HBV前C区1896位突变的检测方法及其评价

为建立一种简便可行的检测ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变的方法。采用本室自行构建的ＨＧＶ前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变株和野生株克隆作为标准株，对错配引物ＰＣＲ结合限制性片段长度多态性分析（ＲＦＬＰ），作为检测ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变株的进行了评价。结果显示，该方法操作较为简便，特异性和重复性较满意，可用于临床和科研。     

外周血单个核细胞分离方法探讨

目的 探讨外周血单个核细胞(PBMC)的不同分离方法对分离效果、贴壁能力以及淋巴细胞的增殖活性的影响。方法 取肝素抗凝血，分别用羟乙基淀粉(hydrixyethylstarch，HES)自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficoll密度梯度离心法三种方法分离单个核细胞，直接进行贴壁计数及多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer，CIK)培养。结果 HES自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficou密度梯度离心法分离的PBMC回收率分别为86．4％、86．0％、85．1％。结论 羟乙基淀粉离心沉淀法可有效地分离PBMC。     

献血者HBV自然感染后抗-HBs阴性的抗-pre-S1/pre-S2免疫应答研究

目的研究HBsAg的抗-preS在HBV自然感染后抗-HBs阴性献血者中的应答情况。方法采用ELISA法从8 265名5项血液学指标合格的献血者中筛选抗-HBs阴性,抗-HBc阳性的个体,然后再检测其抗-preS。结果共筛选抗-HBs阴性,抗-HBc阳性211例,其中抗-pre-S1/pre-S2阳性165例。结论 HBV自然感染后抗-HBs阴性个体大多数产生了针对HBsAg的抗-preS,该抗体具有更为良好的免疫原性;抗-preS检测能对抗-HBs无应答者进行进一步区分,免除不必要的免疫接种。     

重组干扰素α-2b治疗丙型肝炎二例的近期疗效观察

采用重组干扰素。α-2b(IFNα-2b)治疗活动性丙型肝炎患者2例,并用巢式多聚酶链反应(PCR)检测患者治疗前后HCV-RNA的血清学变化作为疗效评判标准。结果显示;2例患者血清HCV-RNA的治疗后2～4周即转阴,在三个月的治疗过程中,连续观察呈持续阴性,且伴抗HCV阴转,血清ALT恢复正常水平。研究结果提示IFNα-2b是目前治疗丙肝较为有效的药物之一。     

原发性肝癌,肝硬化患者血清中丙肝病毒抗体的检测

应用国产ELISA试剂盒对157例肝癌、肝硬化病人血清中抗-HCV及HBV-M进行检测，101例肝癌10例抗-HCV阳性，阳性率为9．9％；56例肝硬化6例抗-HCV阳性，阳性率为10．7％；肝癌组抗HCV与HBsAg双阳性率79％（8／101），HBsAg阳性率为723％（73／101），明显高于HCV感染率，说明HBV仍是乙肝流行地区的主要相关因素。14例抗-HCV阳性（包括可疑阳性），肝癌外周血中8例（57．1％）HBsAg阳性，推测HCV可单独作用但更常与HBV形成混合感染参与慢性肝病的癌变过程。     

生存素在肝细胞癌中的表达及其与Akt磷酸化的相关性

目的 研究抗凋亡基因生存素(survivin)在肝细胞癌中的表达及其与磷酸化蛋白激酶B(Akt)的相关性.方法 从30例肝细胞癌组织、11例癌旁组织、11例正常肝组织中提取总RNA及蛋白,利用RT-PCR、蛋白印迹,检测生存素在3种组织中的表达水平;并分析肝癌组织中生存素表达与Akt磷酸化水平的关系.结果 肝癌组织中生存素的表达水平明显高于癌旁和正常肝组织(P＜0.01);同时低分化、有肿瘤转移的肝癌其生存素表达强度明显高于高分化、无转移的肝癌(P＜0.05);相关分析表明,肝细胞癌组织中生存素的表达与Akt磷酸化的表达呈正相关(r= 0.8086,P＜0.05).结论 Akt磷酸化水平的增高可导致生存素蛋白表达水平的明显增高,生存素、磷酸化 Akt异常高表达与肝细胞癌具有密切关系,它们在肝癌的发生、发展中起着重要的作用.     

