随机诱变和利用2—脱氧—D—葡萄糖作为抗代谢物筛选米曲霉α—淀粉酶高产突变株

通过利用 2 -脱氧 - D-葡萄糖 ,对米曲霉 PTCC5 16 4的经紫外照射、亚硝酸和 N-甲基 - N′-亚硝基 - N-亚硝基胍 (MN-NG)处理随机诱变得到的不同突变株的筛选作了研究。一个众所周知的抗代谢物 2 -脱氧 - D-葡萄糖被用来筛选脱阻遏突变株。在这些诱变剂对米曲霉分生孢子的诱变和致死效应之间作了比较 ,并在 2 -脱氧 - D-葡萄糖存在的条件下对已分离的突变株的频率分布作了鉴定。具有更高糊化和糖化活性的有效突变株被分离出来。最好的一株是用亚硝酸诱变的结果 ,它的糊化和糖化活性分别比它的亲株高 6 .73倍和 5 .13倍。总的来说 ,由…     

B36-05类芽孢杆菌A11环糊精酶的纯化和表征Kaulpiboon J等EnzymeMicrobTechnol

类芽孢杆菌A11能产生一种胞内环糊精酶(CDase)，已在含β-环糊精(B-CD)和酚酞的选择平板上以活性检测证实其存在。将CDase纯化22倍，收率为28％。此酶是单一多肽，分子量为80000，在pH7．O和40℃时有最高活性。等电点为5．4，N端序列为MFLEAVYHRPRKNWS。通过CDase对不同底物的相对水解活性的比较，发现其对β-CD具有高度特异性，而对相应的线形物——麦芽七糖的活性只有40％。CDase可识别α-1，4-葡萄糖单元，其水解依赖于寡糖大小。     

用一种新的Candida magnoliae菌株生产甘露醇

分离到一株在果糖和葡萄糖作为碳源的条件下产生甘露醇的新微生物。用含有 15 0 g/ L 果糖的培养基进行摇瓶发酵 ,16 8h后能产出 6 7g/ L 的甘露醇。用 3%～ 12 % (w/ v)的果糖进行补料分批培养 ,2 0 0 h后甘露醇产量最大可达 2 0 9g/ L ,相当于 83%的得率和 1.0 3g· L- 1 · h- 1 的产量。基于它与对照菌株 C.magnoliae在 2 6 S r DNA上 D1/ D2区的相同序列以及有类似的碳源利用方式 ,所以将这一分离株定名为 Candida magnoliae。用一种新的Candida magnoliae菌株生产甘露醇@龚家玮…     

B36-06一种来自环境基因库的合成特性提高的新型青霉素酰基转移酶GaborE等Enzyme Microb Technol

通过DNA克隆和功能筛选从沙土富集培养中分离到一种新型青霉素酰基转移酶。对该酶(PAS2)的序列分析显示，其与一组重要的青霉素G酰基转移酶同源，其中包括已被深入研究的来自大肠杆菌ATCC 11105的酶。由此发现PAS2是一种Ⅳ端亲核水解酶，N端的丝氨酸为催化亲核部位，位于其61900的β-亚基。α-亚基的分子量为25500。     

维持大肠杆菌中等密度发酵的快速生长

本研究提出了一种新的补料策略，可延长大肠杆菌发酵的快速生长期至中等高密度。高密度发酵是生产生物产品的一种常规的成功方法。然而，在这些步骤中乙酸的积累是实质性问题。为避免此问题，发展了一些补料策略和宿主改造方法，但均导致生长率相对降低。如果可以维持较快的生长率，则过程中的生长期就能缩短，生产能力得以提高。早期培养的较快生长率可能提高其后的单位生产率。本研究建立了一个可快速生长至细胞密度20g/L的程序，并采用无细胞蛋白质合成评价目的细胞生产重组蛋白能力。     

