铁皮石斛SCoT-PCR反应体系的优化

目的 对铁皮石斛的目标起始密码子(start condon targeted polymorphism,SCoT)多态性反应体系进行优化,为进一步对铁皮石斛遗传多样性的SCoT分析奠定基础.方法 以铁皮石斛的新鲜叶片为试验材料,采用控制单一变量的方法分别研究模板DNA用量、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量、dNTPs浓度、及退火温度共5个因素对SCoT-PCR扩增结果的影响.结果 铁皮石斛SCoT标记的20 μL优化反应体系为:DNA模板20 ng、引物浓度为30 μmol/L、Taq DNA聚合酶用量为1.0 U、dNTP浓度为100 μmol/L.适宜的PCR扩增程序为95℃预变性4 min; 95℃变性50 s,56.1℃复性退火40 s,72℃延伸2 min,循环36次;72℃延伸5 min,4℃保存.1.5％琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物在600～2 000 bp.结论 该体系的建立为铁皮石斛种质遗传多样性分析、分子标记辅助育种等研究奠定了基础.     

乳香超微粉的制备工艺及理化性质研究

目的优选乳香超微粉制备工艺,研究微粉化对乳香粉体理化性质与体外溶出等特性的影响。方法以超微粉收率为评价指标,单因素实验考察原粉末粒度、冷冻时间、辅药比及粉碎时间对乳香超微粉碎的影响;对比分析考察微粉化对粉体学性质(休止角、松密度、振实密度、压缩度)、有效成分的量(挥发油、乙酸辛酯及11-羰基-β-乙酰乳香酸)与溶出情况等的影响。结果优选得到乳香超微粉工艺为粉碎至细粉,冷冻4 h,辅药比1∶5、超微粉碎15 min。随粉碎度增加,乳香粉体休止角增大,松密度与振实密度减小,压缩度有增加的趋势,说明流动性降低;乳香挥发油中有效成分乙酸辛酯的量呈先增后降的趋势。溶出实验表明经优化工艺制备得到的超微粉中乙酸辛酯的量最高,11-羰基-β-乙酰乳香酸的累积溶出率明显比普通粉大。结论优选的乳香超微粉工艺可行,适度微粉化有利于乳香有效成分的提取与溶出。     

肿节风挥发油对荷瘤小鼠化疗的增效减毒作用

[目的]研究肿节风挥发油（SGE）对环磷酰胺（CTX）治疗H22、S180小鼠的增效和减毒作用。[方法]建立小鼠体内移植性肉瘤、肝癌模型,通过两种给药途径,观察肿节风挥发油与环磷酰胺联合用药对荷瘤小鼠抑瘤率的影响;观察SGE拮抗CTX引起血小板、白细胞及血红蛋白下降。[结果]肿节风挥发油与CTX合用时,对肝癌H22、肉瘤S180两种肿瘤均有不同程度的抑瘤增效作用。CTX（10mg／kg或15mg／kg）分别联用iv．SGE（36．6mg／kg）,对小鼠H22、S180的抑瘤率均高于相应剂量的单用CTX（P〈0．05）;CTX（20mg／kg）联用ig．SGE（73．2mg／kg）,对H22的抑瘤率高于单用CTX（P〈0．05）。肿节风挥发油能明显拮抗CTX引起的血小板、白细胞下降（P〈0．05～0．01）。[结论]肿节风挥发油能增强CTX的抗肿瘤作用,同时减轻CTX的毒性。     

慢性湿疹患者生活质量及其影响因素的临床研究

目的 探讨慢性湿疹患者的生活质量状况及其影响因素,为提高患者的生活质量和临床疗效提供帮助.方法 以2009年8月-2010年8月在温岭市第一人民医院皮肤科门诊就诊、临床确诊的慢性湿疹患者为研究对象,以同期健康体检者为对照.应用世界卫生组织生活质量测定量表简表(WHOQOL-BREF)以及皮肤病生活质量指数量表(DLQI)对200例慢性湿疹患者及100例体检者进行生活质量评价,并应用多元回归分析方法寻找影响慢性湿疹患者生活质量的因素.结果 (1)湿疹组的DLQI总分为(14.56±5.43)分,高于对照组的(0.13±0.05)分,差异有统计学意义(P＜0.01).对其六个方面分别进行比较,发现湿疹组患者症状与情感、社会交际、治疗等六个方面的得分均比对照组高,差异均有统计学意义(P＜0.01).(2)比较湿疹组和对照组的WHOQOL-BREF得分,对总体感受及生理、心理、社会、环境四个领域的比较发现差异均有统计学意义(P＜0.01).(3)多元逐步回归表明,影响DLQI总分的因素为病情、受教育程度和经济状况;影响WHOQOL-BREF得分的因素为病情和受教育程度.结论 慢性湿疹患者生活质量较差,病情、受教育程度、经济状态是影响慢性湿疹患者生活质量的重要因素.     

