PTEN基因联合奥沙利铂对胆管癌细胞生长抑制的研究

目的探讨脂质体介导PTEN基因转染人胆管癌细胞（QBC939）,联合化疗药物奥沙利铂（L-OHP）,分别进行人胆管癌细胞体外培养和体内接种生长,观察分析该基因对胆管癌细胞生长的抑制情况,探索人类胆管癌的生物治疗的可行性和方法.方法将携带PTEN基因的真核表达载体pBP-PTEN和不含该基因的空载体.转胆管癌QBC939细胞,嘌呤霉素抗性筛选克隆、扩增培养.绘制细胞生长曲线及MTT细胞活性观察;利用免疫组化检测转染前后PTEN阳性表达率;透射电镜扫描观察转染前后及联合奥沙利铂后细胞的超微结构变化;流式细胞分析细胞的周期变化和细胞凋亡情况;体外细胞侵袭力抑制试验;裸鼠体内肿瘤生长,病理学及电镜扫描的观测.结果PTEN基因转染后QBC939细胞稳定表达,阳性表达率升高（P＜0.05）;肿瘤细胞活性下降（P＜0.05）,细胞周期G1～S期抑制,细胞凋亡率增加（P＜0.01）;透射电镜细胞较成熟、分化好;细胞侵袭力明显抑制（P＜0.05）;裸鼠体内肿瘤未转染组生长早,加入奥沙利铂后生长受抑制（P＜0.05）,病理证实为腺癌.结论1.脂质体成功将PTEN基因转染人胆管癌QBC939细胞,并稳定表达.2.PTEN基因转染后细胞生长速度无明显变化;MTT实验活性细胞数有所下降.3.转PTEN基因后的胆管癌细胞超微结构变化显示线粒体增多,细胞较成熟、分化好;流式细胞议分析,细胞周期G1期被抑制,细胞凋亡多,侵袭力受到抑制;4.接种转PTEN基因裸鼠的体内成瘤显著抑制;6.转基因的生物治疗联合奥沙利铂（L-OHP）对人胆管癌细胞生长具有显著的抑制作用.     

临时滤器捕捉血栓预防肺栓塞的临床观察

目的　观察下肢深静脉血栓形成患者置入的腔静脉临时滤器后捕捉血栓和预防肺栓塞的效果。方法　对确诊单侧下肢深静脉血栓形成的 5 8例患者 ,治疗前经健侧肢体置入腔静脉临时滤器 (antheortemporaryfilter,ATF)并实施手术腔内治疗和 或抗凝溶栓治疗 ,临床观察有无出现肺栓塞症状和体征。治疗后拨除临时滤器观察血栓的捕捉。结果　下腔静脉滤器置入全部成功 ,下肢深静脉血栓形成患者治疗后效果良好 ,无症状性肺栓塞发生。置入滤器平均 (1 2 . 0± 2 . 0 )d取出。临时滤器捕捉血栓患者 4 6例 ,占 79. 3%,其中 2例捕捉到大于 1cm血栓 ,经切开股静脉将滤器和血栓一并取出。结论　临时滤器预防肺栓塞安全有效 ,无远期并发症之忧 ,下肢深静脉血栓形成患者为预防肺栓塞措施置入临时滤器是有必要的。     

不同部位胆囊癌扩大根治术的价值

目的 探讨扩大的手术方式对胆囊癌NevinⅣ期患者R0切除率及患者中位生存期的影响。方法 将91例NevinⅣ期胆囊癌患者分为胆囊底体部痛和胆囊颈部癌,分别施行扩大清扫术、常规清扫术及姑息手术,并对中位生存期、淋巴结转移率、R0切除率等指标进行比较。计量资料采用重复测量方差分析或配对t检验,计数资料采用配对x2检验。结果 扩大清扫术组中位生存期（月）明显高于常规手术组和姑息手术组,胆囊底体部癌的中位生存期分别为(27.1±2.4)、（10.7±2.2）、(4.7±2.2)个月,胆囊颈部癌的中位生存期分别为（8.5±2.1）、(6.7±1.9)、(3.1±1.1)个月;胆囊底体部癌和颈部癌的R0切除率不同,胆囊底体部癌的扩大清扫术和常规手术RO切除率分别为16/18(88％)和7/12(58％),胆囊颈部癌的扩大清扫术和常规清扫术RO切除率分别为6/16(38％)和3/13(23％);胆囊底体部癌和胆囊颈部癌淋巴结转移率分别为：No.12a (64％,81％,P=0.088),No.12b(58％,83％,P=0.01),No.13( 32％,70％,P=0.000),No.14( 17％,18％,P=0.961),No.16(12％,17％,P=0.392),No.8a(28％,41％,P=0.215) No.8p(22％,42％,P=0.051)。结论 NevinⅣ期胆囊底体部癌扩大清扫术的中位生存期、RO切除率等均高于胆囊颈部癌。     

