人胚胎干细胞Pten基因表达及PI3K/Akt/mTOR信号通路下游蛋白的磷酸化

背景：各种磷酸化蛋白质表达水平对人胚胎干细胞维持未分化状态或定向分化的影响逐渐成为人胚胎干细胞的研究热点,研究发现磷酸化蛋白质表达水平可能决定着人胚胎干细胞的命运。 目的：对PI3K/Akt途径下游的关键蛋白磷酸化水平进行检测,寻找PI3K/Akt途径中能够维持人胚胎干细胞未分化状态的下游蛋白。 方法：用胎鼠成纤维细胞作为饲养层,二维培养的方法培养人胚胎干细胞,胶原酶消化后待测;以饲养层细胞、K562细胞株为对照。观察人胚胎干细胞生长状态;RT-PCR检测Pten基因表达;Western Blot检测p-PTEN、p-mTOR、p-P70S6K、p-4E-BP1 4种蛋白的表达。 结果与结论：人胚胎干细胞在未分化状态时Pten mRNA表达高于肿瘤细胞K562,而且Pten抑制的mTOR信号通路中关键蛋白表达均明显低于K562,尤其以p-4E-BP1表达最低。提示PI3K/Akt/mTOR信号通路下游磷酸化蛋白在人胚胎干细胞活性较低,如果抑制负调节蛋白PTEN或直接激活该通路正调节关键蛋白,可能会加快人胚胎干细胞增殖、减少凋亡,进而为定向分化、再生医学提供更多的细胞来源。     

顿服甲巯咪唑片短期治疗儿童甲亢的临床观察

目的 探讨顿服甲巯咪唑治疗儿童甲亢的短期疗效及安全性.方法 将首诊的甲亢患儿分为两组,服用固定剂量的甲巯咪唑(20 mg/d)6周观察疗效及安全性,顿服组(观察组)每天一次服药,分次服用组(对照组)每天两次服药,观察不同服药方法的疗效及安全性.结果 观察组与对照组的短期疗效显著,但观察组效果更佳,有统计学意义.两组的不良反应率几乎无差异.结论 顿服甲巯咪唑治疗儿童甲亢的短期疗效较分次服用更好.     

bcr/abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定

目的构建bcr/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/ablmRNA和P210蛋白的影响。方法根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶启动子H1的真核表达载体pTER117、pTER363,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT-PCR分析bcr/ablmRNA的表达,细胞化学染色检测P210蛋白的表达。结果构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117、pTER363,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24h后,pTER117、pTER363分别使bcr/ablmRNA的相对水平下降52%、43%,使P210蛋白分别下降47%、40%。结论bcr/abl融合基因siRNA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达。     

蛇毒与血小板膜糖蛋白作用的研究

本文从分子生物学水平概述近来蛇毒与血小板作用研究的最新进展，阐述了蛇毒通过直接或间接作用于血小板膜糖蛋白Ｉｂ或Ⅱｂ／Ⅲａ复合物，激活或抑制血小板功能而发挥其作用的机理，为蛇毒的临床运用提供理论指导。     

硼替佐米联合柔红霉素对T系急性淋巴细胞白血病细胞株CEM细胞增殖、凋亡的影响

我们以T系急性淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株CEM为研究对象,研究硼替佐米单药和联合柔红霉素对T-ALL细胞株CEM增殖和凋亡的影响,以期为难治性急性白血病的治疗开辟新途径.     

肺耐药相关蛋白与恶性血液病

肺耐药相关蛋白(Lung resistant-related protein,LRP)是近年提出的一种与耐药有关的转运蛋白,分子量为110KD,不位于细胞膜处,而以颗粒的形式分布于细胞浆外部区域,推测其可能与核、浆及囊泡/溶酶体系统的物质转运有关。近年研究表明LRP过度表达与白血病、卵巢肿瘤等肿瘤耐药的发生有一定关系,可预示白血病患者的化疗敏感性及预后。     

肺耐药相关蛋白与恶性血液病

肺耐药相关蛋白（Ｌｕｎｇｒｅｓｉｓｔａｎｔ－ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＲＰ）是近年提出了一种与耐药有关的转运蛋白，分子量１１０ＫＤ，不位于细胞膜处，而以颗粒的形式分布于细胞浆外部区域，推测其强能与核，浆及囊泡，溶酶体系统的物质转运有关，近年研究表明ＬＲＰ过度表达与白血病，卵巢肿瘤等肿瘤耐药的发生有一定关系，可预示白血病患者的化疗敏感性及预后。     

人胚胎干细胞Pten基因表达及PI3K/Akt/mTOR信号通路下游蛋白的磷酸化

背景:各种磷酸化蛋白质表达水平对人胚胎干细胞维持未分化状态或定向分化的影响逐渐成为人胚胎干细胞的研究热点,研究发现磷酸化蛋白质表达水平可能决定着人胚胎干细胞的命运。目的:对PI3K/Akt途径下游的关键蛋白磷酸化水平进行检测,寻找PI3K/Akt途径中能够维持人胚胎干细胞未分化状态的下游蛋白。方法:用胎鼠成纤维细胞作为饲养层,二维培养的方法培养人胚胎干细胞,胶原酶消化后待测;以饲养层细胞、K562细胞株为对照。观察人胚胎干细胞生长状态;RT-PCR检测Pten基因表达;WesternBlot检测p-PTEN、p-mTOR、p-P70S6Kp-4E-BP14种蛋白的表达。结果与结论:人胚胎干细胞在未分化状态时PtenmRNA表达高于肿瘤细胞K562,而且Pten抑制的mTOR信号通路中关键蛋白表达均明显低于K562,尤其以p-4E-BP1表达最低。提示PI3K/Akt/mTOR信号通路下游磷酸化蛋白在人胚胎干细胞活性较低,如果抑制负调节蛋白PTEN或直接激活该通路正调节关键蛋白,可能会加快人胚胎干细胞增殖、减少凋亡,进而为定向分化、再生医学提供更多的细胞来源。