用于提高大肠杆菌来源6—脱氧红霉内酯B的生产工艺

用摇瓶培养研究了不同生理条件对重组大肠杆菌培养物中 6-脱氧红霉内酯 B(6d EB:抗生素红霉素的大环核 )的生产和浓度的影响 ,建立了一种高细胞密度的发酵工艺。该工艺始终能产生 10 0 mg/ L 6d EB,而摇瓶条件下只达到 1～10 mg/ L。已证明利用一种附加的硫代酯酶 (Saccha-ropolyspora erythraea的 TE )可提高大肠杆菌中 6d EB的产量 ,使 6d EB的最终浓度达到 180 mg/ L。用于提高大肠杆菌来源6-脱氧红霉内酯B的生产工艺@龚家玮…     

用小分子化合物使耐药菌对万古霉素重新敏感

病原性肠球菌正在对目前临床使用的抗生素产生耐药性 ,包括对万古霉素 (1)这一作为抗革兰阳性菌感染的最后一线药物。细菌对 1的抗性主要是由于构成细菌细胞壁的肽聚糖的前体的末端发生改变 ,使其不能结合 1而导致细菌耐药。研究发现一些有定向性亲核、亲电基团并与肽聚糖末端手性互补的小分子 ,能有选择性地催化肽聚糖前体缩酚肽(depsipeptide)的裂解。据此设计了一些小分子化合物 ,其中有代表性的是 Spro C5。与 1联合用药的试验表明 ,它能将一株耐 1的肠球菌的最低抑菌浓度从 5 0 0 μg/m l降到 6 2 .5 μg/m l。这种能使耐药菌对 1重新…     

用生物反应器培养大肠杆菌生产来自粪产碱杆菌的重组青霉素G酰胺酶

通过大肠杆菌的重组表达生产了对于组合生物化学具应用特性的、来自粪产碱杆菌的青霉素 G酰胺酶 (PGA )。相关的基因被克隆到一个多拷贝载体上并处于鼠李糖诱导启动子的严格调控之下。菌体细胞在生物反应器 (5 L )中用合成基本培养基培养 ,反复添加作为碳源的诱导物——鼠李糖来诱导 PGA的产生。发酵得率约为 4 5 0 0 u PGA活力 /L培养基。用生物反应器培养大肠杆菌生产来自粪产碱杆菌的重组青霉素G酰胺酶@龚家玮     

在一种修饰的环氧树脂/二氧化硅杂合胶上固定戊二酰基-7-氨基头孢烷酸酰基转移酶的新方法

戊二酰基 - 7-氨基头孢烷酸 (ACA )酰基转移酶 (1)被固定在一种用 3-缩水甘油基丙氧基三甲氧基硅烷 (2 )和 N ,N -二异丙基乙胺 (3)混合物修饰的二氧化硅凝胶上。用 30 %(v/ v) 2、3% (v/ v) 3和 10 % (v/ v)乙二胺的混合物进行环氧化物硅烷化 ,而后用乙二胺和经环氧化物硅烷化活化的二氧化硅凝胶反应 4 h,再用 2 % (v/ v)戊二醛交联。固定化的 1反复使用 2 0次后活性仍是初始值的 6 2 %。在一种修饰的环氧树脂/二氧化硅杂合胶上固定戊二酰基-7-氨基头孢烷酸酰基转移酶的新方法@Park SW @龚家玮…     

B36-12 重组人可溶性Fas配基在大肠杆菌中的表达、纯化、重折叠和表征Sun KH等

Fas配基(FasL)是一种Ⅱ型膜蛋白，通过基质金属蛋白酶切割可获得具生物学活性的可溶性形式(sFasL)。sFasL会诱导耐Fas细胞的凋亡，而这一特殊的生物学活性也许可用于癌症治疗。然而，蛋白的三聚体形式使重组sFasL很难获得。本研究将sFasL DNA融合在硫氧还蛋白基因的氨基端，在羧基端加上His标签，在大肠杆菌中过表达。为了限制后继重折叠过程的自由度，将重组sFasL溶于6mol／L尿素，在变性条件下固定于镍树脂。通过逐步稀释法将固定的重组sFasL与过量的变性sFasL共同温育进行重折叠。