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101.
目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与HLA-A*0201(A*0201)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法:以RT-PCR方法克隆A*0201cDNA,构建A*0201-EGFP融合蛋白表达载体,转染K562细胞,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果:从两个HLA-A2阳性供者外周血细胞中克隆到A*0201cDNA编码区全长序列。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码,成功构建A*0201-EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞,5h后A*0201和EGFP的表达百分率分别为25.12±2.26、27.37±3.59,24h后表达水平无明显提高。表达的融合蛋白主要分布于细胞膜上,胞内分布较少。相反,转染空载体的细胞不表达A*0201分子,仅表达EGFP,且其在细胞内呈弥散样分布。结论:成功构建A*0201-EGFP融合蛋白表达载体,并在K562细胞中得到表达,表达产物主要分布于细胞膜表面,提示表达该融合蛋白的K562细胞是潜在的人工抗原提呈细胞。 相似文献
102.
目的:优化诱导条件大批量表达生物素化酶BirA底物肽(BSP)与HLA-A*0203重链胞外域的融合蛋白(HLA—A*0203、BSP),并制备负载HLA-A*0203限制性EB病毒抗原肽EBNA3 596-604的四聚体(HIA—A}0203/SVR)。方法:以HLA—A*0203-BSP原核表达载体转化E.coli BL21(DE3)菌株,优化诱导条件进行大批量重组蛋白的表达。通过稀释法复性可溶性HLA-A*0203/SVR单体,然后以BirA对其进行生物素化,并以阴离子交换树脂纯化。将纯化的HLA-A*0203/SVR单体与荧光素标记的链亲和素按4:1的比例混合形成四聚体,通过对特异性CTL进行染色验证其结合活性。结果:当IPTG的浓度为0.4mmol/L,于37℃诱导过夜后,融合蛋白的表达最多。该重组蛋白相对分子质量(Mr)为34003,与HLA—A*0203-BSP的理论Mr相一致。该重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀部分,约占菌体总蛋白的30%。负载抗原肽的可溶性HLA-A*0203/SVR单体是在同时存在HLA-A*0203,BSP、β2微球蛋白及HLA-A*0203限制性抗原肽SVR的情况下通过稀释法复性而获得。该单体生物素化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4:1的比例混合后即形成四聚体。流式细胞术(FCM)分析证实,该四聚体具有与HLA—A2^+供者特异性CTL结合的活性。结论:HLA—A*0203-BSP融合蛋白在优化条件下获得高效表达。以此蛋白制备的HLA-A*0203/SVR四聚体具有与HLA-A2^+供者特异性CTL结合的活性,为研究HLA—A*0203个体EB病毒特异性CTL的免疫应答打下了基础。 相似文献
103.
104.
目的 将Arg-Gly-Asp(RGD)肽偶联到壳聚糖(cH)材料表面,并制备成包载质粒DNA的纳米粒子,以未偶连RGD的壳聚糖载质粒DNA作为对照,进行体外内皮细胞转染,观察其是否能提高对内皮细胞的转染效率.方法 以1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)为偶联剂,通过酰胺键将RGD肽偶联到壳聚糖表面,对其进行表征,并以未偶连RGD的壳聚糖作为对照,制备载pEGFP-C1质粒DNA纳米粒子,比较2者对Hy926细胞的转染效率.结果 壳聚糖-RGD(CH-RGD)载基因纳米粒子转染Hy926细胞的效率明显高于未偶连RGD的壳聚糖载基因纳米粒子(35.7%vs 14.3%,P<0.001).结论 RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子可用于体外细胞转染,其对细胞的转染效率明显优于未偶连RGD的壳聚糖. 相似文献
105.
目的 探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法 以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 从活化的人白细胞中克隆到常规剪切体PD L2Ⅰ和新型剪切异构体PD L2Ⅱ的cDNA ,后者删除了编码胞外区Ig C结构域的外显子 3。进而构建了PD L2Ⅰ EGFP和PD L2Ⅱ EGFP融合蛋白表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞。流式细胞仪分析显示 ,转染前者的细胞中既可检测到EGFP的表达又可在细胞膜上检测到PD L2表达 ;而转染后者的细胞中只能检测到EGFP的表达 ,在其细胞膜上不能检测到PD L2表达。共聚焦显微镜观察显示 ,PD L2Ⅰ EGFP主要分布于细胞膜表面 ,PD L2Ⅱ EGFP则主要分布于细胞内。结论 常规剪切体PD L2Ⅰ能正确定位于细胞膜表面 ,而新型剪切异构体PD L2Ⅱ则位于细胞内 ,不能运输至细胞膜 ,提示不同PD L2剪切异构体可能与其功能的调变有关 相似文献
107.
