抗mdr1 RNA干扰真核表达载体的构建

目的：构建抗mdr1 RNA干扰真核表达栽体。方法：根据Reynolds的设计原则．针对mdr1的序列及二级结构选择了三条靶序列,人工合成三条shRNA序列的编码DNA序列,重组入Pgenesil-1栽体中．转化大肠杆菌DH5α,碱裂解法提质粒,酶切及测序鉴定。结果：用PstⅠ和SalⅠ酶切鉴定质粒Pmdr1sh1、Pmdr1sh2、Pmdr1sh3均符合设计要求,测序证实序列完全正确。结论：通过酶切和测序鉴定重组质粒Pmdr1sh1、Pmdr1sh2、Pmdr1sh3插入位点正确,与设计序列一致．预期可用于逆转mdr1所致耐药。     

血清Hcy、Cys C和RDW联合检测对糖尿病早期肾损伤的诊断意义

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)、胱抑素C(CysC)和红细胞分布宽度(RDW)联合检测早期诊断糖尿病肾病(DN)的临床意义和价值.方法:选取94例糖尿病(DM)患者为观察对象,根据尿微量蛋白排泄率(UMAER)分为单纯糖尿病(DM组)和早期糖尿病肾损伤(DN组),同时纳入40例健康对照组;所有入选者进行Hcy、Cys...     

囊性纤维化跨膜转导调节因子与急性白血病患者临床特征及预后的关系

  目的  检测细胞囊性纤维化跨膜转导调节因子（CFTR）在急性白血病及其亚型中的表达情况,分析其与急性白血病患者的临床特征及预后的关系。  方法  纳入115例急性白血病患者为实验组,以同期体检健康者为对照组,收集其外周血或骨髓,分离单个核细胞,采用Western blot法检测细胞的CFTR蛋白相对表达量,分析CFTR蛋白表达与急性白血病患者的临床特征及预后的关系。  结果  正常人外周血单个核细胞未检测出CFTR蛋白表达,而一半以上急性白血病包括急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）患者CFTR蛋白表达阳性,而急性早幼粒细胞白血病（M3）患者均未检测到CFTR蛋白阳性表达。在AML患者中,CFTR蛋白表达阳性和阴性患者在外周血白细胞计数（WBC）、外周血原始细胞数、血小板（PLT）和血红蛋白（HGB）等方面差异无统计学意义,也与NPM1、CEBPA、FLT3-ITD、C-Kit等基因突变无相关性,CFTR蛋白阴性患者2疗程完全缓解（CR）率略高于阳性患者,生存期略长于阳性患者,但差异无统计学意义。在ALL患者中,CFTR蛋白与患者的临床特征及预后均无关。  结论  本研究尚未发现CFTR蛋白与急性白血病患者临床特征、治疗反应及预后有相关性。     

RNA干扰逆转白血病细胞耐药性的研究

目的 用RNA干扰技术下调白血病耐药细胞系K562/A02多药耐药基因mdr1的表达以逆转白血病对化学药物的耐药性.方法 针对mdr1基因已知mRNA序列不同位点,选择两条靶序列,构建靶向mdr1 shRNA真核表达载体,脂质体介导转染白血病耐药细胞株K562/A02.实时荧光定量RT-PCR检测mRNA表达,Western blot检测细胞膜P-gp表达,柔红霉素泵出试验检测P-gp外排泵功能,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性.结果 构建了二条针对mdr1基因的shRNA真核表达载体,分别下调mdr1 mRNA的表达89.74%和87.18%,降低细胞膜P-gp表达,使膜外泵功能明显下降,柔红霉素在细胞内贮留明显增多,60min 时柔红泵出率为13.16%、22.02%,对照组为40.44%、45.31%,对阿霉素药物敏感性的相对逆转率为84.36%和76.69%.结论 RNA干扰技术可有效逆转mdr1所致耐药.     

白血病患者血液流变学改变探讨

目的　探讨白血病患者血液流变学的改变情况。方法　 4 5例白血病患者清晨空腹取静脉血 5ml,采用SA B型血液流变电脑诊断仪检测血液流变学的各项指标 ,并分析其改变情况。结果　发现CML组有明显血液流变学异常 ,表现在全血还原比粘度上升 ,红细胞电泳时间延长及刚性指数增加 ,血小板粘附率升高 ,白细胞计数增高 ,全血比粘度、血浆比粘度、纤维蛋白质、血沉方程K值正常 ,而纤维蛋白原等血浆因素对此影响不大 ;AL组血小板数量减少 ,血小板粘附率下降。结论　研究结果可为白血病患者是否进行抗凝治疗提供理论指导     

慢病毒转染脐血CD34+造血干细胞方法的优化

目的 探讨慢病毒载体系统转染人脐血CD34+造血干细胞优化的转染方法.方法 采用第二代、第三代慢病毒载体系统,通过改变病毒浓度、感染体积、感染复数(MOI)值、感染方式、感染时间和感染后培养基等各方面条件,将表达绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pTRIPdU3-RNAiTALh-EF1a-GFP转染CD34+干细胞,于37℃、5％ CO2的孵箱中培养14 d后,在光学显微镜下进行集落计数和分类,并与未转染的CD34+干细胞进行比较,从而筛选出优化的转染方法.结果 三质粒系统的第二代慢病毒载体转染率高于四质粒系统的第三代慢病毒载体.优化的转染条件为:新鲜分选的CD34+细胞于当日(0 d),在含病毒滴度107TU、Polybrene 2 μg/mL的optiMEM培养液中,细胞和病毒混合液于平底12孔板孔中,200×g离心1h,离心后继续共培养8h,再换新的病毒液200×g离心1h,共培养8h.按照含细胞因子的液体培养基:半固体培养基=1∶1的比例配置转染后培养基,继续培养,可以获得较高感染率.感染病毒后的CD34+干细胞培养14 d后,与未感染的CD34+细胞相似,可以形成各类血细胞集落.结论 优化的慢病毒转染方法可以有效感染CD34+造血干细胞,而不影响干细胞的分化功能.     

