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91.
HBcAg DNA疫苗诱导小鼠(H—2^b)特异性细胞和体液免疫应答 总被引:7,自引:3,他引:4
目的 观察HBcAg DNA疫苗(pJW4303/HBc)免疫C57BL/6小鼠(H-2^b)的特异性细胞和体液免疫应答。方法 基因枪和肌肉注射两种方法接种DNA疫苗;ELISA法检测小鼠血清抗-HBc(IgG)及IgG亚类(IgG1,IgG2a);^51铬释放法检测小鼠脾细胞HBcAg特异性CTL活性。结果 该DNA疫苗体外可表达HBcAg;小鼠经基因枪或肌肉注射接种该疫苗后血清抗-HBc滴度分 相似文献
92.
慢性乙型肝炎患者HBV cccDNA的检测 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 建立和优化肝细胞内乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测方法。方法 蛋白酶K裂解法释放肝细胞核内HBV cccDNA及基因组DNA,细胞裂解液进行核酸纯化后用酚-氯仿法抽提,并采用酶消化和设计特异性引物两种方法排除其他病毒复制中间体对检测结果的干扰,最后进行聚合酶链式反应(P(R)。结果 以HBV松弛环状DNA(rcDNA)、阴性肝细胞、阴性血清作为对照,以包含HBV基因组全序列的质粒作为阳性对照,HBV感染者肝组织的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳后出现的条带与目标片段分子量相等,且产物的DNA测序结果显示其序列与目标序列一致。外周血HBeAg(+)患者组肝组织检测结果的阳性率高于HBeAg(-)患者组。结论 该方法检测肝细胞内cccDNA具有较高的特异性、敏感性,且成本较低。本方法临床标本初步检测结果显示病毒复制活跃患者肝组织中HBV cccDNA的阳性率较复制低的患者为高。 相似文献
93.
外周血树突状细胞免疫治疗体外培养条件的优化 总被引:6,自引:1,他引:6
树突状细胞(DC)是人体内最重要的抗原递呈细胞。DC在抗病毒、抗肿瘤免疫治疗中具独特作用,展现出良好的应用前景。研究已证实,乙型肝炎病毒(HBV)感染及HBV慢性发病机制与DC成熟状态,有着密切关系。本研究通过优化培养条件,为开展DC抗病毒治疗进行理论探讨。 相似文献
94.
新型乙肝表面抗原中蛋白核酸疫苗在中国猕猴体内免疫原性初步研究 总被引:1,自引:1,他引:0
贺奇彬 邢益平 潘素霞 张建桥 何小敏 韩亚萍 李军 黄祖瑚 王世霞 卢山 HE Qi-bin XING Yi-ping PAN Su-xi ZHANG Jian-qiao HE Xiao-min HAN Ya-ping LI Jun HUANG Zu-hu WANG Shi-xi LU Shan 《南京医科大学学报(自然科学版)》2006,26(7):491-495
目的:观察乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs)核酸疫苗在中国猕猴体内的体液和细胞免疫应答。方法:实验用中国猕猴实验组、对照组各2只,分别在第0、8、16、24、48周肌肉注射法接种核酸疫苗(pSW3891/MHBs)或对照载体(pSW3891)。ELISA法检测中国猕猴血清抗-HBs,CFSE-PI染色FCM(流式细胞术)法测定中国猕猴外周血淋巴细胞HBsAg特异性增殖反应。结果:实验组中国猕猴血清抗-HBs滴度在72周达到最高峰,最高滴度分别为1∶6400和1∶12800,对照组抗-HBs滴度始终保持在1∶50。实验组中国猕猴外周血淋巴细胞HBsAg特异性增殖反应明显增强,细胞分裂指数分别为18.64和14.70,而对照组细胞分裂指数分别为1.62和2.61。结论:建立了CFSE-PI染色流式细胞仪检测法来检测中国猕猴外周血淋巴细胞HBsAg抗原特异性增殖反应,方法创新,实用可靠。新型乙肝表面抗原中蛋白核酸疫苗pSW3891/MHBs在中国猕猴体内能产生良好的特异性体液和细胞免疫应答。 相似文献
95.
伴随着经济和社会的发展,人类的疾病谱发生着改变,心、脑血管疾病,恶性肿瘤及呼吸系统、代谢系统疾病居于死因顺位的前列,发达国家如此,象中国这样的发展中国家也如此。那么,对于多少年来给人类带来深重灾难的传染病的危害现在该作何评价呢?我们认为,如果说人类以往的历史是一部与传染病斗争的历史,今后则仍将续写这部历史。这是因为在现代社会,人1:7的增长和国际间人员流动的增多、国际贸易活动的增加、人类在开发自然界过程中与新的病媒生物的接触、环境和气候变化对病媒生物种类和数量的影响以及公共卫生事业发展的相对滞后,都使一些已有的传染病难以控制,而新的传染病又不断出现。 相似文献
96.
