B型钠尿肽基因的克隆和原核表达载体构建及纯化

目的: 克隆人B型钠尿肽(脑钠素,B-type natriuretic peptide,BNP)基因,纯化其表达蛋白并制备多克隆抗体。方法: 用PCR技术从正常成人心脏组织cDNA库中扩增出人BNP基因,将其克隆进pUCm-T中并测定核苷酸序列。构建大肠埃希菌分泌性表达载体pGXE4T-2/BNP,用异丙基β硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,GSH-agarose亲和纯化表达蛋白,用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。结果: 经PCR扩增成功获得96bp的BNP基因,测序正确,在大肠埃希菌中融合表达后,该蛋白的表达量占菌体总蛋白的19%,用SDS-PAGE和Westernblot鉴定大肠埃希菌中的表达产物,显示其相对分子量29500。经亲和纯化后GST-BNP的纯度可以达到95%,500ml菌液中得到纯化蛋白9.6mg。多克隆抗体的效价为1:32000。结论: BNP基因的克隆、表达和纯化成功以及多抗的获得,为建立BNP检测方法奠定了基础。     

大黄及牛黄解毒片大鼠给药后血浆中大黄活性成分的药代动力学比较研究

考察大黄及牛黄解毒片给药后大黄活性成分在大鼠体内药代动力学行为的差异。大鼠分别灌胃给予大黄生药材96 mg/kg(含总蒽醌1.83 mg/kg,相当于大黄酸0.28 mg/kg、大黄素0.30 mg/kg、大黄酚0.81 mg/kg、芦荟大黄素0.23 mg/kg及大黄素甲醚0.20 mg/kg)及牛黄解毒片250 mg/kg(含总蒽醌与大黄生药材等量,相当于大黄酸0.33 mg/kg、大黄素0.38 mg/kg、大黄酚0.71 mg/kg、芦荟大黄素0.24 mg/kg及大黄素甲醚0.17 mg/kg),血浆经甲醇沉淀后,采用LC-MS/MS法测定大黄活性成分血药浓度,WinNonlin 7.0软件计算药代动力学参数。大鼠灌胃大黄及牛黄解毒片后,大黄酸的c_max分别为(121±103)及(474±251)μg/L,AUC0-t分别为(275±176)及(406±194)μg·h/L;大黄酚异构体的c_max分别为(2 325±1 390)及(3 580±2 169)μg/L,AUC0-t分别为(8 170±2 661)及(8 856±4 023)μg·h/L;仅在牛黄解毒片给药大鼠血浆中检测出大黄素,且牛黄解毒片给药后大鼠血浆中大黄酸的c_max、AUC及t1/2,大黄酚异构体的Vd及CL与单味大黄相比显著增加,大黄酚异构体的t_max显著下降。实验结果表明,牛黄解毒片复方配伍增强了大黄活性成分在大鼠体内的吸收利用,改变了大黄活性成分的药代动力学行为。     

X线透视引导下经纤维支气管镜检查对肺孤立性病变的诊断价值

目的:比较有和无X线透视引导下经纤维支气管镜(纤支镜)检查对肺孤立性病灶的诊断率。方法:236例有孤立性肺结节和肿块(SPN/M)的患者分为两组:Ⅰ组(166例)在X线透视引导下行经纤支镜肺活检,Ⅱ组(70例)根据影像学解剖定位,无X线透视引导下行经纤支镜肺活检,比较两组的诊断阳性率,分析影响阳性率的相关因素。结果:Ⅰ组和Ⅱ组经纤支镜检查的阳性率分别为71.1%和52.9%(2χ=3.96,P<0.05)。两组中病灶直径>4cm亚组患者纤支镜诊断阳性率均明显高于直径<2 cm亚组(2χ=6.76,P<0.01和2χ=9.08,P<0.005)。在直径≤2cm和2.1~4 cm的肺恶性病灶患者中,Ⅰ组纤支镜检查的阳性率均明显高于Ⅱ组(2χ=4.06,P<0.05和2χ=4.72,P<0.05)。位于距离肺门较远的肺外周区和中间区的恶性和良性病灶,Ⅰ组的阳性率要明显高于Ⅱ组(2χ=4.67,P<0.05和2χ=8.28,P<0.005)。结论:对于直径在2~4 cm范围,位于肺外周和中间区的SPN/M,选用X线透视引导下经纤支镜肺活检有助于提高诊断阳性率。     

