双启动子调控的条件复制腺病毒制备及其体外抑瘤作用

目的:构建并制备survivin及hTERT双启动子调控的条件复制腺病毒,探讨其特异性溶瘤作用.方法:PCR方法分别扩增肿瘤特异性survivin及hTERT启动子,分别克隆入腺病毒载体pXC1的两个复制必需基因E1A和E1B序列上游启动子区,构建出双肿瘤特异性启动子调控的条件复制腺病毒载体pXC1-SP-TP;脂质体法与pBHGE3骨架质粒共转染293E细胞进行重组腺病毒包装,稀释法测定腺病毒滴度;应用MTT、活细胞计数等方法观察其对肝癌细胞HepG2的特异性溶瘤作用并以正常人的血管内皮细胞ECV304作为对照.结果:测序及双酶切鉴定结果证实,成功构建了双肿瘤特异性启动子调控复制腺病毒载体;在293E细胞中获得了重组腺病毒Ad-SP-TP,滴度测定显示病毒滴度达到3.9×1010TCID50/ml;MTT结果显示,Ad-SP-TP可有效抑制肝癌细胞增殖而对正常细胞无增殖抑制作用;活细胞计数及细胞形态观察结果显示,重组腺病毒在肝癌细胞中选择性复制并发挥溶细胞作用.结论:双启动子调控的腺病毒具有显著的溶瘤作用但对正常人血管内皮细胞不发挥溶细胞作用,实验结果为肝癌靶向治疗提供了更为良好的条件复制型病毒载体及新的治疗策略.     

CD44在新生隐球菌体外感染血脑屏障中对单核细胞迁移的影响

目的新生隐球菌（Cryptococcus neoformans, Cn）荚膜主要毒力因子透明质酸由CPS1基因编码,能与宿主细胞受体CD44
结合介导真菌侵袭。本文目的明确CD44分子在Cn体外感染血脑屏障模型中对单核细胞黏附人脑微血管内皮细胞（HBMEC）
并迁移穿越血脑屏障的影响。方法用单层HBMEC铺趋化小槽构建体外血脑屏障模型,利用Cn野生株B4500FO2、CPS1基因
缺失株TYCC645#32和CPS1基因回补株PCIP,分别感染模型中的HBMEC,然后在上槽液中加入人白血病单核细胞（THP-1）,
计数从上槽液中迁移到下槽液中的单核细胞数量,观察Cn感染与单核细胞迁移时间和剂量关系;用抗CD44 单克隆抗体和
CD44抑制剂Bikunin分别作用于模型中单层HBMEC,通过趋化实验检查抗CD44单克隆抗体和Bikunin对Cn感染模型中单核
细胞迁移的抑制效应。结果黏附和趋化实验结果显示,Cn感染HBMEC后,相比PBS对照组,THP-1黏附率和趋化效应均明
显增加（P<0.01）,且黏附率和迁移率随Cn感染量和感染时间的增加而显著上升（P<0.05）。通过抗CD44单克隆抗体和CD44
阻断剂Bikunin分别作用于Cn感染后的HBMEC,结果发现THP-1黏附率和迁移率均显著降低（P<0.01）,且在一定范围内分别
随抗体（0~1 μg）和抑制剂（0~20 nmol/L）剂量的增加而减低。不同Cn菌株荚膜透明质酸的表达差异对THP-1细胞黏附和迁移
有一定影响：与野生株相比,TYCC645#32 感染组的THP-1 黏附率和迁移率均明显降低（P<0.01,P<0.05）,而回补株PCIP 的
THP-1黏附率和迁移率有所增加。结论体外血脑屏障模型中人脑微血管细胞表达CD44分子可能对单核细胞黏附内皮细胞
和迁移通过血脑屏障起重要作用;荚膜透明质酸能介导Cn诱导的单核细胞黏附和迁移。
     