脂质体介导乙型肝炎病毒核心抗原基因转染人树突状细胞的效率 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 观察脂质体介导HBcAg基因转染来源于人外周血单个核细胞(PBMC)树突状细胞(DC)的转染效率.方法 用HES离心沉淀法分离人外周血PBMC,经粒-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)诱导培养DC,培养第5天以阳离子脂质体为载体将报告基因GFP(DNA:脂质体比例为1:3、1:4、1:5、1:6)及HBcAg基因(DNA:脂质体1:5)导入DC,于72h经流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达率,于48、72、96、120h流式细胞仪检测HBcAg的表达率.将基因转染后的DC 与自体淋巴细胞混合培养,检测其细胞内γ干扰素(IFN-γ)、IL-4表达水平.结果 倒置显微镜下观察脂质体转染后DC的的形态无明显变化.报告基因GFP与脂质体比例不同,其转染效率有差异,72h的表达率为37.12%(1:3)、48.55%(1:4)、52.13%(1:5)、50.75%(1:6).HBcAg基因转染DC后48、72、96、120h的HBcAg表达率分别为31.58%、55.80%、54.18%、56.99%.转染后DC与自体淋巴细胞混合培养后,淋巴细胞高表达IFN-γ,较少表达IL-4,呈现Th1为优势的免疫应答.结论 应用阳离子脂质体能有效的将HBcAg基因转染到人PBMC来源的DC,转染72h后抗原表达稳定;转染HBcAg基因的DC仍以诱导Th1免疫应答反应为主. 相似文献
97.
骨桥蛋白在肝癌患者外周血和癌组织中的含量及其临床意义 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 检测骨桥蛋白(OPN)在肝癌患者外周血和癌组织中的表达水平,分析其与肝癌临床病理特征之间的关系,并探讨OPN作为肝癌标志物的可能性.方法 应用免疫组织化学法检测34例肝癌和14例癌旁组织中OPN的表达;并应用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测51例肝癌患者的外周血OPN的表达水平,并结合临床病理特征进行分析.结果 (1)肝癌组织中OPN的阳性表达率(73.5%),明显高于癌旁组织中的(21.4%)(P<0.05).(2)肝癌患者血浆中OPN的表达水平与肿瘤的淋巴结转移、血管浸润和肝包膜浸润等病理特征有明显相关(P<0.05).(3)肝癌患者血浆OPN水平显著高于正常对照组(P<0.01),对肝癌检测的敏感性为90.2%,特异性为90.6%.结论 OPN在肝癌组织中呈过度表达.血浆OPN可以是肝癌诊断的一种较为特异的标志物,其表达水平与肝癌的淋巴结转移、血管及肝包膜浸润等多项临床病理特征有相关性. 相似文献
98.
HBV中片段表面抗原及E抗原真核表达质粒的构建与体外表达 总被引:2,自引:1,他引:2
目的 构建乙型肝炎病毒(HBV)中片段表面抗原真核表达质粒和E抗原真核表达闰。方法 将编码HBV中片段表面抗原(preS2+S)的基因片段和E抗原(HBeAg_的基因片段分别插入真核细胞表达载体(pJW4303)中,构建成的重组体经筛选鉴定后,再转染哺乳动物细胞,检测表达产物。结果 电泳鉴定显示目的基因片段正确插入了表达载体。经筛选、纯化的阳性克隆转染哺乳动物细胞后可表达preS2+S和HBeAg 相似文献
99.
核酸疫苗 ( DNA疫苗 )能够有效地刺激机体的特异性免疫应答已经成为共识。鉴于乙型肝炎病毒核心抗原 ( HBc Ag)是机体细胞毒性 T细胞 ( CTL )识别和攻击 HBV感染肝细胞的主要靶抗原 ,我们构建了 HBc Ag核酸疫苗 ,并已观察到该核酸疫苗经不同接种方法免疫不同品系小鼠均可引起特异性体液免疫和细胞免疫应答。为进一步观察该核酸疫苗对非人灵长类动物的免疫原性 ,我们用该核酸疫苗接种猕猴 ,发现猕猴对该核酸疫苗具有良好的抗体应答反应。1 材料和方法( 1 ) HBc Ag核酸疫苗的制备 HBc Ag核酸疫苗 ( p JW430 3/HBc)及对照质粒 ( … 相似文献
100.
乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白去糖基化对体液免疫应答的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白(MHBs)中去糖基化对体液免疫应答的影响.方法:在MHBs核酸疫苗(pSW3891/MHBs/adr)基础上,通过PCR扩增基因修饰法,使MHBs上编码第4、59、146位氨基酸密码子基因由AAT/AAC突变为CAG,从而使AAT/AAC编码的天冬酰胺Asn(N)突变为CAG编码的谷氨酰胺Gln(Q),使得N-糖基化位点NXS、NXT突变为QXS、QXT.构建3株去糖基化核酸疫苗(dG1,去除Asn4处糖基化位点,位于preS2上;dG23,去除Asn59、Asn146处糖基化位点,均位于HBs上;dG123,去除Asn4、Asn59及Asn146位糖基化位点).脂质体法转染293T细胞,Western blot检测,观察它们在293T细胞中瞬时表达的差异;肌肉注射法免疫BALB/c小鼠,观察MHBs去糖基化对小鼠体液免疫应答的影响.结果:adr、dG23转染293T细胞后,在细胞内及上清液中均检测到HBsAg;dG1、dG123转染293T细胞后,在细胞内检测到HBsAg,但是上清液中未测到.adr、dG1及dG23免疫BALB/c小鼠后均产生抗-HBs抗体,最高滴度均达到1∶102 400;dG123几乎无抗体反应(<1∶200).结论:Asn4去糖基化导致MHBs向细胞外的分泌障碍,但是对小鼠抗-HBs的产生无影响.Asn59、Asn146两处同时去糖基化对MHBs的分泌和小鼠抗-HBs的产生影响轻微.Asn4、Asn59及Asn 146三处同时去糖基化明显影响MHBs的分泌和小鼠抗-HBs的产生. 相似文献