乙型肝炎病毒前C/C变异对抗-HBc缺失和病毒复制的影响

ＨＢｃＡｇ有很高的免疫原性 ,ＨＢｓＡｇ阳性者抗 ＨＢｃ几乎10 0 %被检出。但有些患者ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ均阳性而抗 ＨＢｃ持续阴性 ,我们通过基因测序和检测病毒含量对这些特殊病例进行了研究 ,现将结果报道如下。材料与方法一、研究对象本组 18例为无锡市传染病医院 1999年 9月～ 2 0 0 0年 9月的门诊及住院患者。按照 1995年北京传染病与寄生虫病学术会议修订的临床肝炎诊断标准[1] ,其中乙型肝炎病毒携带者 (ＡｓＣ) 12例、慢性乙型肝炎 (ＣＨＢ)轻度 6例 ;男 11例 ,女 7例 ;年龄 (2 7.3± 8.4)岁。所有患者ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅ…     

丙肝宁冲剂治疗慢性丙型肝炎的临床研究

目的：评价丙肝宁冲剂治疗慢性丙型肝炎的疗效及安全性。方法：94例慢性丙型肝炎随机分为丙肝宁治疗组（A组，32例），联合治疗组（B组，干扰素α－1b加病毒唑，30例），单用干扰素组（C组，32例）。B，C2组为对照组。分别观察治疗26周，停药26周时的临床症状体征改善情况，血清丙氨酸转氨酶（ALT）的复常率，血清HCV－RNA的阴转率。结果：A；B，C3组治疗结束时的临床症状体征缓解率为100％，96．6％，90．6％。ALT复常率分别为59．4％，70％，46．9％，停药观察26周时，ALT持续复常率分别为40．67％，50％，25％，B组与C组之间比较有显著性差异，P＜0．05，HCV－RNA的阴转率分别为53．1％，63．3％，37．5％，HCV－RNA持续阴转率分别为34．4％，46．6％，18．8％，只有B组与C组之间比较有显著性差异，P＜0．05。结论：丙肝宁冲剂有明显抗丙型肝炎病毒疗效，且耐受性好，无严重不良反应，可成为慢性丙型肝炎治疗的有效方药之一。     

原发性肝癌患者血清及肝癌组织中HBV前C区1896位突变株的研究

为了解HBV前C区1896位G→A突变株和原发性肝细胞癌（HCC）的关系，采用错配引物PCR（m少PCR）扩增结合限制性片段长度多态性分析（RFLP），检测了83例HBsAg阳性HCC患者血清样本中的HBV前C区突变株，并与66份HBsAg（＋）的慢性乙型肝炎患者的血清标本对照。结果发现：HCC组有47例检出HBV前C区基因（56．6％），其中16例存在HBV前C区突变株（34．0％）；慢性乙肝组有33例检出HBV前C区基因（50．0％），其中仅4例存在HBV前C区突变株（12．1％），两组HBV前C区突变株检出率有显著差异（P＜0．05）。为进一步研究HBV前C区突变株在HCC患者中的状况，同步检测了8例HBsAg阳性HCC患者肝癌组织和血清中HBV前C区突变株，发现在HBV前C区基因阳性的肝癌组织、癌周组织和血清中HBV前C区突变株分别为3／8（37．5％）、3／7（42.9％）和1／5（20．0％），均比慢性肝炎组高，提示HBV前C区1896位G→A突变珠在原发性肝癌的发生中可能有一定作用。     

