PBL教学法在八年制医学免疫学理论教学中的实践

PBL教学法是我国教学发展改革的方向之一,为了探索八年制医学免疫学理论课教学的新方法,从2007年起我们将传统教学与PBL教学法相结合的新模式应用于我院2004和2005级八年制医学免疫学的理论教学中。先以传统教学方法课堂讲授基础知识,然后安排PBL讨论课,学生进行自由讨论和发言,教师从旁引导;通过课堂反应和问卷调查评估教学效果。结果表明,这种新的教学模式受到了学生的欢迎和认可,教学效果良好。     

早产儿支气管肺发育不良症临床分析

目的了解早产儿支气管肺发育不良（BPD）的临床特点。方法 2007年1月至2009年12月本院新生儿重症监护病房收住920例早产儿,对其胎龄、出生体重、原发疾病、肺部X线表现、治疗经过等临床资料进行分析。结果 920例早产儿中24例发生BPD,胎龄〈28周6例,28～30周13例,～32周3例,～35周2例;出生体重〈1000g 6例,1000～1500g 13例,～2500g 5例;轻度BPD 13例,中度BPD 6例,重度BPD 5例;需要机械通气时间为（1.04±26.35）d,需吸氧时间为（47.22±22.49）d,住院时间为（65.29±23.46）d。BPD患儿中合并肺部感染37.5%,脑积水16.7%,早产儿视网膜病16.7%,动脉导管未闭20.8%。所有病例经综合治疗治愈14例,放弃治疗后死亡5例,好转5例,其中3例出院后6个月内均因肺部感染再次住院。结论早产儿肺发育不成熟、长时间吸氧及机械通气、肺部感染是BPD发生的主要因素,故积极预防早产,尽量避免机械通气以及减少机械通气、吸氧时间,积极预防和治疗肺部感染及关闭动脉导管可能会减少BPD的发生。     

人胰岛素样生长因子在pET-DsbA载体中的克隆及表达

目的 通过重组技术,对胰岛素样生长因子IGF-Ⅰ基因进行缺失、突变以获得最有利于高水平表达的IGF-Ⅰ cDNA.构建原核表达载体,并进行表达,以获得能够高水平表达高活性产物的基因工程菌珠.方法 提取人肝脏组织总RNA,RT-PCR后琼脂糖电泳初步鉴定产物.将cDNA回收、补平后插入克隆质粒KS,酶切鉴定后,对IGF-Ⅰ基因进行序列分析.采用PCR法从克隆质粒中扩增IGF-Ⅰ片段,亚克隆至pET-DsbA原核表达载体,酶切鉴定,并进行序列测定.转化到大肠杆菌BL21(DE3)PLysS中,IPTG诱导表达,聚丙稀酰胺凝胶电泳、Western Blot分析目的蛋白.结果 成功构建原核表达载体pET-DsbA-IGF-Ⅰ,测序结果与预期序列完全一致,并在大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达出IGF-Ⅰ融合蛋白.结论 IGF-Ⅰ融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3) PLysS中的表达,对进一步研究IGF-Ⅰ的功能及开发其生物制品具有重要意义.     

ctB和ureⅠ双基因融合表达及其免疫特性分析

目的：构建霍乱毒素B亚单位（CtB）和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白（UreⅠ）融合的原核表达质粒pET32a（＋）ctB/ure Ⅰ,并初步研究融合蛋白Ct B/Ure Ⅰ的表达特性和免疫特性.方法：PCR从pUC18 ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a（＋）/ureⅠ的ureⅠ基因5＇端插入ctB基因,构建ctB和ure Ⅰ双基因原核表达质粒pET32a（＋）ctB/ure Ⅰ,转该质粒于E.coli BL-21（DE3）,经酶切和序列分析鉴定工程菌.IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-Pro Analizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠.用Western blot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性.结果：工程菌含完整的ctB和ure Ⅰ基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%.在22℃,1 mmol/L IPTG诱导4 h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%.Western blot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体.结论：成功构建了能表达CtB/Ure Ⅰ蛋白的大肠杆菌表达菌株.对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和Ure Ⅰ的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础.     

ctB和ure I双基因融合表达及其免疫特性分析

目的构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI)融合的原核表达质粒pET32a( )ctB/ureI,并初步研究融合蛋白CtB/UreI的表达特性和免疫特性。方法PCR从pUC18ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a( )/ureI的ureI基因5′端插入ctB基因,构建ctB和ureI双基因原核表达质粒pET32a( )ctB/ureI,转该质粒于E.coliBL-21(DE3),经酶切和序列分析鉴定工程菌。IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-ProAnalizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠。用Westernblot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性。结果工程菌含完整的ctB和ureI基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。在22℃,1mmol/LIPTG诱导4h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%。Westernblot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体。结论成功构建了能表达CtB/UreI蛋白的大肠杆菌表达菌株。对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和UreI的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。     