人原发性肝癌及癌旁组织丙肝病毒基因及其抗体的研究

 本文报道运用巢式多聚酶链反应，ELISA等方法检测我国原发性肝癌、癌旁组织和外周血中HCV-RNA，抗-HCV、同时监测了HBVAg，所用引物位于HCV基因5’-端非编码区域。结果76例肝癌病人血清标本7例抗-HCV阳性，(7/76，9.2%)10例HCV-RNA阳性(10/76、13.2%)；34例肝癌组织中4例HCV-RNA阳性(4/34，11.0%)。1例抗-HCV阴性的病人肝癌及癌旁组织中检测到HCV-RNA提示我国的HCC发病与HCV感染似有一定关系。本组检测到10例HCV-RNA阳性，其中4例(40%)系第二步扩增后检出，说明巢式PCR确可显著提高HCV-RNA的检出率，单纯用C100-3抗体检测有可能低估HCC中HCV的感染率。本研究发现HCVAg阳性的HCC中HBsAg检出率高于HCVAg阴性HCC者(P<0.05)。说明在我国HCC的发生中，HCV可单独，但更常与HBV共同作用。     

不规则发热、消瘦、腹痛、大量“果酱样”便

病历摘要患者男性,24岁,因不规则发热、消瘦、腹痛伴间歇性“果酱样”便二月余于1983年3月21日入院。1982年12月初,发现消瘦,12月23日晚突然解大量“果酱样”便1次。以后类似发作5次,至1983年2月7日因虚脱急诊入当地医院。其时有发热,热型不规则,体温波动于36.5℃～40.5℃,各项检查中除有中等度贫血、血沉107mm外,大便培养及多次找阿米巴滋养体均(-),血培养、肥达氏反应、“OT”试验、肝功能、骨髓象及骨髓培养、X线胸片、全消化     

密码子优化的中国HIV-1流行亚型gp120共识序列核酸疫苗的构建及其免疫原性的初步研究

目的:构建能表达密码子优化的中国HIV-1流行亚型AE、Bc和B'gp120共识序列的核酸疫苗,并研究其免疫原性.方法:根据HIV-1的分子流行病学资料和包膜糖蛋白的氨基酸序列分析,设计了针对中国流行的AE,BC和B'(ThB)亚型的gp120共识序列.按哺乳动物细胞偏好的密码子对AE.BC和ThB 3个亚型的gp120共识序列分别进行密码子优化,合成优化基因.将密码子优化的gp120基因克隆到核酸疫苗载体pSW3891,构建重组质粒核酸疫苗.将重组质粒转染293T细胞,并以重组质粒疫苗免疫新西兰兔.应用蛋白质免疫印迹法检测转染细胞中gp120蛋白的表达.ELISA方法检测免疫后兔血清中gp120特异性抗体的产生.结果:3个密码子优化的gp120核酸疫苗,均能正确表达gp120.这些gp120核酸疫苗免疫家兔后,能产生HIV-1包膜糖蛋白特异性的抗体.结论:成功构建3个密码子优化的、表达HIV-1中国流行亚型AE,BC和ThB的共识序列的gp120核酸疫苗,能诱导HIV-1包膜蛋白特异的免疫反应.     

人HCCR蛋白表达载体的构建、表达及其蛋白纯化

目的:构建人HCCR蛋白表达载体,并探讨其体外表达及表达产物的纯化。方法:培养人肝癌细胞,提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,以此cDNA为模板经PCR合成插入片段,连接至载体pMBP-C,转化到大肠杆菌Top10F′中,进行诱导表达。表达产物通过Ni-NTA螯合层析进行纯化。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,Westernblot和电喷雾电离串联飞行时间质谱(ESI-TOFMS)鉴定表达产物。结果:构建的表达载体经限制性内切酶酶切分析和DNA测序,证明所构建的质粒含有HCCR基因。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳发现该重组质粒经IPTG诱导后表达一种新的蛋白,这种蛋白不存在于诱导后的空载体表达产物中,表达产物经Westernblot和蛋白质谱鉴定含有HCCR蛋白的部分肽段。结论:成功构建了HCCR蛋白表达载体并进行体外表达及纯化。