急性乙型肝炎患者特异性核心抗原细胞毒性T淋巴细胞频率的变化及其意义

目的 动态观察急性乙型肝炎(AHB)患者外周血HBcAg18-27表位特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、血清ALT、HBV DNA、HBsAg和淋巴细胞亚群的变化,探讨HBV特异性CTL频率的消长在病毒清除以及肝脏损伤中的作用.方法 分别选取AHB、慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血,根据人类白细胞抗原(HLA)-A0201结果分为两组:HLA-A0201阳性患者作为HBV特异性CTL检测组、HLA-A0201阴性患者作为特异性抗原表位对照组.用HLA-A0201限制性表位HBcAg18-27五聚体复合物通过流式细胞技术,动态定量检测外周血中HBV特异性CTL频率和T、B淋巴细胞与自然杀伤细胞(NK)和NKT淋巴细胞;以速率法检测血清ALT水平;荧光定量PCR检测HBV DNA水平; Abbott微粒子化学发光技术检测HBV血清学标志物.计量资料采用均数±标准差((x)±s)表示或中位数(P25-P75)描述,组间比较采用方差分析或非参数检验(KruskalWallis检验和Mann-Whitney U检验);两种计量指标的关系采用Pearson相关分析.结果 AHB患者入院第1、2、3周外周血HBcAg表位特异性CTL频率分别为2.11%(0.20%～3.64%)、3.56%(1.05%～5.91%)、2.03%(0.33%～3.58%),高于入院第4、5、6周的0.99%(0.12%～2.16%)、0.29%(0.05%～0.76%)、0.39%(0.05%～0.46%),也显著高于CHB的0.11%(0.06%～0.29%),z值分别为-3.258,-4.041,-3.259,P值均＜0.01.AHB患者HBcAg表位特异性CTL峰值延迟于血清HBV DNA、HBsAg和ALT等指标的峰值;在AHB患者中,HBcAg表位特异性CTL高频率患者的血清HBsAg消失时间早于CTL频率较低的患者[(1.75±1.04)周与(4.33±3.51)周,t=-2.018,P＜0.05].CD3+CD8+T淋巴细胞频率的峰值出现在入院后第2周,并与HBcAg表位特异性CTL峰值相重叠,两者动态变化规律呈相关性(r=0.420,P＜0.01).AHB患者早期外周血NK、NKT淋巴细胞数量显著低于正常对照组和CHB患者,但随着病情好转而逐渐恢复,AHB患者外周血NK细胞数量变化与HBcAg特异性CTL动态变化呈负相关(r=-0.435,P＜0.01).结论 急性HBV感染者高频率的HBcAg表位特异性CTL与HBsAg的更早消失有密切关系,动态监测外周血中HBcAg特异性CTL频率变化,可以作为预测HBV感染后临床转归的参考指标;AHB患者外周血CD8+T淋巴细胞数量的变化,可以间接反应AHB患者体内HBcAg特异性CTL频率的改变.

Abstract：

Objective This report aims to investigate the dynamical changes of HBcAg18-27 epitope specific cytotoxic T lymphocytes(CTL), alanine aminotransferase (ALT), HBV DNA and HBsAg in peripheral blood of acute hepatitis B patients, and to explore the roles of HBcAg18-27-specific CTLs in virus clearance and liver injury. Methods Acute hepatitis B (AHB) and chronic hepatitis B (CHB) patients were divided into two groups according to results of HLA-A0201. Patients with positive HLA-A0201 were classified into HBcAg-specific CTL group and those with negative HLA-A0201 were referred as control group.The specific CTLs were stained with HLA-A0201 limited HBcAg18-27 epitope MHC-Pentamer and the frequencies of CTLs, T, B, NK and NKT cells were detected by flow cytometry (FCM). The serum ALT, HBV DNA and HBsAg were examined using speed analysis, quantitative PCR and abbott chemiluminescent technology. Results The frequencies of HBcAg18-27-specific CTLs in AHB patients were higher in the early three weeks as compared to the late three weeks. The apex time of HBV-specific CTL frequencies lagged behind those of HBV DNA, HBsAg and ALT. The loss of HBsAg in patients with high frequencies of HBVspecific CTL was earlier than that in patients with low frequencies (t = 2.018, P ＜ 0.05). In the second week the peak frequencies of CD3+CD8+ cells overlapped with that of HBcAg18-27-specific CTLs and with a positive correlation between (r = 0.420, P ＜ 0.05). During the early stages of AHB, the frequencies of NK and NKT cells were found significantly lower than that of control group and CHB group and the levels were back to normal after recovery. Moreover, a negative correlation existed between the frequencies of NK cells and the dynamic changes of HBcAg18-27-specific CTLs (r = -0.435, P ＜ 0.01) in AHB group. The frequencies of HBcAg18-27-specific CTLs were significantly higher as compared to CHB group in the first three weeks (z = -3.258, -4.04, and -3.259, P ＜ 0.01). Conclusion The early loss of HBsAg was closely related to the high frequencies of HBcAg18-27 specific CTLs in AHB patients. HBcAg-specific CTL frequencies in peripheral blood could be used to predict clinical outcome after HBV infection. The frequencie of CD8+ T cells can reflect the changes of frequencies of HBcAg-specific CTL. during acute HBV infection.     

