HA/PDLLA复合材料的体内成骨过程研究

目的研究HA／PDLLA复合材料植入体内后与细胞、组织的相互作用，探讨HA／PDLLA复合材料在体内的成骨过程，为其临床应用及设计具有生物功能的人工骨替换材料和骨组织工程支架材料提供依据。方法采用液相吸附法制备了HA／PDLLA复合材料，以纯PDLLA和空白组进行对照，进行体内植入实验，通过组织学观察和四环素标记考察其成骨过程。结果HA／PDLLA复合材料植入机体后，体内的无菌性炎症轻微，新骨形成速率高于PDLLA材料。HA微粒的存在，加强了复合材料的机械强度，使之可以避免过早的丧失力学强度。第24w时，材料被组织分隔包裹，新生骨组织长入材料，骨愈合情况良好。结论HA／PDLLA复合材料具有良好的生物相容性、生物降解性能、生物学活性和骨传导性能。     

医源性血管损伤的预防和术中处理

目的：总结手术中发生医源性血管损伤的处理经验。方法：10例在外科手术中损伤血管的患者,其中门静脉,下腔静脉、髂总静脉损伤各2例,股总静脉、颈总动脉、腋静脉、腘动脉损伤各1例。行血管修补术5例,行端-端吻合术1例,自体静脉移植术1例,人工血管移植1例,钳夹止血1例,血管结扎1例。结果：本组痊愈8例;死亡2例,其中下腔静脉损伤止血失败死亡1例,颈总动脉损伤结扎死亡1例。结论：医源性血管损伤重在预防,一旦发生血管损伤,迅速有效地控制出血是手术成功的关键,血管修补或吻合术疗效良好。     

9602对脑缺血再灌大鼠海马CA1区诱发电位与形态学改变的影响

目的:探讨脑缺血再灌注后海马CA1区诱发群峰电位的变化与形态学改变的关系及中药9602的影响。方法:在整体脑缺血再灌注后不同时间制备的海马脑片上,记录CA1区诱发群峰电位(PS)的变化。采用TUNEL,Nissl染色法进行形态学检测。结果:脑缺血再灌组诱发PS的阈强度明显大于假手术组,波幅显著减小;加条件刺激后PS增幅显著低于假手术组,持续时间缩短。上述变化始于脑缺血再灌后8h,随再灌时间的延长而加重。海马CA1区再灌后8h起TUNEL阳性细胞明显增多,24h达高峰,异常细胞8h最多,随后降低并在低水平持续到7d,细胞总数随再灌时间的延长逐渐减少。中药9602明显降低缺血再灌脑片PS阈强度,增大PS波幅;加大条件刺激后PS增幅并延长持续时间;明显减少海马CA1区的TUNEL阳性细胞数,阻止CA1区细胞数的减少。结论:脑缺血再灌后海马CA1区神经细胞兴奋性和反应性降低,与脑缺血再灌后迟发性神经元死亡(DND)有关,细胞凋亡起重要作用。9602明显改善CA1区神经细胞的兴奋性和反应性,可能与其抑制脑缺血再灌诱导的细胞凋亡,减轻DND的发生有关。     

胎儿泌尿系畸形介入性产前诊断

目的探讨胎儿泌尿系畸形的发生与染色体异常、宫内感染的关系.方法在超声介导下对56例泌尿系畸形胎儿抽取脐带血行染色体核型分析,同时采用多聚酶联反应 (polymerase chain reaction,PCR)方法检测TORCH宫内感染.结果①5例胎儿染色体异常,染色体异常率为8.93%,除1例异常核型为单纯泌尿系畸形外,其余4例均合并有其他器官异常;②胎儿脐血检测发现巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染5例,风疹病毒(rubella virus,RV)感染2例,弓形体(toxoplasma,TOX)感染2例,单纯疱疹病毒 (herpes simplex virus,HSV)感染2例,宫内TORCH感染发生率为19.64%.结论染色体异常是引起胎儿泌尿系畸形的重要原因之一,对所有泌尿系统畸形胎儿应行染色体核型分析;而某些宫内感染,尤其是CMV感染,可能引发胎儿泌尿系统畸形.     

