柴胡桂干龙骨牡汤对慢性胃炎伴焦虑状态的调治作用

目的观察柴胡桂干龙骨牡汤调治慢性胃炎伴焦虑状态的临床疗效。方法选择70例肝郁脾虚慢性胃炎伴焦虑状态患者,随机分为观察组与对照组,每组35例,观察组采用柴胡桂干龙骨牡汤加减治疗,对照组采用雷贝拉唑钠肠溶胶囊配伍氟哌噻吨美利曲辛片治疗。两组均调治2周。比较两组临床疗效、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)和焦虑自评量表(SAS)评分及不良反应。结果两组总有效率比较,观察组高于对照组(P<0.05);治疗后两组患者HAMA评分与SAS评分比较,观察组均低于对照组(P<0.05);两组患者治疗期间不良反应的总发生率观察组低于对照组(P<0.05)。结论采用柴胡桂干龙骨牡汤调治慢性胃炎伴焦虑、抑郁等心理亚健康状态患者,疗效确切,不良反应少,值得临床推广。     

株洲市2003-2007年5岁以下儿童死亡趋势分析

目的了解我市5岁以下儿童死亡原因以及近五年的发展趋势,提出相应的干预措施,以有效降低儿童的死亡率。方法按照《湖南省5岁以下儿童死亡监测方案》要求对我市2003年1月1日-12月31日及2006年10月1日-2007年9月30日出生的活产儿及5岁以下儿童死亡情况进行全面监测。结果5年来我市5岁以下儿童死亡率明显下降。2003年5岁以下儿童、婴儿及新生儿死亡率分别为16.98‰、14.12‰和11.53‰,2007年分别降至11.48‰、8.57‰和6.20‰。新生儿死亡所占构成比由2003年的67.85％降至54.04％。结论近年来所推广应用的儿童疾病综合管理项目、卫九项目、降消项目、妇幼卫生项目及新生儿窒息复苏技术等得力有效,使前5位死因发生了较大变化,肺炎和出生窒息死亡得到有效控制。     

蛋白酶体抑制剂MG132对Raji细胞凋亡、细胞周期及UBE1基因表达的影响

 【目的】 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞凋亡、细胞周期及泛素活化酶(UBE1)基因表达的影响。【方法】 5 μmol/L的MG132处理Raji细胞24 h,形态学观察细胞生长情况;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡、PI单染法分析细胞周期;荧光定量RT-PCR检测UBE1 基因mRNA表达, Western blot 检测UBE1 蛋白表达。【结果】 MG132处理组细胞生长缓慢,死亡及凋亡多见,细胞凋亡率(26.06 ± 1.10)% 较对照组(0.30 ± 0.26)%上升(P < 0.05),G2/M期细胞比率(33.2 ± 1.2)%较对照组(12.5 ± 1.1)%升高(P < 0.05);MG132处理组UBE1 mRNA表达量(0.35 ± 0.05)较对照组(1.00 ± 0.08)下降(P < 0.05),抑制率为65%; UBE1蛋白表达量(0.93 ± 0.07)较对照组(1.62 ± 0.22)下调(P < 0.05),蛋白表达率为(58 ± 6)%。【结论】蛋白酶体抑制剂MG132可诱导Raji细胞发生凋亡和G2/M期阻滞,同时抑制UBE1的mRNA和蛋白表达,机制仍待深入研究。     

B淋巴瘤中纯化TIL-T的IL-2Rα基因突变及蛋白表达检测

目的：探讨B淋巴瘤(B—NHL)中肿瘤浸润T细胞(TIL-T)的活化标记IL-2Rα(CD25)的基因突变，肿瘤组织中CD25蛋白表达及ⅡLT的增殖特点。方法：19例B-NHL提纯TIL-T，RT-PCR和SSCP检测其IL-2Rα的基因突变与否；MTT法检测17例TIL-T在低浓度rIL-2刺激下的增殖情况；冰冻切片免疫组化检测29例B-NHL中IL-2Rα蛋白的表达。结果：SSCP显示19例TIL-T的IL-2Rα未发现异常泳动条带；rIL-2刺激下，13／17例(76．5％)TIL-T增殖表现下调；免疫组化显示B-NHL中25／29例(86．2％)CD25表达为( /-)和( )，4／29例(13．8％)CD25表达为( ～ )。结论：TIL-T的IL-2Rα未发现基因异常，但TIL-T表达CD25蛋白数量异常，提示B-T接触活化异常可能是B-NHL形成的重要参与机制。     

靶向血管内皮生长因子C短发夹式RNA对人乳腺癌MCF-7细胞生物学特性的影响

目的 研究重组质粒表达载体介导的短发夹式RNA(shRNA)对乳腺癌MCF-7细胞株中血管内皮生长因子C(VEGF-C)的表达及乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 脂质体介导重组质粒pSIREN-VEGF-C转染乳腺癌MCF-7细胞株,嘌呤酶素筛选阳性克隆;荧光定量PCR及Western blot检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞中VEGF-C基因的表达;MTT法及Transwell体外侵袭实验检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞的增殖及侵袭能力.结果 转染重组质粒后乳腺癌MCF-7细胞中VEGF-C mRNA及蛋白表达均明显下调,抑制率分别为95%及100%(P<0.05);MTT法和 Transwell体外侵袭实验显示,与阴性质粒组和空白对照组比较,转染重组质粒后各时间段乳腺癌MCF-7细胞增殖均明显受抑制(P<0.05),同时穿膜的肿瘤细胞数也明显减少[(29.0±1.9)个与(59.0±2.1)个和(61.0±2.2)个相比,P<0.05].结论 表达VEGF-C shRNA的重组质粒载体pSIREN-VEGF-C在乳腺癌MCF-7细胞中能高效、特异地发挥靶基因沉默作用,并对乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力有显著抑制作用.     