73例外周T细胞淋巴瘤患者临床特征及预后分析

目的:对外周T细胞淋巴瘤的临床特征、治疗和预后情况进行分析,探讨该病预后的因素.方法:回顾性分析外周T细胞淋巴瘤的73例患者的临床资料.确诊时中位年龄为42岁,男55例,女18例.治疗前病程中位数3月,接受化、放疗综合治疗5例,单纯化疗65例.自体移植3例.结果:3年及5年生存率分别为38%和22%;,随着Ann Arbor分期增高,生存率明显下降;有B症状(发热、消瘦、盗汗)或国际预后指数(international prognostic factors index,IPI)评分≥2者,其生存率分别显著低于无全身症状者或IPI评分＜2者.血清糖类抗原125(CAl25)或D-二聚体(D-dimer)升高者对化疗反应较差.结论:外周T细胞淋巴瘤是一类侵袭性强、预后不良的疾病.其临床特征、Ann Arbor分期、IPI及B症状是影响预后的重要因素.CA125和D-dimer也对预后有影响.     

恒河猴肌注新型重组人肿瘤坏死因子的药代动力学

目的　研究新型重组人肿瘤坏死因子 (nrh TNFα)在恒河猴体内的药代动力学行为 .方法　采用 EL ISA法测定恒河猴 im nrh TNFα后的血药浓度 .结果　恒河猴按 40 μg·kg- 1 剂量 im nrh TNFα后 ,血液中的平均达峰时间为 1.7h;峰浓度的个体差异较大 ,范围为 5 75～ 112 0 ng· L- 1 ,平均峰浓度为 833ng· L- 1 ;药物在血液中的消除符合一房室模型 ,半衰期 T1 / 2 为 1.4～ 2 .4(平均 1.9) h.结论　 nrh TNFα im后 ,能被恒河猴吸入血 ,在血液中的消除符合一房室模型 ,在灵长类动物恒河猴的药代动力学行为与啮齿类动物小鼠的相类似 ,但吸收入血和消除均较小鼠的慢     

国产番泻叶的泻下及抗骨质疏松作用研究

目的：探讨国产番泻叶的泻下及雌性激素样抗骨质疏松作用。方法：比较国产与进口商品番泻叶提取物对小鼠排便和肠蠕动作用的影响,观察其泻下通便的效果。并通过观察对去势雌性小鼠动情周期、子宫重、股骨重的变化和血钙、血磷、降钙素含量的影响,研究由国产番泻叶制备而得的番泻总苷提取物的雌性激素样抗骨质疏松作用。结果：两种商品番泻叶提取物与生理盐水对照组相比均能显著增加墨汁推进率、缩短首次排便时间,增加6h排便量,两种商品之间无显著性差异。由国产番泻叶制备而得的番泻总苷提取物能缩短去势小鼠动情周期,有雌性激素样促进子宫增生和骨质钙化的作用。结论：国产番泻叶具有较好的泻下通便作用,并初步发现其具有雌性激素样抗骨质疏松作用。     

外泌体对过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化能力促进作用的研究

目的　探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）通过外泌体促进BMSCs向心肌细胞分化的能力。方法　2016年1—6月选取健康4周龄SPF级C57BL/6小鼠10只,通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4的BMSCs,并加入基因开启剂多西环素（DOX）。采用ExoQuick-TC提取分泌的外泌体。将GATA-4-BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养（A组）、空载体-BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养（B组）、BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养（C组）、BMSCs单独培养（D组）及小鼠心肌细胞单独培养（E组）72 h,采用荧光染色定性检测和反转录聚合酶链式反应（qPCR）定量检测肌钙蛋白T（cTnT）、α肌动蛋白（α-actin）、Connexin 43、肌间线蛋白（Desmin）的表达。结果　免疫荧光定性检测结果显示,A组GATA-4-BMSCs-外泌体与BMSCs共同培养72 h可见细胞核被DAPI染为蓝色,表达出绿色的cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin;B、C、D组可见细胞核被DAPI染为蓝色,没有表达出绿色的cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin;E组可见细胞核被DAPI染为蓝色,表达出绿色的cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin。qPCR法检测结果显示,5组cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin表达水平比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;其中E组cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin表达水平较A组升高;A组和E组cTnT、α-actin、Connexin 43、Desmin表达水平较B组、C组和D组升高（P<0.05）。结论　过表达GATA-4的BMSCs分泌的外泌体可以有效促进BMSCs向心肌细胞分化。     

