急性乙型肝炎患者特异性核心抗原细胞毒性T淋巴细胞频率的变化及其意义

目的 动态观察急性乙型肝炎(AHB)患者外周血HBcAg18-27表位特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、血清ALT、HBV DNA、HBsAg和淋巴细胞亚群的变化,探讨HBV特异性CTL频率的消长在病毒清除以及肝脏损伤中的作用.方法 分别选取AHB、慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血,根据人类白细胞抗原(HLA)-A0201结果分为两组:HLA-A0201阳性患者作为HBV特异性CTL检测组、HLA-A0201阴性患者作为特异性抗原表位对照组.用HLA-A0201限制性表位HBcAg18-27五聚体复合物通过流式细胞技术,动态定量检测外周血中HBV特异性CTL频率和T、B淋巴细胞与自然杀伤细胞(NK)和NKT淋巴细胞;以速率法检测血清ALT水平;荧光定量PCR检测HBV DNA水平; Abbott微粒子化学发光技术检测HBV血清学标志物.计量资料采用均数±标准差((x)±s)表示或中位数(P25-P75)描述,组间比较采用方差分析或非参数检验(KruskalWallis检验和Mann-Whitney U检验);两种计量指标的关系采用Pearson相关分析.结果 AHB患者入院第1、2、3周外周血HBcAg表位特异性CTL频率分别为2.11%(0.20%～3.64%)、3.56%(1.05%～5.91%)、2.03%(0.33%～3.58%),高于入院第4、5、6周的0.99%(0.12%～2.16%)、0.29%(0.05%～0.76%)、0.39%(0.05%～0.46%),也显著高于CHB的0.11%(0.06%～0.29%),z值分别为-3.258,-4.041,-3.259,P值均＜0.01.AHB患者HBcAg表位特异性CTL峰值延迟于血清HBV DNA、HBsAg和ALT等指标的峰值;在AHB患者中,HBcAg表位特异性CTL高频率患者的血清HBsAg消失时间早于CTL频率较低的患者[(1.75±1.04)周与(4.33±3.51)周,t=-2.018,P＜0.05].CD3+CD8+T淋巴细胞频率的峰值出现在入院后第2周,并与HBcAg表位特异性CTL峰值相重叠,两者动态变化规律呈相关性(r=0.420,P＜0.01).AHB患者早期外周血NK、NKT淋巴细胞数量显著低于正常对照组和CHB患者,但随着病情好转而逐渐恢复,AHB患者外周血NK细胞数量变化与HBcAg特异性CTL动态变化呈负相关(r=-0.435,P＜0.01).结论 急性HBV感染者高频率的HBcAg表位特异性CTL与HBsAg的更早消失有密切关系,动态监测外周血中HBcAg特异性CTL频率变化,可以作为预测HBV感染后临床转归的参考指标;AHB患者外周血CD8+T淋巴细胞数量的变化,可以间接反应AHB患者体内HBcAg特异性CTL频率的改变.