成人急性感染性腹泻诊疗专家共识北大核心CSCD

感染性腹泻呈高流行性和高发病率,发展中国家因腹泻病所致的医疗负担和经济负担严重,故仍然是值得关注的全球性公共卫生问题。世界卫生组织（World Health 0rganization,WH0）估计,全球每天有数千万人罹患腹泻病,每年发生腹泻病达17亿例次,其中有220万例患者因严重腹泻而死亡[1-2]。     

流行性出血热患者自发性抑制性T细胞功能的动态观察

观察了20例EHF患者的自发性抑制性T细胞(ST_s)功能,发现在病之极期ST_s活性显著低于正常(-49.07％vs.22.51％,P<0.001),多尿期和恢复期逐渐回升并趋向正常。轻症组患者极期的ST_s活性较重症组下降更为明显(-85.42％vs,-12.7％,P<0.05)。初步认为T_s功能低下是EHF体液免疫亢进的基本原因。T_s功能下降,使T_h和T_c功能相对增强,有利于清除病毒,终止感染,这可能是机体的一种保护性免疫反应。本文还提出关于EHF免疫调节过程的假设。     

乙肝疫苗接种者和隐性HBV感染者血清中和效应的初步研究

目的:探讨乙肝疫苗接种者和隐性感染康复者血清体外阻断HBV感染作用的差异.方法:雅培ELISA定量测定乙肝疫苗接种应答者和稳性HBV感染康复者血清乙肝表面抗体.再调整到相同含量,分别和HBV预孵育1 h后感染Hep G2细胞,24 h后巢式PCR检测Hep G2细胞中HBV-DNA,评估其阻断效应.结果:同等浓度下,隐性感染康复者和乙肝疫苗接种者血清对野生株HBV感染阻断作用无差异,但乙肝疫苗接种者血清对变异株无阻断效应,隐性感染康复者对变异株仍有阻断作用,其作用明显弱于野生株.结论:隐性感染康复者血清对野生株和变异株HBV均有阻断作用,而乙肝疫苗接种者血清对变异株无阻断效应,提示新型乙肝疫苗应包含更多抗原成分如前S1/S2抗原,以对HBV变异株产生中和效应,应用多种成分的抗乙肝免疫球蛋白阻断肝移植后变异株HBV再感染十分重要.     