人NESG1基因慢病毒载体的构建及其在293FT细胞中的表达

目的克隆人NESG1基因,构建与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的慢病毒载体pGC-FU-NESG1-EGFP,包装慢病毒,感染293FT细胞并进行鉴定。方法以NESG1全长克隆为模板扩增其编码框序列,通过限制性内切酶AgeI酶切、T4 DNA连接酶连接,将NESG1插入慢病毒载体pGC-FU-EGFP,构建pGC-FU-NESG1-EGFP重组载体。质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经PCR及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒三质粒系统共转染人胚肾细胞系293FT,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。病毒感染293FT细胞,荧光显微镜下观察感染效率,Western blot方法检测NESG1-EGFP融合蛋白的表达情况。结果成功构建慢病毒表达载体pGC-FU-NESG1-EGFP,三质粒共转染293FT细胞后可见大量绿色荧光;浓缩病毒后测定其滴度为2×107 TU/ml;以复感染系数MOI为1感染293FT细胞,感染效率在90%以上。Western blot证实细胞表达NESG1。结论成功构建NESG1慢病毒表达载体,包装得到高滴度慢病毒,为后续感染鼻咽癌细胞,探索其在鼻咽癌发生和发展中的作用奠定了基础。     

MDA-7基因的腺病毒载体构建及对肺腺癌A549细胞凋亡的影响

目的构建一种由腺病毒AdMax包装系统表达目的基因——黑色素瘤分化相关基因-7（MDA-7）的复制缺陷型腺病毒,并初步探索其抗肿瘤活性。方法通过基因操作技术将目的基因（MDA-7）插入到5型腺病毒AdMax包装系统的E1A区域,构建复制缺陷型腺病毒Ad.hMDA-7-EGFP;同时构建对照病毒Ad.EGFP。病毒滴度计算按寇化法（Karber法）进行腺病毒感染性滴度（TCID50）测定。应用免疫组化染色法检测MDA-7在感染2种病毒的肺腺癌A549细胞中的表达状态;通过二苯甲亚胺-碘化丙啶（Hoechst33342-PI）双染色法及流式细胞仪检测2种病毒对肿瘤细胞杀伤的差异。结果成功构建携带目的基因的腺病毒载体,经聚合酶链反应（PCR）鉴定正确;MDA-7在感染Ad.hMDA-7-EGFP的肺腺癌A549细胞中表达,以相同感染复数（MOI）值感染Ad.EGFP时肺腺癌A549细胞中未检测到MDA-7表达;Ad.hMDA-7-EGFP对肿瘤细胞株杀伤能力明显高于Ad.EGFP。结论成功构建复制缺陷型腺病毒Ad.hMDA-7-EGFP,并证实MDA-7蛋白在肿瘤细胞中过表达,诱导肺腺癌A549细胞株发生凋亡。     

可调式留置针支架在输液过程中的应用

目的 探讨可调式留置针支架在输液过程中的应用效果。方法 选取2021年1月至2022年1月于江西省赣州市妇幼保健院接受手术的60例患者作为研究对象,按照随机数字表法将其分为观察组与对照组,每组各30例。对照组患者采取常规留置针,观察组患者采用可调式留置针支架。比较两组患者的输液管压迫、脱出总发生率、围手术期舒适度评分及两组护理人员对手术的满意度。结果 观察组患者的输液管压迫、脱出总发生率低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。观察组患者的围手术期舒适度评分高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。观察组护理人员对手术的总满意率为96.66%,高于对照组的80.00%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 可调式留置针支架可满足手术操作要求,降低输液管压迫和脱出,护理人员满意度较高。     

CXCR4启动子的条件复制型腺病毒对肺癌细胞的靶向杀伤作用

目的:构建CXCR4启动子的条件复制型腺病毒载体CRAd-CXCR4-GFP,探究CRAd-CXCR4-GFP对肺癌细胞的靶向杀伤效应。方法:PCR法扩增人CXCR4-E1A基因并克隆至穿梭质粒p DC316-GFP,将骨架质粒p BHG-lox-E1,3Cre和重组质粒p DC316-CXCR4-GFP共转染293细胞,产生重组腺病毒CRAd-CXCR4-GFP并扩增,扩增后进行PCR鉴定和腺病毒滴度测定;real-time PCR检测5种肺癌细胞株CXCR4的mRNA表达,筛选出表达最高的A549细胞;将CRAd-CXCR4-GFP和Ad-NULL分别转染A549细胞,检测两者转染后CXCR4启动子活性和腺病毒复制数;将CRAd-CXCR4-GFP和Ad-NULL分别转染A549细胞和16HBE细胞,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,CCK-8检测各组细胞活性。结果:成功构建重组质粒p DC316-CXCR4-GFP,与骨架质粒p BHG-lox-E1,3Cre共转染293细胞后第11天可见片状绿色荧光;PCR表明目的基因CXCR4-E1A已成功整合在重组腺病毒基因组中;测定重组腺病毒滴度为1×1013PFU/L;CRAd-CXCR4-GFP转染A549细胞后E1A的mRNA和E4表达较Ad-NULL组明显上升;与Ad-NULL组和空白对照组相比,CRAd-CXCR4-GFP组前4 d A549细胞凋亡率和活性无明显差异,第5天细胞凋亡率明显增加,细胞活性明显降低,各组间5 d内16HBE细胞的细胞凋亡率和细胞活性均无明显变化。结论:成功构建条件复制型腺病毒表达载体CRAd-CXCR4-GFP,该载体对肺癌细胞具有靶向杀伤作用。