新型mucA基因突变的铜绿假单胞菌生物被膜的形成和藻酸盐相关基因表达的研究 总被引:4,自引:1,他引:4
目的 确定黏液型铜绿假单胞菌PA17的mum基因突变位点,研究藻酸盐合成相关基因在其生物被膜形成过程中的表达,并观察PAl7生物被膜形成过程和形态。方法 PCR方法扩增铜绿假单胞菌PA17的mueA基因全长并测序;改良平板培养法建立PA17的生物被膜模型,半定量RT-PCR测定生物被膜形成24h、3d.6d时藻酸盐合成相关基因,algD、algU和algR的表达,并进行统计学分析;扫描电镜观察不同时间点的生物被膜形态。结果 PA17的mucA基因第166~333位核苷酸片段缺失,第342位A→G;其藻酸盐相关基因algD和algU均在生物被膜形成过程的第6天表达水平最高,algR在24h表达最高,单因素方差分析显示,上述基因在生物被膜形成过程不同时间点表达的差异有统计学意义;PA17于第6天形成成熟生物被膜,形态为薄膜状。结论 PA17是一株含新型mucA突变基因的黏液型铜绿假单胞菌,其藻酸盐相关基因在生物被膜形成的不同时间点的表达差异具有统计学意义,其生物被膜形态为薄膜状。 相似文献
108.
张虹夏慧琳高关心 《中国卫生质量管理》2021,(7):001-5
按照世界卫生组织医疗器械技术序列《采购流程与资源指南》中医疗器械标准购置流程,以微型卫生技术评估(Mini-HTA)、VAC价值分析评估以及项目评估模型为依据,建立了标准且完整的医疗设备医院层级准入评估模型。该模型主要包括技术评估、效益评估、安全评估以及附件因素评估等四项指标,以实际证据为依据,采用定性、定量相结合的方式对医疗设备进行评估。应用该模型,对医院2019年50万元以上医疗设备进行准入评估,认为可有效优化医院资源配置,为医疗设备购置决策提供依据。 相似文献
109.
朱丹丹高关心王学军夏慧琳李岳飞张晓燕边立军 《中国卫生质量管理》2021,(7):006-9
依据《医疗器械临床试验质量管理规范》,参考丹麦卫生技术评估中心制定的Mini-卫生技术评估清单,结合医院实际,建立了医疗器械临床试验准入评估模型。该模型主要包括医院评估、器械评估、患者评估、机构评估及经济评估等5项指标、26项内容。实际应用中,确保了所承接的临床试验能在规定时间节点内顺利完成,并保障了试验质量和受益者权益。 相似文献
110.
目的 调查医院护理人员肌肉骨骼患病情况并分析影响因素,指导制定有效的干预措施。方法 于2021年2—6月采用肌肉骨骼疾患调查表评估郑州市二级及以上医院护理人员肌肉骨骼患病情况,同时参照快速上肢评估方法评估人体工效学负荷等级,收集护理人员的人口学资料等,分析肌肉骨骼疾患发生的影响因素。结果 最终纳入1 031名护理人员,肌肉骨骼患病率为77.21%,以颈、肩、腰部患病更多见。多因素Logistic回归分析结果显示年龄(OR=1.520)、BMI≥24.0 kg/m2(OR=1.960)、有生育过(OR=1.114)、工龄(OR=2.208)、医院级别(OR=2.751)、科室(内科:OR=0.451、儿科:OR=0.671、妇产科:OR=0.184、急诊:OR=2.487、其他科室:OR=0.191)、人体工效学负荷等级(OR=2.560)是医院护理人员肌肉骨骼患病的影响因素。结论 医院护理人员肌肉骨骼患病率处于较高水平,受到多种因素影响,应当针对性采取干预措施帮助护理人员减少不良工作姿势、改善工作环境,降低肌肉骨骼患病率,提高医护人员身体健康水平。 相似文献