小剂量CpG ODN预处理对细菌脓毒症小鼠的保护作用及其机制探索

目的:研究CpGODN对细菌脓毒症小鼠的保护作用及其部分作用机制。方法:建立细菌脓毒症小鼠模型,给予不同剂量的CpGODN后,再给予热灭活E .coli攻击小鼠,观察各组小鼠的死亡情况;有效剂量的灭活E .coli攻击小鼠后收集血清,测定血清中TNF α浓度。结果:10mg·kg-1CpGODN预处理小鼠,可缩短灭活E .coli攻击后小鼠的死亡时间;提前给予3d 2mg·kg-1CpGODN ,能提高灭活E .coli攻击小鼠的存活率;CpGODN预处理能有效抑制细胞因子TNF α的释放。结论:适当剂量的CpGODN预处理对灭活E .coli攻击小鼠具有保护作用,其机制可能与抑制Th1型细胞因子TNF α的释放有关。     

白鲜皮抗内毒素活性物质的分离提取与活性研究

目的 筛选与类脂A(lipid A)具有较高结合活性的中药,从中提取具有拮抗内毒素(lipopolysaccharide, LPS)活性的物质.方法 采用生物传感技术,以lipid A为靶点,检测42种中药的水提物与lipid A的结合活性;以白鲜皮为研究对象,通过大孔吸附树脂、溶剂萃取、聚酰胺柱层析和高效液相色谱(HPLC)法,分离提取与lipid A结合活性较高的组分;动态比浊法鲎试验检测HPLC产物DPR-1～3对LPS(0.1 ng/ml)的中和作用;ELISA法检测DPR-2对LPS(100 ng/ml)刺激的RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的影响.结果 8种中药水提物与lipid A具有较高的结合活性(RU＞100 arc/s);从白鲜皮中逐步分离出与lipid A结合活性较高的组分,经HPLC法获得3种物质DPR-1～3;DPR-2对LPS具有一定的中和作用,在8 μg/ml浓度以上可显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞释放TNF-α和IL-6 (P＜0.05),并具有剂量效应关系.结论 从42种中药中筛选出与lipid A具有较高结合活性的中药白鲜皮,并从中分离提取出抗LPS活性物质DPR-2,其抗LPS活性可能与DPR-2对LPS的中和活性有关.     

白鲜皮提取物拮抗内毒素/脂多糖的实验观察

目的 了解白鲜皮提取物2（DPR-2）对内毒素／脂多糖（LPS）的体外拮抗活性。方法 采用动态比浊法鲎试验定量检测DPR-2对LPS（0．1μg／L）的中和作用，激光共聚焦扫描显微镜观察不同浓度DPR-2（0、8、0、16．0、32．0、64．0mg／L）对异硫氰酸荧光素-LPS（FITC-LPS，100．0μg／L）与小鼠单核细胞株RAW264、7结合力的影响，用荧光定量反转录．聚合酶链反应（RT-PCR）法检测以上浓度DPR-2对LPS（100．0μg／L）刺激的RAW264．7细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）mRNA表达的影响。结果 DPR-2对LPS具有一定的中和作用（P〈0．05或P〈0．01）；浓度为32．0、64．0mg／L时可显著抑制FITC-LPS与RAW264．7细胞结合（P〈0.01）；对LPS刺激的小鼠RAW264．7细胞TNF-α和IL-6mRNA的表达有抑制作用，该作用具有一定的剂量-效应关系。结论 DPR-2可通过中和LPS的作用阻断与RAW264．7细胞膜受体结合，从而抑制LPS介导的细胞活化。     

2型、5型腺病毒DNA与12型腺病毒DNA、大肠杆菌DNA序列的对比研究

目的通过对2型、5型人腺病毒DNA（Adv2、5 DNA）与Adv12 DNA及大肠杆菌DNA（EC DNA）序列进行对比研究,确定Adv2、5 DNA中能够拈抗细菌DNA的可能的活性片段——抑制性CpG寡核苷酸（CpG-N ODN）。方法从NCBI核酸数据库中获取Adv2、5、12 DNA和EC DNA序列,采用DNATools、BioEdit等软件对Adv2、5、12 DNA和EC DNA进行序列分析和比较,确定Adv2、5 DNA特征性的CpG基序,查找出Adv2、5 DNA中以上述CpG基序为核心的12碱基寡核苷酸（12-ODN）。结果确定了19种Adv2、5 DNA特征性的CpG基序,Adv2、5 DNA中以这19种CpG基序为核心的12-ODN共504条。结论504条12-ODN可能是Adv2、5 DNA的CpG-N ODN。     

