人胚胎干细胞外源基因的瞬时表达效率

背景：人类胚胎干细胞的修饰和操作技术多种多样,它们在效率、可靠性及安全性方面各有不同。目的：对比观察两种化学转染试剂转染含不同启动子的增强型绿色荧光蛋白表达载体在人胚胎干细胞中的表达效率。方法：采用Fugene HD和lipofectamine2000分别转染无滋养层培养的H9细胞,荧光显微镜下观察阳性克隆,流式细胞术分析不同载体pCAG-EGFP、pEGFP-N3在H9细胞中的表达效率。结果与结论：Fugene HD转染的pCAG-EGFP、pEGFP-N3两种载体在H9细胞中的表达效率分别为（42.45±3.32）%、（25.95±1.91）%,差异有显著性意义（P〈0.05）。lipofectamine2000转染的pCAG-EGFP、pEGFP-N3两种载体在H9细胞中的表达效率分别为（1.94±0.18）%、（1.49±0.33）%。采用Fugene HD转染的表达效率均高于lipofectamine2000转染的表达效率（P〈0.05）。结果显示在人胚胎干细胞的H9细胞系中,Fugene HD的转染效率显著高于lipofectamine2000;CAG启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白表达效率显著高于CMV启动子。     

新型化学转染试剂对人脐带间充质干细胞的转染优化

背景:人脐带间充质干细胞的基因修饰技术多种多样,它们在效率、可靠性及安全性方面各有不同。目的:对比3种新型化学转染试剂在人脐带间充质干细胞中的瞬时转染效率。方法:采用FugeneHD、LipofectamineLTX及Attractene分别转染人脐带间充质干细胞,荧光显微镜下观察阳性细胞,流式细胞术分析不同转染试剂的转染效率,锥虫蓝染色观察转染后人脐带间充质干细胞的生存率。结果与结论:LipofectamineLTX转染效率最高,显著高于FugeneHD和Attractene[(32.50±2.12)%,(4.30±0.64)%,(1.70±0.08)%,P<0.05]。LipofectamineLTX转染后的细胞生存率略低于FugeneHD及Attractene,但差异无显著性意义[(69.8±6.3)%,(92.4±4.2)%,(106.6±3.9)%,P>0.05]。提示LipofectamineLTX是人脐带间充质干细胞较为理想的化学转染试剂。     

TVT-S手术治疗女性压力性尿失禁15例报告

2009年3月至2010年4月我院采用TVT-S手术治疗女性压力性尿失禁(SUI)患者15例,现报告如下. 对象与方法 本组15例.年龄26～70岁,平均55岁.病程3～72个月,平均42个月.患者均为已婚生育,产次1次9例,2次5例,3次1例.临床症状表现为腹压增高时尿液不自主地从尿道口逸出,夜间睡眠时无漏尿,排尿通畅.     

半侧卧位后腹腔镜下肾上腺手术体会

目的 介绍半侧卧位后腹腔镜下肾上腺手术方法及经验.方法 2006年1月至2008年12月,采用自行设计的60°～70°半侧卧位行后腹腔镜下肾上腺手术36例.男20例,女16例.年龄23～67岁,平均43岁.肾上腺皮质腺瘤18例,嗜铬细胞瘤6例,囊肿3例,髓质脂肪瘤2例,神经节细胞瘤1例,淋巴管瘤1例,转移瘤1例,肾上腺皮质增生4例.肿物直径0.5～7.7 cm,平均2.6 cm.肾上腺肿物位于肾上极上方5例(左2例,右3例),肾上极前内侧10例(左8例,右2例),内上方17例(左8例,右9例).相对于侧位术式,术中穿刺孔位置前移,分离平面主要位于肾前面及内上方,可避开肾脏对操作的影响,病灶显露满意.结果 36例手术顺利完成.手术时间37～145 min,平均69 min.术中出血量30～100 ml,平均48 ml.术中发生腹膜破裂6例,闭合后继续完成手术.术后住院时间3～8 d,平均5 d.35例获随访3～28个月,平均14个月,1例转移性肿瘤患者术后第12个月死于原发病,未发生其他并发症.结论 半侧卧位后腹腔镜下肾上腺手术能有效减少肾脏的阻挡,有利于肾上腺区的暴露,可提高手术安全性.