卡博替尼阻断小鼠体内产单核细胞李斯特菌感染的实验研究

目的探讨c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂卡博替尼作为抗产单核细胞李斯特菌（Listeria monocytogenes, LM）感染新型药物
的可能性。方法6周龄C57BL/6小鼠随机分为卡博替尼组、氨苄青霉素（Amp）组、卡博替尼和氨苄青霉素联合用药组和PBS
对照组。腹腔注射LM菌液后,再分别灌胃给予卡博替尼20 μg/g、腹腔注射氨苄青霉素20 μg/g、卡博替尼和氨苄青霉素联合用
药、以及腹腔注射等量PBS,比较4组小鼠的生存曲线、血液和脑组织细菌载量、血清IL-10和脑脊液中NF-κB p65含量、脑组织
中依文思蓝（EB）含量以及脑组织病理变化。结果卡博替尼组比对照组小鼠生存率增高、血液和脑组织的细菌载量明显减少
（P<0.05,P<0.001）;血清IL-10和NF-κB p65含量显著降低（P<0.05,P<0.01）;脑组织EB量降低（P<0.001）,脑组织病理变化减
轻。联合用药组比卡博替尼单独用药组小鼠血液和脑细菌载量（P均<0.001）、血清IL-10和NF-κB p65含量（P<0.01,P<0.001）、
脑组织EB量均明显减少（P<0.001）。结论酪氨酸激酶抑制剂卡博替尼对LM感染具有阻断作用,为研发新型抗胞内感染药物
提供重要理论依据。
     

基层妇幼保健卫生培训效果与评价

目的评估重庆市基层妇幼保健培训的执行情况与效果,发现培训中存在的问题,为今后改进培训方法、提高培训和督导效果提供依据：方法对重庆市荣昌县的农村妇幼卫生人员调查对象进行培训,并采用问卷测试法、个人访谈法和现场观察法对培训过程和结果进行评估。结果临床技能组79人,健康教育组73人分别接受了培训和问卷测试。临床技能组培训前中位得分11分,培训后中位得分23分;健康教育组培训前中位得分18分,培训后中位得分25分,培训前后得分差异均有统计学意义（P〈0．01）,说明此次培训有效。结论基层卫生人员妇幼保健知识匮乏,对妇幼保健工作认识不足,此次培训活动完善了他们在妇幼保健方面的知识结构,提高了他们运用这些知识的技能,满足了他们的培训需求。组织者应确保培训内容丰富、新颖,形式灵活多样,妇幼保健工作者需积极主动、自愿自觉地参加培训,主管妇幼保健工作的领导应创造一切有利条件保证培训达到预定效果。     

Survivin、Livin共沉默对前列腺癌细胞的联合促凋亡作用

目的：研究Survivin、Livin基因共沉默对前列腺癌细胞PC-3在细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡、对化疗药物敏感性、克隆形成及裸鼠体内成瘤等方面的影响以及Survivin shRNA、Livin shRNA联合促前列腺癌细胞凋亡作用。方法：运用分子克隆技术,构建以Survivin、Livin基因为靶点的、含Survivin启动子的CGM30 miR     

2型糖尿病患者中亚临床甲状腺功能减退症与慢性肾脏病的相关性分析

目的 探讨2型糖尿病患者中亚临床甲状腺功能减退症(SCH)与慢性肾脏病(CKD)之间的关系。方法 回顾性分析重庆医科大学附属第二医院内分泌科2012-01~2013-01间收治的991例2型糖尿病患者的病例资料。以促甲状腺激素(TSH)>5 m U/L(正常参考值为0.35-5 m U/L)并且游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)与游离甲状腺素(FT4)在正常范围内定义为亚临床甲状腺功能减退症。比较亚临床甲状腺功能减退组与甲状腺功能正常组之间慢性肾脏病的患病率,行多因素回归分析来评估亚临床甲状腺功能减退症与慢性肾脏病的相关性。结果 991例2型糖尿病患者中,有126例(12.7%)患者存在亚临床甲减。亚临床甲减组与甲状腺功能正常组之间慢性肾脏病的患病率无统计学差异(P>0.05);在亚组分析中,严重的亚临床甲减组(TSH≥10 m U/L)中糖尿病肾病的患病率显著高于TSH在0.35-9.99 m U/L之间的患者(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果提示在2型糖尿病患者中,严重亚临床甲减可增加慢性肾脏病的患病风险。结论 在2型糖尿病患者中,慢性肾脏病的患病风险在严重亚临床甲减人群中高于甲状腺功能正常及轻微的亚临床甲减人群。     