Role of E.coli DNA in systemic inflammatory response syndrome

Objective: To investigate whether bacterial DNA involving in the pathogenesis of systemic inflammatory response syndrome (SIRS) and possible mechanism. Methods: Escherichia coli DNA (EC DNA) was extracted from Escherichia coli 25922 with alkaline lysis method. The mice mortality was observed after EC DNA was injected into mice via caudal vein. The changes of serum TNF-α and IL-6 levels in rats were measured with ELISA after rats were given EC DNA. Calf thymus DNA and lipopolysaccharide (LPS) were used as the control, respectively. Results: EC DNA led mice to death with notable dose-effect relationship (LD50 = 11. 51 mg/kg), but CT DNA didn't. The peak level of TNF-α was lower in EC DNA group than in LPS group (P<0. 05), though the former reaching the peak I h earlier than the latter. However, they had coordinate ability to induce IL-6 release in rats, and no significant difference was seen in serum IL-6 peak level between 2 groups. Conclusion: EC DNA leads mice to death, and induces the increases of s     

抗菌蛋白葛栳纱在乳酸乳球菌中的表达研究

观察人工设计的葛栳素的cDNA在乳酸乳球菌中的表达及其表达产物的抗菌作用。方法:采用统计学方法,统计同种族蛋白质Attacin A cDNA序列各种遗传密码子的出现频率,并以此为基础根据已知的葛栳素蛋白质序列设计其cDNA序列。采用PCR     

一种高效FITC标记LPS方法的建立及应用

目的 探索一种高效的荧光素示踪内毒素(lipopolysaccharide,LPS)的方法.方法 将LPS解聚为单体后,加入表面活性剂,在37℃中性溶液中用FITC标记LPS 18 h,通过分子截留技术将小分子游离的FITC及其他杂质从FITC-LPS中除去,并用荧光分光光度计分别测定标记反应液和纯化后的FITC-LPS溶液的荧光值,将两者进行比较,测定荧光标记率.结果 本方法标记的FITC-LPS在激光共聚焦显微镜下能进行良好示踪.经荧光分光光度计检测其标记率为LPS:FITC=1:33.13(物质的量比值).结论 利用表面活性剂与超滤纯化相结合对LPS进行FITC标记的方法较传统方法效率高,操作简单可靠,为医药学实验中示踪LPS提供了一条有效的途径.     

氯喹对内毒素血症小鼠的保护作用以及对细胞因子的影响

目的　探讨氯喹对内毒素血症小鼠的保护作用以及抑制内毒素引起的细胞因子释放情况。方法　清洁级昆明小鼠 40只 ,随机分为LPS、氯喹、氯喹 +LPS和对照组 ,每组动物 10只。LPS组 ,给予 10mg kg的LPS ;氯喹组 ,给予 2 0mg kg的氯喹 ;LPS +氯喹组在给予 2 0mg kg氯喹后 ,立即给予 10mg kg的LPS ;对照组给予注射用水 ,注射体积为 2 0 0 μl 2 0g。观察尾静脉给药后 7h内小鼠的死亡率。体外培养小鼠ANA 1细胞 ,观察培养体系中预先加入氯喹 3h后 ,不同浓度的LPS引起的TNF α、IL 6的释放情况。结果　氯喹可降低内毒素引起的小鼠死亡 ,死亡率由 10 0 %降低为 5 0 % (P <0 0 5 ) ;培养体系中预先加入氯喹后LPS引起的TNF α、IL 6的释放显著降低 ,尤其以IL 6的下降最明显 ,在LPS(4 0 μg ml)刺激组IL 6降幅可达 68倍之多。结论　氯喹对内毒素血症小鼠具有显著保护作用 ,可明显抑制内毒素引起的细胞因子释放 ,提示氯喹可能是治疗内毒素血症的有效药物     

小剂量CpG预处理对细菌脓毒症小鼠保护作用的初步研究

目的：临床上SIRS／脓毒症的病死率高达30％～50％．而且缺乏能有效防治SIRS／脓毒症的药物，防治SIRS／脓毒症仍然是目前临床亟待解决的难点和焦点问题之一。小剂量CpG ODN包含的CpG基序能活化天然免疫系统，如单核巨噬细胞、树突状细胞、NK细胞。也能激活获得性免疫系统，包括B细胞、T细胞，从而诱导并增强天然和获得性免疫应答，预防感染性疾病。但国内外尚未见将CpG ODN应用于细菌脓毒症的研究。本研究拟以灭活大肠杆菌经尾静脉注入小鼠体内，制造细菌脓毒症模型；     

抗菌肽葛佬素在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其活性的初步分析

目的 观察自行设计的葛佬素cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其表达产物的抗菌作用。方法 分析同种族蛋白质Attacin A cDNA序列各种遗传密码子的出现频度，结合已知的葛佬素蛋白质序列，设计、合成其cDNA序列。经测序验证后，将葛佬素基因插入真核细胞表达载体pCDSI中，构建载体pBZHG。随后以脂质体为载体，对COS—7细胞进行质粒pBZHG和空载体pCDSI的转染，72h后收集细胞培养上清液，进行杀菌活性的检测(以正常C0S—7细胞培养上清作对照)。结果 人工设计的葛佬素cDNA序列在COS—7中得到表达。与转染空载体的细胞和正常细胞比较，转染pBZHG的COS—7细胞培养上清对大肠杆菌J5具有杀菌活性。结论 笔所设计的葛佬素cDNA序列是正确的，由此可为深入研究葛佬素的抗菌及抗内毒素作用提供实验依据。