HBsAg核酸疫苗诱导H-2b小鼠体液免疫应答的初步研究

目的：观察adw和adr亚型HBV PreS2 S核酸疫苗单一或联合HBcAg核酸疫苗诱导的小鼠体液免疫反应。方法：C57BL／6小鼠23只随机分为4组;pJW4303组（P组）,pJW4303/S2 S(adw亚型）组（W组）、pJW43/3S2 S(adr亚型）组（R组）,pJW4303/S2 S(adr) pJW4303/HBc组（R＋C组）。免疫方法为每只小鼠每次肌注相应质粒DNA100μg(100μl)。免疫程序为0、2、4周。于第3次免疫后4周W组、R组、R＋C组小鼠血清全部检出抗－HBs,抗体含量随免疫次数增多而增加,抗－HBs浓度最高达22329IU／L,与P组（对照质粒组）相比差异有显著性（P＜0．01）,但各核酸疫苗组之间差异无显著性（P＞0．5）。抗－HBs浓度最高达22329IU／L,与P组（对照质粒组）相比差异有显著性（P＜0．01）,但各核酸疫苗组之间差异无显著性（P＞0．5）。而抗－HBc在第一次免疫后2周即在R＋C组全部出现,抗－HBs和抗－HBc在P组始终未检出。结论：adw和adr亚型HBV PreS2 S核酸疫苗和HBc核酸疫苗能诱导H－2^b小鼠产生较强的体液免疫反应,联合HBc核酸疫苗有助于抗－HBs的早期产生。     

IL-12和IL-18基因免疫对HBcAg核酸疫苗诱导小鼠(H-2d)特异性免疫应答的影响

目的：观察IL-12和IL-18基因免疫对HBcAg核酸疫苗诱导小鼠（H-2d）特异性体液免疫和细胞免疫应答的影响.方法：用肌肉注射法将HBV核心区DNA疫苗、IL-12质粒和IL-18 质粒接种BALB/c小鼠;ELISA法检测小鼠血清抗-HBc（IgG）及IgG亚类（IgG1、IgG2a）;LDH释放法检测小鼠脾细胞HBcAg特异性CTL活性.结果：免疫6周后,HBcAg DNA疫苗联合IL-12质粒、IL-18质粒和IL-12＋IL-18质粒组小鼠的血清抗HBc终点滴度均明显高于单纯注射HBcAg DNA疫苗组小鼠（P＜0.05）,抗HBc IgG亚类以IgG2a占优.DNA疫苗免疫的各组小鼠,HBcAg特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤率均高于对照组（P组）,其中C＋IL-18组和C＋IL-12＋IL-18组中CTL值明显高于C组,尤以C＋IL-12＋IL-18组中的CTL杀伤率最高.结论：IL-12和IL-18基因与HBcAg DNA疫苗联合免疫,不仅能增强HBcAg特异性体液免疫应答,而且能增强HBcAg特异性CTL的杀伤活性.     

健康人单核细胞来源树突状细胞Toll样受体的表达模式分析

目的体外诱导健康人外周血单核细胞来源的树突状细胞（dendritic cell,DC）,动态定量分析DC表达Toll样受体（TLRs）的种类,探讨TLRs的表达水平与DC成熟的相关性。方法用羟乙基淀粉（HES）分离健康人外周血单个核细胞（PB-MC）,经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素4（rhlL4）诱导培养DC,于培养5d加或不加肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和干扰素一仅（IFN一仅）,诱导其为成熟与未成熟两种类型的细胞。分别于3、5、7d用特异性单克隆抗体（单抗）标记未成熟DC（immature DC,imDC）和7d成熟DC（mature DC,mDC）,在流式细胞仪（FACS）上检测,用CellQuest软件分析细胞表面共刺激分子（B7—1、B7—2）和MHCII类分子以及细胞内、外TLR3、TLR4、TLR7、TLR8、TLR9的表达百分率。结果健康人TLR3在imDC细胞膜表面的表达高于细胞内,并随着培养时间的延长有所下降;TLR4则主要表达在imDC细胞膜外,并伴随着干预性成熟而下降;TLR7在imDC细胞内的表达高于细胞表面,并随着imDC生长时间延长而逐渐增加,DC成熟时表达下降;TLR8和TLR9细胞内外均有表达,但细胞内稍高于细胞外,随DC成熟而表达增加。结论健康人单核细胞来源的DC表面TLRs的表达具有多样性,TLRs在DC的不同分化阶段表达模式不同,这种差异可能是DC通过TLRs识别病原体相关分子模式（pathogen associated molecular pattern,PAMPs）的基础,从而有效地调节或控制固有免疫与获得性免疫。