、肺功能改变的关系

目的观察心脏手术患者体外循环(CPB)过程中循环促炎症细胞因子和抗炎症细胞因子的动态变化及其与术后肺、肾功能变化的关系。方法南方医科大学南方医院选择2002年10月～2003年12月15例风湿性心脏病(RHD)患者,在换瓣术前、手术过程中及术后不同时间点测定血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)、C-反应蛋白(CRP)水平,并观察循环细胞因子水平与肾、肺功能变化的关系。结果①CPB开始后TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-10、IL-1ra水平均较术前明显升高(P均<0.05),促炎症因子TNF-α、IL-6水平在CPB结束时达峰值。而IL-8水平在CPB结束后2h达峰值;抗炎症因子IL-10在CPB结束时均达峰值,IL-lra在CPB结束后2h达峰值。CRP水平于CPB结束后第二天达峰值,为(141.14±27.81)mg/L。CPB结束时,IL-8和IL-6均与IL-10呈正相关(r=0.509,P<0.01;r=0.418,P<0.01),IL-6还与CRP呈正相关(r=0.452,P<0.01);②CPB结束后第一天,2/15例发生急性肾衰竭,9/15例尿蛋白超过正常上限,所有患者N-乙酰-β-D-葡萄糖酐酶(NAG水平均升高。尿NAG酶水平与CPB结束后的TNF-α水平存在正相关(r=0.501,P<0.01)。Ccr与术后CRP呈负相关(r=-0.404,P<0.05)③CPB结束时气道平台压(PPlateau)已明显升高,CPB结束后1h达峰值,明显高于术前水平,P<0.01。气道峰压(PPeak)在CPB结束后1h亦明显高于术前,P<0.01。CPB结束后1h的TNF-α水平与PPeak呈正相关(r=0.472,P<0.01)。结论心脏换瓣术过程中循环促炎症细胞因子、抗炎症细胞因子均明显升高,细胞因子IL-6水平与全身炎症反应标志物CRP呈正相关。促炎症因子水平与术后肾、肺功能损害密切相关,提示清除循环炎症因子可能是防治心脏手术后肾、肺损害的干预方法。     

应用基因芯片检测乙型肝炎病毒基因变异

目的探讨利用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒(HBV)前C区/BCP区以及P区基因变异的临床意义。方法应用基因芯片技术检测220例不同临床类型乙肝患者的血清前C区n t1896、1814,HBVC区基因启动子(BCP)n t1762和1764以及P区n t552、528位点的变异。结果220份血清中未检出1例n t1814突变,n t1896变异率为19.09%(42/220)。其中HB eA g阳性n t1896的变异率为21.4%(9/42),HB eA g阴性n t1896的变异率为78.6%(33/42),后者变异率显著高于前者。BCP双变异的检出率为69.09%(152/220),轻度、中度、重度慢性乙型肝炎、肝硬化以及肝癌患者中BCP双变异的检出率分别为21.88%(7/32),66.67%(56/84),100%(28/28),100%(76/76)。BCP双变异阳性与阴性组相比,ALT、A ST、HBVDNA无明显差异,TB il、ALB、CHE相差有显著性。P区YM DD基序n t552、528位点变异率为5.45%(12/220)。结论利用基因芯片对同一份标本可同时检测多位点的变异,快速方便,具有一定的临床应用价值。