广东省珠海市户籍人群中β-地中海贫血的分子流行病学调查

目的　调查珠海市这座新兴“移民”城市中户籍人群中 β-地中海贫血 (β -地贫 )的携带率、基因突变类型及其频率分布 ,包括 β -地贫合并α -地贫的发生率。方法　连续抽取婚前对象的静脉血大样本 ,先用血液学分析法筛查 β -地贫表型阳性样品 ,再应用反向点杂交 (RDB)和gap -PCR技术分别对之进行β -地贫基因和东南亚缺失型 (- - SEA)α-地贫的定型 ,未知样品则进行DNA直接测序分析。结果　在 1,5 84例婚检对象中 ,检出 β -地贫表型阳性样品 37例 ;经基因分析 ,34例被确定了β -地贫基因型 (包括 2个小红细胞症且 3 5 %≤HbA2 <4 .0 %的病例 ) ,共检出 9种基因型并总结出它们的构成比。其余的 3例 (有 2例 3 5≤HbA2 <4 .0 %)经DNA测序未发现突变。因此 ,该市户籍人群中的 β -地贫基因携带率为2 2 %(35 / 1,5 84 ) ;9种已知β -地贫的基因频率—CD4 1- 4 2s(-CTTT)和 - 2 8(A→G)分别为 34 3%和 2 5 7%;IVS - 2nt6 5 4(C→T)和CD2 6 (G→A ,BE)、CDs71- 72 (+A)t和CD4 3(G→T)各为 8 6 %、5 7%;CD17(A→T)、- 2 9(A→G)和CDs2 7- 2 8(+C)及未知突变均为 2 85 %。值得提及的是 ,在 35例 β -地贫基因阳性样品中 ,有 2例是从 3 5 %≤HbA2 <4 .0 %样品中检出。此外 ,还从 35例 β-地贫基因阳性样品     

广东省河源市龙川县紫市镇猫、犬、猪、鼠寄生虫感染情况调查

目的了解广东省河源市龙川县猫、犬、猪、鼠寄生虫感染情况，为人体寄生虫病防治工作提供科学依据。方法采用生理盐水直接涂片法和清水自然沉淀集卵法，检查猫、犬、猪、鼠粪便，查找寄生虫虫卵。结果调查猫、犬、猪、鼠粪便271份，检出寄生虫卵89份，寄生虫总感染率为32．84％。以猫、犬寄生虫感染率最高。寄生虫感染度以猫粪中的曼氏迭宫绦虫最高，平均每张玻片检出虫卵580个。检出寄生虫卵6种：钩虫卵、蛔虫卵、鞭虫卵、曼氏迭宫绦虫卵、长膜壳绦虫卵和姜片虫卵。猫、犬、猪、鼠各种寄生虫感染情况，以钩虫、蛔虫、鞭虫和曼氏迭宫绦虫感染多见。猪感染寄生虫种类最多。结论广东省河源市龙川县紫市镇猫、犬、猪、鼠寄生虫感染情况比较严重，以猫、犬为甚。寄生虫感染种类较多，提示当地人群也可能有同类寄生虫感染，应引起当地政府和卫生防疫部门的高度重视。     

云浮市呼吸道和消化道传染病发生与气象因素的关系探讨

目的研究云浮市气温、相对湿度、气压等气象因素对传染病发生的影响。方法监测、收集2006-2007年云浮市呼吸道和消化道两类传染病的发病情况，结合两年云浮市气温、相对湿度、降水量、气压、日照时数等5个气象因素变化，分析疾病发生与气象因素两者的关系。结果两类传染病发生受气象因素的影响较大，气候发生变化时，疾病的发生和流行亦产生很大的变化。结论气象因素是影响传染病发生和流行的重要因素，两者关系较密切。     

SIP1基因编码区点突变及多态性在先天性巨结肠症中的检测与分析

目的 检测先天性巨结肠症(Hirschsprung disease,HSCR)患者SIP1(Smad-interacting protein 1)基因编码区点突变及单核苷酸多态性特点,探讨SIP1基因与HSCR的关系.方法 应用聚合酶链反应.单链构像多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)和DNA直接测序技术,对50例HSCR、30名正常对照外周血SIP1基因编码区的10个外显子,进行点突变与单核苷酸多态性的检测与分析.结果 HSCR与正常对照突变图谱比较,有1例病例在第7外显子出现杂合性缺失,密码子157位点GTG→GTA置换,引起亮氨酸的同义突变,属于单核苷酸多态性,突变率为2%(1/50).有4例患者在第8外显子出现突变,突变率为8%(4/50).PCR-SSCP银染分析,第2外显子2例出现相同类型泳动变位;第7外显子3例出现相同类型泳动变位;第8外显子7例出现相同类型泳动变位.结论 HSCR有SIP1基因突变,提示SIPI基因与HSCR的发病存在一定程度的关联.     

人胃癌肿瘤浸润树突状细胞的形态学观察

目的　探讨人胃癌肿瘤浸润树突状细胞 (TIDC)的形态学特征。方法　应用免疫组织化学、光镜和电镜的方法观察人胃癌TIDC的分布和形态学变化。结果　TIDC主要分布癌周区 ,病变早期TIDC比病变晚期数量 (P <0 0 1)。电镜下 ,TIDC体积较大 ,形态不规则 ,表面有许多树突状突起 ,细胞核不规则 ,可见核仁 ,胞质内有丰富的线粒体、核糖体、高尔基复合体和内质网。TIDC与肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)和肿瘤接触方式和形式上呈多样性 ,一对一 ,一对多 ,或形成簇的接触方式 ,有紧密膜接触、指状膜接触和球状膜接触形式。结论　本实验提示TIDC数量多少与肿瘤的进展有关 ,TIDC与肿瘤浸润淋巴细胞和肿瘤细胞之间关系密切。