强脉冲光联合点阵铒激光治疗痤疮瘢痕的临床效果分析

目的:联合运用强脉冲光和点阵铒激光治疗痤疮瘢痕,研究分析其临床疗效及对患者生活质量的影响。方法:采用简单化随机分组方法将我院2011年1月到2013年6月期间收治的126例痤疮瘢痕患者随机分为强脉冲组、点阵组、联合治疗组,每组各42例。接受相应治疗后评价其ECCA权重评分、有效率、不良反应及生活质量。结果:联合治疗组治疗前后ECCA权重评分下降较强脉冲组和点阵组多(P0.05);联合治疗组总有效率95.24%,强脉冲组总有效率76.19%,点阵组总有效率80.9%,联合治疗组高于其他两组(P0.05);联合治疗组不良反应发生率14.29%,强脉冲组为40.48%,点阵组为35.71%,联合治疗组不良反应低于其他两组(P0.05);治疗后联合治疗组在自我感知、社会功能、情感功能、痤疮症状等评分均高于强脉冲组和点阵组(P0.05)。结论:联合运用强脉冲光和点阵铒激光治疗痤疮瘢痕能提高疗效,减少不良反应的发生,同时能提高患者的生活质量,值得推广。     

Survivin反义核酸诱导乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨Survivin反义核酸技术诱导乳腺癌细胞凋亡的作用及效果。方法本实验共分6组，分为以脂质体介导反义寡核苷酸组（ASODN／Lip）、无义寡核苷酸组（NODN／Lip）及RPMI 1640培养液的空白对照组（Lip），转染人乳腺癌MCF-7细胞系，应用Hoechst 33258／PI双重染色观察MCF-7细胞的形态学改变，透射电镜观察细胞超微结构，流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化，DNA凝胶电泳观察凋亡情况，研究Survivin反义寡核苷酸对MCF-7乳腺癌细胞的生长抑制作用。结果Hoechst 33258／PI染色及透射电镜观察可见转染后的细胞结构呈凋亡样改变；流式细胞仪检测见转染后细胞凋亡显著增加，并出现G2／M期阻滞现象；DNA凝胶电泳在600ng／ml，800ng／ml ASODN／Lip组的电泳图谱上呈现出明显的“梯状”现象。结论凋亡抑制基因Survivin表达下涧对乳腺癌细胞的生长抑制作用主要是通过诱导细胞发生凋亡以及阻止有丝分裂发生在G2／M阻滞期来实现，Survivin靶向反义核酸技术可能成为乳腺癌基因治疗的一种有效方法。     

兔VX2肝癌模型的制作及CT、MRI表现

目的建立稳定的兔VX2移植性肝癌模型,分析少血供移植性肝恶性肿瘤的CT及MRI影像特征,与病理学相对照。方法取荷瘤兔后腿肌肉内VX2肿瘤,剪成小块后,经开腹种植于30只新西兰大白兔肝左叶或肝中叶,于种植后第2周、第3周分别进行CT及MRI增强扫描,统计肿瘤种植成功率,观察肿瘤体积及生长指数,分析肿瘤CT及MRI平扫和增强表现,区分富血供、少血供肿瘤;分别处死2只实验兔进行病理分析,与影像学相对照。结果VX2移植瘤种植成功22只;成瘤率为73%。2周与3周时肿瘤生长率有显著差异(P<0.01)。VX2移植瘤在CT及MRI上表现为占位性病变,呈类圆形或分叶状低密度或低信号结节,增强后发现少血供VX2移植瘤14只,表现为肿瘤无强化或轻微强化,肿瘤主体保持为低密度或低信号;富血供肝移植瘤8只,表现为肿瘤中度强化或明显强化,肿瘤主体密度或信号明显高于肝实质。光镜下肿瘤新生毛细血管虽较丰富,但纤细。结论经开腹种植法制作兔VX2肝移植瘤模型是一种简单、成功率高的建模方法,但易发生转移。CT及MRI平扫和增强扫描是检测肿瘤生长和血供的可靠方法,兔VX2肝移植瘤模型在CT与MRI上主要是一种少血供肝癌模型。     

云南省昭通市3221名男性学生外生殖器普查报告

目的：通过对幼儿园至初中男生进行普查,了解生理发育情况、外生殖器相关疾病及卫生状况。方法：对昭通市所辖1所幼儿园、9所小学和1所中学2～18岁男生外生殖器进行体检,包括外生殖器发育、睾丸容积测量、阴茎长度测量、外生殖器相关疾病等。结果：昭通市3221名男性学生中包皮过长和包茎3099名（占96．2％）、精索静脉曲张28名（占0．9％）、腹股沟斜疝42名（占1．3％）、隐睾33名（占1．0％）、鞘膜积液28名（占0．9％）、尿道下裂1名（占0．03％）、隐匿性阴茎25名（占0．8％）。结论：包皮过长、包茎是学生多发病。较多外生殖器疾息未及时进行治疗,外生殖器卫生状况差,男生缺少卫生保健知识。学校及相关卫生部门应加强生理健康知识教育及男性外生殖器发育和保健知识教育的监测工作。     