铁蓄积骨质疏松模型凝血状态及微血栓和血管密度变化的研究

目的：了解铁蓄积骨质疏松模型中凝血状态、微血栓、微血管床及骨密度的变化,探讨骨质疏松范畴铁蓄积对凝血功能、血管方面的影响。方法：选取健康24只6月龄雄性SPF级SD大鼠,体重（250±20）g,随机分为对照组和铁蓄积组,每组12只。铁蓄积组用枸橼酸铁（ferric ammonium citrate,FAC）90 mg/kg腹腔注射干预,对照组采用等体积生理盐水腹腔注射,每周2次,干预9周。干预完成后,检测两组血清铁蛋白、凝血功能、微血栓、血管密度及股骨远端骨小梁三维形态重建和空间结构参数,并进行统计学分析。结果：铁蓄积组血清铁蛋白（136.36±35.41）μg/L较对照组（68.44±16.86）μg/L显著升高,铁蓄积组骨密度（0.167±0.024）g/cm³较对照组（0.400±0.030）g/cm³显著下降;铁蓄积组的纤维蛋白原（2.03±0.13）g/L较对照组（1.78±0.46）g/L明显升高,D-二聚体含量（534.95±31.81）ng/ml较对照组（329.02±84.99）ng/ml明显增高（P<0.05）,而凝血酶时间（39.64±2.18）s和凝血酶原时间（8.70±0.39）s较对照组（44.92±2.98）s、（9.44±0.49）s明显缩短（P<0.05）;墨汁染色后,铁蓄积组的微血管密度（17.46±2.07）%较对照组（23.81±2.98）%明显缩小（P<0.05）。HE和MSB染色均显示铁蓄积大鼠骨髓中存在微血栓,同时在心肌中也存在微血栓。结论：在铁蓄积影响的骨质疏松模型中,铁蓄积对凝血功能有显著影响,血液相对呈高凝状态,骨血管床减少,骨髓中有微血栓存在,血液的高凝状态及微血栓的形成可能是铁蓄积骨质疏松症发生的重要影响因素。     

乌司他丁对体外循环心脏手术患者体内TNF-α和中性粒细胞弹性蛋白酶的影响

目的:探讨围麻醉期乌司他丁对体外循环(CPB)下行心脏手术患者体内TNF-α和中性粒细胞弹性蛋白酶(PMNE)的影响。方法:择期心脏瓣膜置换患者24例,随机分为乌司他丁组(U组)和对照组(C组)。U组患者在麻醉后和转机时分别静脉泵注乌司他丁,泵注时间均为1 h。C组患者则给予等容积的生理盐水代替。分别于麻醉后手术前(T1),体外循环开始后30 min(T2),体外循环结束后1 h(T3),4 h(T4)和20 h(T5)抽取颈静脉球血。采用ELISA法测定颈静脉球血TNF-α和PMNE的浓度。结果:与各自T1相比,两组患者血浆TNF-α的浓度在T2,T3,T4,T5明显升高(P<0.01或P<0.05),T4达到高峰,T5开始下降。TNF-α的浓度C组在T2,T3,T4,T5时明显高于U组。C组患者颈静脉球血PMNE浓度在体外循环开始后均明显升高(P<0.01);U组则在T2,T3,T4明显升高(P<0.01),T5回落接近手术前但高于手术前水平(P<0.05)。而C组的PMNE浓度在T2,T3,T4,T5时升高幅度明显高于U组(P<0.01)。结论:乌司他丁可减轻CPB心脏手术患者体内的炎性反应,从而可能对CPB后机体损伤有一定的保护作用。     

"三镜"微创治疗胆总管结石的临床研究

目的探索胆总管结石的"三镜"微创治疗方法。方法对52例胆总管结石患者根据不同的胆管结石状况而采取"一镜"、"二镜"或"三镜"联合的不同治疗方式进行取石。结果26例经"一镜"治疗者,成功18例,成功率69.0%;15例经"二镜"治疗,成功12例,成功率80.0%;21例经"三镜"治疗,术后无并发症,成功率100%。结论腹腔镜、胆道镜和十二指肠镜的胆总管结石治疗均具微创性,"三镜"联合方式可弥补"一镜"和"二镜"治疗方式的不足,据胆管结石的不同状况而适时选取不同的三镜联合治疗方式,均可达到取净结石、降低手术风险、减少术后并发症和降低住院费用的目的。