再灌注预处理对急性心肌梗死患者的影响

目的探讨急诊经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)治疗时再灌注预处理对急性心肌梗死患者的影响。方法 87例急性心肌梗死患者行急诊PCI时,45例于支架植入前行低流量灌注10min(预处理组),42例直接行球囊扩张和支架植入(对照组)。观察2组支架植入后罪犯血管无复流发生率、再灌注心律失常、心肌损伤标志物水平和心功能变化。结果预处理组支架植入后罪犯血管无复流发生率(6.7%)低于对照组(16.7%)(P<0.01),术中及术后2h内再灌注心律失常发生率(24.4%)低于对照组(40.1%)(P<0.01),血清肌酸激酶同工酶峰值(52.5±19.4)μg/L低于对照组(66.8±22.9)μg/L(P<0.05),术后第7天左心室射血分数(55±12)%高于对照组(48±13)%(P<0.05)。结论急性心肌梗死患者行急诊PCI时采用低流量灌注进行再灌注预处理可减少心肌再灌注损伤,提高治疗效果。     

激活PPARδ对梗死心肌MMP-9及纤连蛋白表达的影响

目的: 研究过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)激动剂GW610742X对梗死心肌重塑过程中基质金属蛋白酶9(MMP-9)及细胞间基质纤连蛋白(FN)表达的影响。方法: 雄性Wistar大鼠,分为对照组、假手术组、心肌梗死(MI)组和MI+GW610742X(GW)组。结扎大鼠左冠状动脉建立MI模型,GW组予以GW610742X(100 mg·kg^-1·d^-1)喂养。术后3个月检测各组大鼠左心室游离壁(LVFW)中PPARδ、MMP-9及FN的mRNA及蛋白表达;免疫荧光法检测LVFW中FN的分布。结果: MI组术后3个月LVFW心肌有不同程度的坏死及纤维化。MI组PPARδ表达高于对照组、假手术组及GW组(P＜0.01),GW组PPARδ表达低于对照组及假手术组(P＜0.05);MI组及GW组MMP-9表达高于对照组及假手术组,FN表达低于对照组及假手术组(P＜0.01或P＜0.05)。GW组MMP-9表达低于MI组(P＜0.05),FN表达高于MI组(P＜0.01)。假手术组与对照组MMP-9及FN的表达无显著差异(P＞0.05)。结论: 梗死心肌重构过程中,MMP-9表达上调,FN被降解;激活PPARδ 可能通过抑制MMP-9的表达,减轻FN的降解,从而改善心肌重塑。     

急性心肌梗死患者单核细胞PPARδ、MCP-1和MMP-9表达及其与冠状动脉病变关系

目的:探讨急性心肌梗死患者单核细胞中过氧化物酶体增殖激活受体δ(peroxisome proliferator_activated receptors δ,PPARδ)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和基质金属蛋白醇-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及与冠状动脉病变的关系.方法:46例急诊行冠状动脉介入治疗的急性心肌梗死患者和46例冠状动脉造影排除冠心病者(对照组),分离其周围血单核细胞,应用蛋白免疫印迹法检测PPARδ、MCP-1和MMP-9的表达;分析其与冠状动脉病变程度的相关性.结果:急性心肌梗死患者血单核细胞中PPARδ表达水平低于对照组(P<0.01),MCP-1及MMP-9表达高于对照组(P<0.01);PPARδ表达水平与冠状动脉病变程度呈负相关,MCP-1、MMP-9与冠状动脉病变程度呈正相关,PPARδ表达水平与MCP-1、MMP-9呈负相关.结论:PPARδ可通过抑制炎症介质MCP-1及MMP-9的表达,发挥抗动脉粥样硬化及稳定粥样斑块的作用.     