胚胎干细胞源性肝干细胞在治疗性肝再生中的应用

目的： 应用治疗性肝再生模型进行胚胎干细胞(ESC)源性肝干细胞肝内移植, 观察其在肝组织替代、体内的生长分化及成瘤性等情况，为ESC移植在难治性肝病治疗中的临床应用提供实验依据。方法： 倒千里光碱+70%肝部分切除建立BALB/c小鼠的治疗性肝再生模型。用荧光示踪剂CFDA SE 标记移植细胞，将经淤胆血清“病理微环境”筛选体系筛选出的ESC源性肝干细胞经门静脉移植入治疗性肝再生模型小鼠肝内。然后荧光显微镜下观察，检测移植细胞体内分布、整合与肝细胞替代、体内生长分化等情况。2周后行白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)、血清白蛋白水平检测其功能状况。并通过观察其体内成瘤性对筛选出的ESC源性肝干细胞的安全性进行评估。结果： CFDA SE标记的ESC源性肝干细胞肝内移植1周，受体小鼠肝实质内可见散在绿色荧光分布。2周后，肝实质内绿色荧光分布区域明显扩大，且可见类似肝索样结构排列。共焦白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)结果表明，受体小鼠肝组织内可见标记细胞表达白蛋白阳性信号（呈黄色荧光），血清白蛋白水平则无明显差异（P>0.05）。6周内未见畸胎瘤形成，而将未分化的ESC移植入小鼠腋区皮下6周后则可见畸胎瘤形成。结论： 经淤胆血清“病理微环境”筛选体系筛选出的ESC源性肝干细胞移植入治疗性肝再生模型小鼠肝内后可有效整合入宿主肝板、在肝内能进一步生长分化并部分表达肝细胞功能。其安全性较好，6周内未见畸胎瘤形成。     

登革病毒Ⅱ型NS1基因在小鼠体内诱导的DNA免疫

目的　研究含有登革病毒Ⅱ型NS1基因的重组质粒肌内注射小鼠后在其体内诱导的细胞和体液免疫。方法　用含有登革病毒NS1基因的真核表达质粒pCNX2 NS1于小鼠胫前肌注射并加强免疫 2次。然后定期处死 ,采集血液标本以及小鼠脾细胞 ,检测小鼠的体液和细胞免疫。结果　在末次免疫后 4周检测到小鼠抗NS1抗体 ,并且检测到小鼠CD4 、CD8 亚群的变化。结论　含有登革病毒NS1基因的真核表达质粒pCNX2-NS1免疫小鼠后 ,可以诱导小鼠产生针对NS1的稳定特异性体液、细胞免疫     

CD40L表达在异基因造血干细胞移植中GVHD发生的意义

目的：初步探讨在异基因造血干细胞移植（HSCT）中发生移植物抗宿主病（GVHD）患者DC40L表达的变化以及意义。方法：HSCT治疗重型β-地中海贫血（n=12）和遗传性溶血性贫血（n=1）成功植入的儿童患者，其中脐血移植（UCBT）8例，异基因外周血造血干细胞移植(allo-PBSCT)5例，在移植前、移植后发生GVHD时采用流式细胞仪检测和比较外周血中CD40L和CD40的表达。结果：3例UCBT无GVHD，其余均发生了Ⅰ-Ⅳ度急性GVHD。急性GVHD发生时CD4^ CD40L^ 和CD8^ CD40LT细胞表达明显升高，allo-PBSCT者更明显；慢性GVHD发生时患者的CD40L^ 、CD25^ 和CD69^ 在CD4^ 和CD8^ T细胞上的表达亦增加。CD19^ CD40^ B细胞的表达在UCBT和allo-PBSCT的3个月内则一直处于低于正常的水平。结论：CD40L高表达与GVHD的发生相关，提示CD40-CD40L共刺激途径在GVHD的发生中可能起着重要作用。     

骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗塞的实验研究

目的研究自体骨髓间充质干细胞(MSC)经冠脉内注射治疗急性心肌梗死(AMI)的有效性和可行性。方法球囊阻塞法制成AMI模型。经冠脉注入标记的MSC,4周后核素心肌断层显像检测相对心肌梗死面积、心肌灌注评分和射血分数,经导管检测左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、压力升高最大速率( dP/dt)和压力下降最大速率(-dP/dt)。免疫荧光法分析MSC的植入和分化。结果与对照组相比,细胞治疗组射血分数显著增加(P<0.05),心肌灌注评分和相对心肌梗死面积显著降低(P<0.01,P<0.05),LVSP、 dP/dt和-dP/dt显著增加(P<0.05,P<0.01,P<0.01),LVEDP显著降低(P<0.05)。标记的MSC在心肌中阳性表达肌凝蛋白重链、连接蛋白43、平滑肌肌动蛋白和Ⅷ因子相关抗原。结论MSC在体内分化为心肌和血管组织,可改善AMI猪的心功能。     

启动子区5′CpG岛去甲基化对人结肠癌细胞生物学表型的影响

目的：探讨DNA启动子区5′CpG岛甲基化状态与人结肠癌RKO细胞增殖凋亡等生物学特征的关系。方法： 应用特异性DNA甲基转移酶（DNMTs）抑制剂-5-氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-2′-deoxycytidine，5-Aza-CdR）处理肠癌RKO细胞72 h，甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）及DNA测序法分析p16/CDKN2基因CpG岛甲基化状态；MTT、FCM、荧光染色及透射电镜检测启动子区去甲基化后细胞生长、形态和细胞周期凋亡的影响。 结果： DNMTs抑制剂能较好地逆转启动子区胞嘧啶甲基化状态；CpG岛去甲基化后能明显地抑制肠癌细胞的生长，增加细胞群体倍增时间（P<0.01），诱导肠癌细胞凋亡，影响肠癌细胞周期分布，并具有良好的量效依赖关系。 结论： 通过逆转CpG岛高甲基化能有效地抑制肠癌细胞增殖，为临床治疗大肠癌提供新的作用靶点。     

妊娠17～37周胎儿可溶性白介素2受体和NK细胞含量的变化

目的：探讨妊娠17～37周正常和宫内感染时胎儿外周血可溶性白介素2受体（Soluble interleuldn-2 receptor，sIL-2R）和自然杀伤细胞（Natural killer，NK）含量的变化。方法：超声引导下行脐带穿刺术，收集129例胎儿外周血，包括97例正常对照组胎儿血，32例宫内感染组（单纯疱疹病毒感染、弓形虫感染、风疹病毒感染）胎儿血，采用双色免疫荧光标记流式细胞仪技术测定胎JLPF周血NK细胞百分率，双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定胎JLPF周血中sIL-2R的含量，分析生理状态下胎儿外周血NK细胞、sIL-2R的状况和宫内感染时NK细胞和sIL-2R含量的变化。结果：妊娠17—37周胎儿外周血NK细胞、sIL-2R含量不随孕周改变，r（NK）=-0．03，P〉0．05；r（sIL-2R）=0．167，P〉0．05，宫内感染时NK细胞含量减少，sIL-2R含量增多，与正常对照组相比差异有显著意义；t（NK）=4．29，P〈0．01；t（sIL-2R）=-5．833，P〈0．01。结论：妊娠17—37周胎儿外周血有一定量的NK细胞和sIL-2R存在，但机体免疫功能仍不完善，宫内感染时机体容易出现免疫抑制状态。