Abstract：

Objective To discuss the semilateral supine position for retroperitoneoscopic adrenalectomy. Methods From Jan. 2006 to Dec. 2008, 36 patients (20 males and 16 females with mean age of 43 years) underwent retroperitoneoscopic adrenalectomy in 60° -70° semilateral supine position. There were adrenal cortex adenomas in 18 cases, pheochromocytoma in 6 cases, adrenal cysts in 3 cases, myelolipoma in 2 cases, gangliocytoma in 1 case, lymphangioma in 1 case, metastatic tumor in 1 case and corticohyporplasia in 4 cases. The mean diameter of the tumors was 2.6 cm( 0.5 - 7.7 cm ). The tumors were superior to the renal pole in 5 cases, anteromedial in 10 cases and superomedial in 17 cases. The three ports that were usually used in lateral position and were placed anteriorly to create retroperitoneal place: the first port was placed 2 -4 cm superior to the iliac crest along the anterior axillary line, the other two were placed just below the costal margin along the midaxillary line and at the same level along the midclavicular line, and dissected along the anterior surface of kidney to its superomedial aspect, so as to avoid the hampering of the kidney in the exposing of the diseased adrenal gland. Results The procedure was completed successfully in all of the cases with the operating time of 37 - 145 min ( mean 69 min) and intraoperative blood loss of 30 - 100 ml (mean 48 ml). Six cases had rupture of peritoneum, which were sutured and the procedure was continued to completion. The postoperative hospital stay was 3 -8 d (mean 5 d ). Thirty-five patients were available for follow-up of 3 - 28 months ( mean 14 months). The case of metastatic tumor died of the primary diseases in the 12th month postoperatively. No other complication was found. Conclusion With this alternative position and ports' location, the procedure of retroperitoneoscopic adrenalectomy could be easier and safer than the conventional position.     

细胞实验检测蓖麻蚕蛹生物反应器表达的重组人表皮生长因子的生物学活性

目的探讨蓖麻蚕蛹生物反应器中分离纯化获得的重组人表皮生长因子(rhEGF)蛋白质的生物学活性。方法采用Tricine-SDS-PAGE和免疫印迹法(Western blot)鉴定rhEGF,通过MTT和台盼蓝法检测rhEGF的细胞活性。结果 Tricine-SDS-PAGE、Western blot结果显示,蓖麻蚕蛹中分离纯化获得的rhEGF具有正确的分子量和免疫原性;MTT法显示,纯化的rhEGF具有酶促活性,且酶促活性优于rhEGF标准蛋白(P<0.05),其最高活性浓度为1.0μg/L,在0.0625～1.0μg/L浓度范围内具有剂量依赖性;rhEGF能够促进Balb/c3T3细胞的分裂增殖,效果优于rhEGF标准蛋白(P<0.05)。结论 AnpehEGF感染的蓖麻蚕蛹中分离纯化获得的rhEGF,具有类似天然hEGF的生物学活性,且效果优于rhEGF标准蛋白;rhEGF的细胞实验为进一步的动物实验提供了基础。     

损伤控制理念在腹部急诊与外伤中的应用经验（附120例报告）

目的 探讨损伤控制理念在腹部外伤与继发性腹膜炎病人中的应用价值。方法 回顾性分析2008年1月至2013年2月应用损伤控制手术救治120例腹部急诊与创伤病人的临床资料。结果 共完成消化道穿孔、继发性腹膜炎病人急诊溃疡穿孔修补术97例,十二指肠造瘘5例,平均手术时间（65±12） min,平均术中出血量（50±21） mL。无围术期死亡发生。术后并发症包括肺部感染8例,切口感染4例,无消化道漏、腹腔感染的发生。完成腹部损伤病人十二指肠造瘘术6例,胰腺损伤快速止血、清创及引流术5例,创伤性肝破裂肝深部缝扎及大网膜填塞术7例。平均手术时间为（100±28） min,术中平均出血量（250±65） mL。8例病人术后入ICU复苏。1例严重胰腺损伤病人术后3 d死亡。围术期并发症包括肺部感染4例,肾功能不全2例,胰漏1例,胆漏1例,肝脓肿1例。结论 行损伤控制手术病人,围术期死亡率和并发症发生率低。在外科创伤和急诊病人中疗效满意。     