Abstract：

Objective This report aims to investigate the dynamical changes of HBcAg18-27 epitope specific cytotoxic T lymphocytes(CTL), alanine aminotransferase (ALT), HBV DNA and HBsAg in peripheral blood of acute hepatitis B patients, and to explore the roles of HBcAg18-27-specific CTLs in virus clearance and liver injury. Methods Acute hepatitis B (AHB) and chronic hepatitis B (CHB) patients were divided into two groups according to results of HLA-A0201. Patients with positive HLA-A0201 were classified into HBcAg-specific CTL group and those with negative HLA-A0201 were referred as control group.The specific CTLs were stained with HLA-A0201 limited HBcAg18-27 epitope MHC-Pentamer and the frequencies of CTLs, T, B, NK and NKT cells were detected by flow cytometry (FCM). The serum ALT, HBV DNA and HBsAg were examined using speed analysis, quantitative PCR and abbott chemiluminescent technology. Results The frequencies of HBcAg18-27-specific CTLs in AHB patients were higher in the early three weeks as compared to the late three weeks. The apex time of HBV-specific CTL frequencies lagged behind those of HBV DNA, HBsAg and ALT. The loss of HBsAg in patients with high frequencies of HBVspecific CTL was earlier than that in patients with low frequencies (t = 2.018, P ＜ 0.05). In the second week the peak frequencies of CD3+CD8+ cells overlapped with that of HBcAg18-27-specific CTLs and with a positive correlation between (r = 0.420, P ＜ 0.05). During the early stages of AHB, the frequencies of NK and NKT cells were found significantly lower than that of control group and CHB group and the levels were back to normal after recovery. Moreover, a negative correlation existed between the frequencies of NK cells and the dynamic changes of HBcAg18-27-specific CTLs (r = -0.435, P ＜ 0.01) in AHB group. The frequencies of HBcAg18-27-specific CTLs were significantly higher as compared to CHB group in the first three weeks (z = -3.258, -4.04, and -3.259, P ＜ 0.01). Conclusion The early loss of HBsAg was closely related to the high frequencies of HBcAg18-27 specific CTLs in AHB patients. HBcAg-specific CTL frequencies in peripheral blood could be used to predict clinical outcome after HBV infection. The frequencie of CD8+ T cells can reflect the changes of frequencies of HBcAg-specific CTL. during acute HBV infection.     

铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物的耐药机制研究

目的研究临床分离的铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法用琼脂稀释法测定临床分离的铜绿假单胞菌对环丙沙星和左氧氟沙星的最小抑菌浓度（MIC）以及加入羰基氰氯苯腙（CCCP）后的MIC;用PCR扩增gyrA及parC基因的喹诺酮耐药决定区,并对扩增产物进行测序分析;用肠杆菌基因间重复序列PCR（ERIC—PCR）对铜绿假单胞菌进行基因分型。结果20株临床分离株中,16株对喹诺酮类药物耐药,4株敏感;CCCP未能显著降低耐药株对环丙沙星和左氧氟沙星的MIC;16株耐菌株在gyrA均有Thr-83→Ile的改变,在parC均有Ser-87→Leu的改变;ERIC—PCR显示这16株耐药株电泳图谱一致,属于同一基因型,与敏感株有明显区别。结论gyrA合并parC基因突变是临床分离的铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药的主要机制。     

CD40配体刺激人外周血来源B细胞的长期培养及增殖活化

目的 建立外周血来源B细胞体外长期培养体系,观察培养过程中B细胞的增殖活化及抗原提呈功能.方法 利用重组人可溶性CD40配体(sCD40L)刺激人外周血B细胞的长期培养过程中,流式细胞技术检测B细胞DNA周期及B细胞表面CD80、CD86、主要组织相容复合物(MHC)Ⅰ类及Ⅱ分子的表达状况;观察B细胞增殖情况及B细胞活化后表面分子的表达.采用乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)-异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗原多肽与B细胞共孵育,检测B细胞对抗原多肽的负载能力.结果 人外周血B细胞在sCD40L培养体系中可长期培养达50 d,在此期间,B细胞绝对计数增加近10倍,外周血B细胞比例由8.21%增高到70.67%,活化的B细胞高表达CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ,并可负载HBV核心抗原肽.结论 sCD40L培养体系可在体外长期培养人外周血B细胞,并使B细胞增殖活化,具有抗原提呈细胞的特征.     

HBV表面抗原酶联免疫检测灰区设定的应用研究

[目的]通过中和确认实验及超敏HBV表面抗原检测试剂来验证乙肝表面抗原筛查诊断试剂盒设定灰区后对提高阳性检出率的影响。[方法]对两次均在检测灰区以下样本进行超敏HBV表面抗原检测试剂,同时用高效价人免疫球蛋白与样本血清中和后,再进行检测。[结果]84份检测灰区样本中超敏HBV表面抗原检测试剂再次检测为阳性样本21例,其中15例用中和确认方法为真阳性,6例确认为真阴性,超敏HBV表面抗原检测试剂有反应性样本S/CO显著高于常规筛查试剂检测结果。[结论]HBV表面抗原检测采用灰区设定方案有效提高了HBV阳性的检出率,增加了血液安全。     