恶性淋巴瘤患者血清β2微球蛋白分析

目的：了解恶性淋巴瘤患者血清β2微球蛋白水平，并对Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期患者，何杰金氏病（HD）与非何杰金氏淋巴瘤（NLL）患者血清β2球蛋白含量进行比较。方法：采用放射免疫分析法测定了17例恶性淋巴瘤患者血清β2微球蛋白含量。结果：恶性淋巴瘤患者血清β2微球蛋白含量较正常对照组明显增高，但HD与NHL患者之间无显著性差异，Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期患者差异也不明显。结论：恶性淋巴瘤患者血清β2微球蛋白明显增高，β2微球蛋白可作为恶性淋巴瘤患者疾病监测的一项辅助指标。     

Glut5在Ph+急性淋巴细胞白血病伊马替尼耐药中的机制研究

目的采用费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病（Ph+ALL）伊马替尼耐药细胞株SUP-B15/R研究伊马替尼耐药的可能机制。方法通过基因芯片分析法对比找出伊马替尼耐药株SUP-B15/R与敏感株SUP-B15/S之间表达差异的基因,筛选出可能与耐药相关的基因SLC2A5,分别采用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot进一步验证SLC2A5及其编码蛋白葡萄糖转运体5（Glut5）在SUP-B15/R与SUP-B15/S之间表达的差异。采用MTT实验检测果糖对SUP-B15/S细胞伊马替尼敏感性的影响,以及qPCR检测相关信号通路的改变,探究Glut5表达增加在SUP-B15细胞伊马替尼耐药中的作用。结果基因芯片结果发现,与细胞代谢相关的SLC2A5基因在SUP-B15/R中高表达,qPCR和Western blot实验进一步验证了上述结果。而果糖处理后SUP-B15/S细胞对伊马替尼的敏感性下降,IC50由（44.50±2.38 ）μmol/L增加到（64.71±1.69） μmol/L,同时Glut5、PI3K、AK mRNA表达增强。结论SUP-B15/R细胞高表达SLC2A5,Glut5高表达促进细胞对果糖的吸收,激活伊马替尼作用下受到抑制的PI3K/AKT信号通路,导致SUP-B15细胞对伊马替尼耐药。     

中西医结合治疗糖尿病足的临床观察

目的评价中西医结合治疗糖尿病足的临床效果。方法选取2014年9月—2016年3月在我院就诊的84例糖尿病足患者,将其随机分为对照组和结合组,各42例。对照组采用常规西医治疗,结合组在常规西医治疗基础上结合中药煎剂治疗,比较两组的临床疗效。结果结合组治疗后临床有效率为100.00%,高于对照组的83.33%,差异有统计学意义(P0.05);两组在治疗及随访期均未出现恶心呕吐、腹泻、皮肤瘙痒等不良反应。结论中西医结合治疗糖尿病足的临床效果显著,不良反应少,值得在临床治疗上推广应用。     

PP242通过下调AKt/mTOR/4EBP1/eIF4E信号通路与柔红霉素存在协同抗急性白血病作用

目的通过研究PP242单药及与柔红霉素(DNR)联合抗急性白血病的效应及作用机制,探寻急性白血病治疗的新方法。方法以NB4、THP-1、SUP-B15三种急性白血病细胞株为研究模型,采用MTT药物敏感试验检测PP242、DNR单药及两药联合的抗细胞增殖作用;Western Blot方法分析药物对Akt/mTOR/4EBP1/eIF4E信号通路关键点蛋白磷酸化的表达水平的影响;7-甲基鸟嘌呤帽亲和分析法分析药物对eIF4F翻译起始复合物中4EBP1、eIF4E、eIF4G表达的影响;流式细胞学检测PP242的促凋亡作用。结果 (1)MTT显示PP242、DNR单药对急性白血病细胞株均有显著的抗细胞增殖作用,而100 nmol/L的PP242与DNR联合使IC_(50)下降明显,计算协同指数均小于1,表明两药存在协同作用。(2)Western Blot显示PP242可有效下调Akt/mTOR/4EBP1/eIF4E轴的关键磷酸化蛋白及Mcl-1表达,而DNR却反馈上调这个通路的蛋白表达,PP242可协同DNR下调这条通路表达。(3)7-甲基鸟嘌呤帽亲和分析法显示PP242可增加eIF4E与4EBP1的结合,减少与eIF4G的结合,从而抑制eIF4F的形成,而DNR单药并没有这个作用。(4)流式细胞学显示PP242可促进细胞凋亡发生。结论 PP242单药可抑制三种急性白血病细胞株的增殖,具有明显的抗急性白血病作用,分析其可能作用机制为:通过抑制Akt/mTOR/4EBP1/e IF4E信号通路活性,抑制eIF4F翻译起始复合物形成以及促进细胞凋亡的发生。PP242与DNR联合有协同抗急性白血病作用。