不同截短型癌基因AEG-1启动子活性分析

目的:分析不同截短型癌基因AEG-1启动子活性,证实与E6/E7表达相关的转录调控因子对AEG-1启动子活性的影响。方法:以宫颈癌HeLa细胞基因组DNA为模版,扩增AEG-1启动子全长序列（-2710/-491）,并应用本实验室改造的启动子活性研究专用绿色荧光蛋白报告载体构建pGL3-basic-EGFP/AEG-1质粒,通过转染HeLa细胞及血管内皮细胞ECV304检测启动子活性。同时,根据AEG-1启动子序列上与E6/E7作用相关的转录调控因子结合位点位置,设计不同截短型AEG-1启动子序列引物,应用pGL3-basic-EGFP载体构建不同截短型AEG-1启动子载体,并分别转染细胞检测启动子活性。结果:AEG-1启动子全长序列pGL3-basic-EGFP/AEG-1载体转染HeLa细胞可见明显绿色荧光蛋白表达,而在血管内皮细胞ECV304中表达为痕量。包含不同转录调控因子C-Myc、SP1、NF-κB、E2F结合位点的不同截短型AEG-1启动子载体在肿瘤细胞中有活性但存在差异。结论:AEG-1启动子为肿瘤特异性启动子,含有与E6/E7表达相关的转录调控因子NF-κB、E2F结合位点的启动子序列为影响AEG-1基因启动子活性的关键区域。     

探究CT平扫+CTA（含多期相）+CTP一站式扫描对急性缺血性脑卒中患者脑组织血流灌注情况、脑侧支血流循环状态及责任血管狭窄的评估价值

目的：观察CT平扫+CTA（含多期相）+CTP一站式扫描对急性缺血性脑卒中脑组织血流灌注、脑侧支血流循环状态及责任血管狭窄的评估价值分析。方法：选择2022年1月～2022年11月本院收治的130例急性缺血性脑卒中患者,接受CT平扫+CTA（含多期相）+CTP一站式扫描。分析CTPI阳性患侧核心梗死区、缺血半暗带与健侧相应区域CTPI参数,侧支循环良好与不良者核心梗死区与健侧CTPI参数,责任血管不同狭窄程度患者CTPI血流灌注情况。结果：CTPI结果显示,117例患者的脑组织血流灌注发生异常,阳性率为90.00%(117/130)。早期急性卒中分级评估侧支循环良好者43例,侧支循环不良者87例。轻度27例,中度67例,重度或闭塞36例。CTPI阳性患侧核心梗死区及缺血半暗带脑血流量值、脑血容量值均小于健侧,平均通过时间、达峰时间均长于健侧（P<0.05）。侧支循环良好者患侧脑血流量值小于健侧,且平均通过时间及达峰时间均长于健侧,侧支循环不良者患侧脑血流量值及脑血容量值均小于健侧,且平均通过时间及达峰时间均长于健侧（P<0.05）,血流灌注异常责任血管重度狭窄或闭塞发生率高...     

幽门螺旋杆菌的无血培养基培养、传代和长期保藏

幽门螺旋杆菌的无血培养基培养、传代和长期保藏第一军医大学微生物学教研室广州５１０５１５龙北国，古惠英，龙敏，王金锐幽门螺旋杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｙｉ，ＨＰ）是引起胃炎、消化性溃疡的病原体，是胃癌的一种危险因子。建立Ｈｐ的无血培养基培养...