输入性疟疾18例临床特点分析

@@     

腺苷蛋氨酸治疗慢性酒精性肝病合并重度肝内胆汁瘀积的评估

慢性酒精性肝病是由于长期饮酒造成的常见肝脏疾病。本文采用随机对照方法，前瞻性地观察腺苷蛋氨酸在慢性酒精性肝病合并严重肝内胆汁瘀积的治疗作用，以寻求新的有效的治疗方法。材料和方法收集1997年～1999年我院住院病人，慢性酒精性肝病组共11例，男10例，女1例，平均年龄46岁。必须符合以下的诊断标准：（1）有5年以上长期的饮酒史（男性＞120g／天，女性＞80g／天）。（2）血清总胆红素＞320mol／L，血清直接胆红素＞100mol／L。（3）五种病毒性肝炎的血清学指标均阴性，近期内无诱发肝损害的药物史。（4）B超和／或CT排除肝内外梗…     

丙肝宁冲剂治疗慢性丙型肝炎的临床研究

目的：评价丙肝宁冲剂治疗慢性丙型肝炎的疗效及安全性。方法：94例慢性丙型肝炎随机分为丙肝宁治疗组（A组，32例），联合治疗组（B组，干扰素α－1b加病毒唑，30例），单用干扰素组（C组，32例）。B，C2组为对照组。分别观察治疗26周，停药26周时的临床症状体征改善情况，血清丙氨酸转氨酶（ALT）的复常率，血清HCV－RNA的阴转率。结果：A；B，C3组治疗结束时的临床症状体征缓解率为100％，96．6％，90．6％。ALT复常率分别为59．4％，70％，46．9％，停药观察26周时，ALT持续复常率分别为40．67％，50％，25％，B组与C组之间比较有显著性差异，P＜0．05，HCV－RNA的阴转率分别为53．1％，63．3％，37．5％，HCV－RNA持续阴转率分别为34．4％，46．6％，18．8％，只有B组与C组之间比较有显著性差异，P＜0．05。结论：丙肝宁冲剂有明显抗丙型肝炎病毒疗效，且耐受性好，无严重不良反应，可成为慢性丙型肝炎治疗的有效方药之一。     

原发性肝癌患者血清及肝癌组织中HBV前C区1896位突变株的研究

为了解HBV前C区1896位G→A突变株和原发性肝细胞癌（HCC）的关系，采用错配引物PCR（m少PCR）扩增结合限制性片段长度多态性分析（RFLP），检测了83例HBsAg阳性HCC患者血清样本中的HBV前C区突变株，并与66份HBsAg（＋）的慢性乙型肝炎患者的血清标本对照。结果发现：HCC组有47例检出HBV前C区基因（56．6％），其中16例存在HBV前C区突变株（34．0％）；慢性乙肝组有33例检出HBV前C区基因（50．0％），其中仅4例存在HBV前C区突变株（12．1％），两组HBV前C区突变株检出率有显著差异（P＜0．05）。为进一步研究HBV前C区突变株在HCC患者中的状况，同步检测了8例HBsAg阳性HCC患者肝癌组织和血清中HBV前C区突变株，发现在HBV前C区基因阳性的肝癌组织、癌周组织和血清中HBV前C区突变株分别为3／8（37．5％）、3／7（42.9％）和1／5（20．0％），均比慢性肝炎组高，提示HBV前C区1896位G→A突变珠在原发性肝癌的发生中可能有一定作用。     

慢性乙型肝炎的免疫治疗进展

近年来,核苷(酸)类似物和干扰素(IFN)等抗病毒药物已广泛应用于慢性乙型肝炎(CHB)治疗,并取得了一定疗效.现有的抗病毒药物虽可显著抑制HBV复制,并部分恢复宿主的特异性免疫功能,但作用并不持久.慢性HBV感染患者要清除肝内HBV及感染肝细胞,必须依靠有效的特异性抗病毒免疫功能.