经胸乳径路腔镜甲状腺手术180例的临床研究

目的探讨经胸乳径路腔镜甲状腺手术技巧及其并发症的防治。方法回顾分析2005年3月至2009年12月经胸乳径路腔镜甲状腺手术180例患者的临床资料。结果本组178例腔镜甲状腺手术顺利完成,2例中转开放手术,其中1例为结节性甲状腺肿,因甲状腺体积大,空间狭小中转开放手术,另1例为原发性甲状腺功能亢进,因粘连严重、创面广泛渗血中转开放手术。全组手术时间70～190 min,平均110 min。术中出血量5～75 ml。术后出现皮肤瘀斑2例,抽搐1例,均于2周后恢复正常。声音嘶哑1例,1个月后恢复正常。住院时间3～6 d,平均4.5 d。结论经胸乳径路腔镜甲状腺手术是一种极富技巧性的手术,甲状旁腺损伤和喉返神经损伤是其严重并发症,规范手术操作能有效减少并发症的发生。     

靶向STAT3的慢病毒表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞增殖凋亡的影响

目的 构建大鼠STAT3基因的shRNA慢病毒表达载体,并观察其对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响.方法 针对STAT3基因的不同部位设计4对shRNA的寡核苷酸片段,克隆到慢病毒载体PLKO.1中,构建靶向STAT3基因的慢病毒载体PLK0.1-STAT3-shRNA,检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体.并将其转染大鼠血管平滑肌细胞,用噻唑蓝法和流式细胞仪检测沉默STAT3基因后对血管平滑肌细胞增殖和凋亡能力的影响.结果　靶向STAT3慢病毒表达载体构建成功.转染PLKO.1-STAT3-shRNA后,STAT3蛋白表达明显下降,其中以PLKO.1-STAT3-S1最为明显,达到90%以上;转染PLKO.1-STAT3-S1的细胞增殖能力(A值=0.25±0.05)明显低于未转染组(A值=0.62±0.12)和阴性对照组细胞(A值=0.59±0.11)(P＜0.05);而早期细胞凋亡率(26.9±2.8)%和晚期细胞凋亡率(9.5±1.6)%均明显高于未转染组和阴性对照组(P＜0.01).结论　成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向STAT3慢病毒表达载体PLKO.1-STAT3-S1,该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖,并促进细胞凋亡.

Abstract：

Objective To construct a recombinant short hairpin RNA (shRNA) lentiviral vector carrying STAT3 gene in rats, and to investigate its effects on proliferation and apoptosis of vascular smooth muscle cells by silencing STAT3. Methods Four oligonucleotides targeting STAT3 gene were synthesized and cloned into lentivirus vector PLKO. 1. The shRNA lentiviral vector with best transfection efficiency was detected and identified, which was transfected into vascular smooth muscle cells in rats, and its effects on proliferation and apoptosis of vascular smooth muscle cells were measured by MTT and flow cytometry after silencing STAT3. Results The recombinant lentivirus vector PLKO. 1-STAT3-shRNA was constructed successfully. PLKO. 1-STAT3-shRNA knocked down the expression of STAT3 protein dramatically, especially PLKO. 1-STAT3-S1, whose transfection efficiency was more than 90%. The proliferation capacity of vascular smooth muscle cells transfected with PLKO. 1-STAT3-S1 (A value =0. 25 ±0. 05 ) was significantly lower than no-transfected group (A value =0. 62 ±0. 12) and negative control group (A value =0. 59 ±0. 11 )(P ＜ 0. 05). Meantime the early apoptosis rate (26. 9 ± 2. 8 ) % and late apoptosis rate (9. 5 ± 1.6 ) % in PLKO. 1-STAT3-shRNA-transfected group were significantly higher than in no-transfected group and negative control group (P ＜ 0. 01 ). Conclusion The recombinant lentivirus shRNA vector targeting STAT3,PLKO. 1-STAT3-S1, with best transfection efficiency, is constructed successfully. PLKO. 1-STAT3-S1 can inhibit the proliferation of vascular smooth muscle cells, and promote the cell apoptosis. This study lays the foundation for further studying on targeting treatment of vascular restenosis.     

Sirtl在肝癌及癌旁组织中的表达差异研究

目的：研究肝癌组织与癌旁组织的基因表达谱差异。方法：应用包含44000条人类全长基因的寡聚核苷酸芯片检测肝癌组织与癌旁组织的基因表达谱,并比较两者之间存在明显上、下调的表达差异基因,随后用RT—PCR和Western blot方法进行验证分析。结果：基因芯片筛选出存在差异表达的基因,其中沉默信息调节因子1（Sirtl）在肝癌组织与癌旁组织中的表达差异明显,在肝癌组织中明显升高,经RT—PCR和Western blot证实与基因芯片结果一致。结论：Sirtl基因的表达可能与肝癌的发生发展密切相关。