年龄对人骨髓间充质干细胞分离培养的影响

目的:探讨年龄对骨髓间充质干细胞分离培养的影响以及在临床治疗中的意义.方法:通过分析183例人骨髓间充质干细胞分离培养情况,对比不同年龄段骨髓单个核细胞数、原代间充质干细胞数量、细胞增殖速度、细胞形态等方面的差异.结果:不同年龄段骨髓有核细胞、间充质干细胞免疫表型没有明显差异,单个核细胞数随年龄增长逐渐减少,但没有统计学差异.不同年龄段收获原代间充质干细胞数量、细胞增殖速度有明显差异(P<0.01).年轻组、中年组收获原代MSC细胞明显多于年老组,增殖能力明显强于年老组.结论:随着年龄的增长,骨髓中间充质干细胞的数量减少,增殖能力衰退,在干细胞临床治疗中,不适宜从老年患者中获取骨髓来源的间充质干细胞.     

人胚胎干细胞外源基因的瞬时表达效率

背景：人类胚胎干细胞的修饰和操作技术多种多样,它们在效率、可靠性及安全性方面各有不同。 目的：对比观察两种化学转染试剂转染含不同启动子的增强型绿色荧光蛋白表达载体在人胚胎干细胞中的表达效率。 方法：采用Fugene HD和lipofectamine2000分别转染无滋养层培养的H9细胞,荧光显微镜下观察阳性克隆,流式细胞术分析不同载体pCAG-EGFP、pEGFP-N3在H9细胞中的表达效率。 结果与结论：Fugene HD转染的pCAG-EGFP、pEGFP-N3两种载体在H9细胞中的表达效率分别为(42.45±3.32)%、 (25.95±1.91)%,差异有显著性意义(P < 0.05)。lipofectamine2000转染的pCAG-EGFP、pEGFP-N3两种载体在H9细胞中的表达效率分别为(1.94±0.18)%、(1.49±0.33)%。采用Fugene HD转染的表达效率均高于lipofectamine2000转染的表达效率(P < 0.05)。结果显示在人胚胎干细胞的H9细胞系中,Fugene HD的转染效率显著高于lipofectamine2000;CAG启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白表达效率显著高于CMV启动子。     

重型颅脑损伤术中急性脑膨出原因的探讨及手术策略

目的: 探讨重型颅脑损伤术中急性脑膨出原因及相应手术处理。方法: 根据不同具体情况,在手术时采取合理把握手术时机,分次梯度减压,额颞极切除内减压,手法压迫,减张缝合硬脑膜及合理使用脱水药物,过度换气等治疗策略。结果: 因急性弥漫脑肿胀引起23例,迟发性血肿引起9例。32例中恢复良好12例,轻残2例,重残1例,植物生存2例,病死15例。结论: 急性弥漫性脑肿胀、迟发性血肿是引起术中急性脑膨出主要原因。根据不同病因准确把握手术时机、采取相应手术措施,对控制和减少急性脑膨出的损害有效。     

大鼠胰岛细胞经门静脉肝内移植模型的建立

背景:由于肝脏既是胰岛索的作用部位,又是相对的免疫特惠区,排斥反应小,肝窦及其小静脉结构还有利于胰岛的居留和生长,可供移植容积大,有利于胰岛的生存,因此肝脏是一个较为理想的移植部位.目的:建立一种经门静脉胰岛细胞肝内移植治疗SD大鼠1型糖尿病的动物模型.方法:采用文献方法制备SD大鼠胰岛细胞.以腹腔注射链尿佐菌素诱导建立SD大鼠1型糖尿病模型,随机数字表法分为2组:实验组经门静脉主干穿刺输注SD大鼠胰岛1000胰岛当量1.5 mL;对照组经门静脉主干穿刺输注无血清1640液1.5 mL.术后未给予免疫抑制剂,观察两组大鼠出血量、血糖、胰岛素水平及肝脏组织形态学变化.结果与结论:所有大鼠均移植成活,门静脉穿刺一次成功率90%,出血量＜0.5 mL.胰岛移植大鼠血糖降为正常的时间1～6(3.7±1.7)d,移植胰岛存活时间为2~15(8.4±4.1)d.术后2周内实验组大鼠空腹血清胰岛素水平明显高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).病理结果证实,移植大鼠肝细胞形态、肝小叶结构均正常,肝实质未见坏死灶,血管内无血栓形成;门静脉主干未见狭窄,亦未发生感染,说明胰岛细胞在肝窦内存活并能发挥功能.证实大鼠胰岛经门静脉主干穿刺输注肝内移植是胰岛移植基础研究的理想模型.