高棕榈酸饮食对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

1目的：观察高棕榈酸饮食对载脂蛋白E（ApoE）基因敲除小鼠的血脂、血浆游离脂肪酸水平、动脉粥样硬化斑块面积、斑块中胶原含量和基质金属蛋白酶2表达的影响。方法：将20只6～8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠随机分为对照组和高棕榈酸饮食组,每组10只。分别给予普通小鼠饲料和含5％棕榈酸的饮食,连续喂养12周。用比色法检测血脂和血浆游离脂肪酸水平;主动脉根部连续石蜡切片,Masson染色检测斑块内胶原含量,免疫组化法检测主动脉基质金属蛋白酶2的表达。结果：两组血脂水平无明显差异。与对照组相比,高棕榈酸饮食组血浆游离脂肪酸水平显著升高,主动脉斑块内胶原含量显著降低,主动脉基质金属蛋白酶2表达明显增加（P均〈0．05）。结论：高棕榈酸饮食能够升高血浆游离脂肪酸水平,降低斑块内胶原含量,从而降低动脉粥样硬化斑块稳定性,其机制可能与其上调基质金属蛋白酶2的表达有关。     

钙蛋白酶抑制蛋白转基因小鼠的构建和鉴定

目的 将人的钙蛋白酶抑制蛋白（calpastatin,CAST）外源基因整合到C57BL/6J小鼠中,构建高表达CAST的转基因小鼠模型。方法 利用Gateway技术构建pRP.EX3d-EF1A-CAST-IRES-eGFP载体,回收片段后通过显微注射法将目的基因片段注入到C57BL/6J小鼠受精卵中,将其胚胎移植至同期发情的假孕受体母鼠输卵管内获得子代小鼠。采用PCR方法鉴定出阳性的转基因小鼠,确定首建鼠,通过与C57BL/6J小鼠回交后互交数代建系。利用RT-PCR和Western blotting方法检测CAST基因和蛋白在各组织中的表达情况。结果 将90枚注射受精卵移植到3只假孕鼠中,3只均怀孕,移植成功率100%,产下23只子鼠,经PCR鉴定得到2只转基因阳性首建鼠,阳性率为9%。子代小鼠进行RT-PCR检查显示,CAST基因在转基因小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌中均有表达;Western blotting检查显示,CAST蛋白表达在转基因小鼠中显著高于同窝阴性小鼠。结论 通过显微注射法成功构建CAST高表达的转基因小鼠,为进一步研究CAST奠定了良好的模型基础。     

急性冠脉综合征单核细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体δ的表达及其与血清基质金属蛋白酶-9和白细胞介素-10的相关性

目的：观察急性冠脉综合征（ACS）患者外周血单核细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体δ（PPARδ）的表达及其与基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、白细胞介素-10（IL-10）的相关性。方法：52例ACS患者为研究组和46例健康者为健康对照组。分离其外周血单核细胞,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测PPARδ的表达;采用酶联免疫吸附试验检测血清MMP-9和IL-10的水平。结果：ACS患者外周血单核细胞中PPARδ的表达水平显著低于健康对照组（P〈0.01）;ACS患者血清MMP-9水平高于健康对照组（P〈0.01）,而IL-10水平低于健康对照组（P〈0.01）;PPARδ表达水平与MMP-9呈负相关（r=-0.421,P〈0.05）,而与IL-10呈正相关（r=0.637,P〈0.05）。结论：PPARδ可能在ACS的发病中具有重要的促进作用。     

外周血淋巴细胞mTOR表达水平与冠状动脉狭窄程度的相关性分析

目的 探讨外周血淋巴细胞中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达水平与冠状动脉狭窄程度的相关性.方法 连续纳入170例在成都军区总医院心血管内科接受选择性冠脉造影的患者,其中男86例,女84例,年龄18～82岁,根据造影结果分为冠脉正常组和冠脉病变组,并计算冠脉病变的Gensini积分.采集两组患者的年龄、性别、民族、身高和体重等资料,测定空腹血糖、血脂及肝肾功能等生化指标,提取外周血淋巴细胞总RNA,采用Real time qPCR技术测定mTOR表达水平,分析mTOR表达水平及其他心血管危险因素与Gensini积分的相关性.结果 在170例患者中,冠脉病变组的年龄、体重指数、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)以及外周血淋巴细胞mTOR表达水平显著高于冠脉正常组,差异均有统计学意义(P＜0.05).相关分析结果显示,外周血淋巴细胞mTOR表达水平、TG、TC和年龄与冠脉病变狭窄程度Gensini积分呈正相关,相关系数r分别为0.343、0.254、0.236、0.207(P＜0.01).结论 外周血淋巴细胞mTOR表达水平与冠脉病变狭窄程度呈正相关,提示淋巴细胞mTOR在冠脉病变发展过程中可能发挥重要作用.     

瞬时受体电位通道家族M8型受体转基因小鼠模型的建立

目的 建立瞬时受体电住通道家族M8型受体(TRPM8)转基因小鼠模型.方法 通过显微注射法将pcDNA3.1-hTrpm8导入C57BL/6J×CBA F1小鼠的受精卵中,并将其移植到假孕母鼠输卵管中获得子代小鼠.采用PCR方法鉴定子代基因型,通过RT-PCR和免疲印迹法检测Trpm8基因及蛋白在组织中的表达.结果 将405枚注射受精卵移植给15只假孕鼠,其中13只顺利妊娠并产下95只子鼠,经PCR鉴定得到5只转基因阳性首建鼠,其中4只小鼠可稳定传代,经与C57BL/6J小鼠回交7代后互交数代建系.子代转基因小鼠经RT-PCR检测发现Trpm8基因在心脏、肝脏、肾脏、脂肪和骨骼肌中均有表达,且TRPM8蛋白表达在转基因小鼠中显著增加.结论 通过显微注射法成功建立了Trpm8转基因小鼠模型.     

间歇性低压低氧促进载脂蛋白E基因敲除小鼠血管重构

目的　探讨高海拔间歇性低压低氧（IHH）环境对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^－/－）小鼠血管重构的影响。方法　将14只8周龄雌性ApoE^－/－小鼠随机分为对照组和IHH组,IHH组每天在低压舱模拟的4000　m海拔低压低氧环境中放置8　h,持续60天。干预完成后采用Masson染色测定胸主动脉管壁胶原含量,采用免疫组织化学法检测基质金属蛋白酶（MMP）及其组织型基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）的表达情况。结果　与对照组比较,间歇性低压低氧组小鼠主动脉管壁胶原含量显著降低,MMP-9的表达显著增高,而TIMP-2的表达显著降低（P＜0.01）,而MMP-2、MMP-14在两组间没有显著差异（P＞0.05）。结论　IHH可能通过加重ApoE^－/－小鼠血管壁MMP-9和TIMP-2的表达失衡减少血管壁胶原含量,从而促进血管重构。     

间歇性低温刺激减少载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块内胶原含量的研究

目的：研究间歇性低温刺激对载脂蛋白E（ApoE-/-）基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块内胶原含量的影响。
　　方法：20只8周龄的雄性ApoE-/-小鼠被随机分为对照组和实验组,实验组小鼠每天8：00至12：00置于（4±1）° C环境中,其余时间和对照组小鼠一样处于（24±2）° C环境。饲养12周后,Masson染色了解小鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块内胶原情况,蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测小鼠主动脉基质金属蛋白酶（MMPs）2、9及基质金属蛋白酶抑制剂1的表达情况。
　　结果：Masson染色见实验组小鼠主动脉根部斑块内胶原含量低于对照组,Western blot实验组小鼠主动脉MMP2、MMP9表达高于对照组,TIMP1表达低于对照组。
　　结论：间歇性低温刺激可能通过破坏MMPs/TIMPs之间的平衡,引起动脉粥样硬化斑块内胶原含量减少,造成易损斑块的形成,导致急性冠状动脉综合征的发生。