加味当归补血汤对正常小鼠免疫功能的作用研究

[目的] 探究加味当归补血汤对正常小鼠免疫功能的影响。[方法] 将120只BALB/c小鼠随机分成3组,即免疫Ⅰ组、免疫Ⅱ组、免疫Ⅲ组,每个免疫组小鼠按体质量随机分为正常对照组、加味当归补血汤1.4 g·kg-1组、加味当归补血汤1.9 g·kg-1组、加味当归补血汤2.3 g·kg-1组。连续灌胃30 d后,检测免疫Ⅰ组小鼠行为学指标,脾脏和胸腺系数,脾脏T淋巴细胞增殖能力,NK细胞活性,血常规指标,血清免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)和免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)含量,外周血和脾脏中T、B淋巴细胞比例;检测免疫Ⅱ组小鼠溶血空斑数、半数溶血值;检测免疫Ⅲ组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬功能和脾脏中CD4、CD8表达量。[结果] 与正常对照组比较,加味当归补血汤3个剂量均可明显升高小鼠自主活动次数和抓力,脾脏系数和胸腺系数(P<0.05,P<0.01);增强脾淋巴细胞增殖能力和NK细胞活性(P<0.01);增加溶血空斑数、半数溶血值、腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数(P<0.01);升高全血淋巴细胞(lymphocyte,LYMPH)、白细胞(white blood cell,WBC)、红细胞(red blood cell,RBC)数量,血清中IgM、IgG含量(P<0.05,P<0.01);降低外周血和脾脏CD3+T、CD8+T细胞占比,减少CD8阳性表达量(P<0.05,P<0.01);升高外周血CD19+B细胞占比,外周血和脾脏CD4+/CD8+比值,以及脾脏CD4/CD8阳性表达比值(P<0.05,P<0.01)。[结论] 加味当归补血汤能增强特异性免疫和非特异免疫,有助于增强免疫力。     

HPLC测定大鼠血浆中阿魏酸的浓度及其药动学研究

目的建立测定大鼠血浆中阿魏酸的反相高效液相色谱法,并测定灌胃给予康脉心口服液（Kangmaixin oral liquid,KMX）后大鼠血浆中阿魏酸的浓度及药动学参数。方法血浆样品经酸化后用乙酸乙酯进行液-液萃取,色谱柱为Diamonsil TM C18（4．6mm×250mm,5μm）,Agilent C18预柱;流动相为乙腈-0．085％H3P04溶液（17：83）;流速1．0mL·min^-1;DAD检测波长316nm;柱温35℃。测定KMX灌胃后阿魏酸在大鼠体内的血药浓度,建立阿魏酸药时曲线,并对其进行房室模型的拟合和药动参数的计算。结果阿魏酸在0．13704-5．710gg·mL^-1内具有良好的线性关系（r=0．9998）,最低定量限为6．852ng;样品溶液在36h内稳定,精密度良好（RSD〈5．0％）;平均回收率为91．8％-100．5％。阿魏酸在大鼠体内过程符合二室模型,Tmax=20．10min,Cmax=743．6ng·mL^-1,T1/2Ka=6．781min,T1/2a=17．82min,T1／2β=179．4min。结论该方法简便、灵敏度高,无杂质干扰,可用于KMX中阿魏酸的药动学研究,其中阿魏酸在大鼠体内吸收分布迅速而消除慢。     

人参超微粉对正常和免疫力低下小鼠免疫功能的影响

目的 探讨人参超微粉化后是否仍具有增强免疫的作用。方法 实验主要分为2个部分,第一部分：将96只Balb/c小鼠随机分成2个免疫组（免疫Ⅰ组、免疫Ⅱ组）,每个免疫组按体质量随机分为空白组、人参超微粉3个剂量组（166.7,333.3,500.0 mg·kg^-1）。灌胃32 d,免疫Ⅰ组进行脾淋巴细胞增殖实验和NK细胞活性实验,测定脏器（脾、胸腺）指数、刺激指数和NK细胞活性;免疫Ⅱ组进行迟发型超敏反应（DTH）和血清溶血素实验,测定小鼠足跖肿胀度和抗体积数;第二部分：将60只ICR小鼠按体质量随机分为空白组、模型组、人参超微粉3个剂量组（166.7,333.3,500.0 mg·kg^-1）,连续灌胃13 d,于第5天开始,除空白组外,连续3 d腹腔注射环磷酰胺40 mg·kg^-1,建立免疫力低下模型。测定其白细胞数目,脏器（脾、胸腺）指数,血清IL-2、IL-4、IgG、IgM水平及脾匀浆LDH、ACP活性。结果 第一部分：人参超微粉3个剂量组小鼠胸腺指数升高;人参超微粉333.3,500.0 mg·kg^-1组小鼠抗体积数及注射绵羊红细胞24 h后足跖肿胀度显著高于空白组,同时能增强NK细胞活性。第二部分：人参超微粉333.3,500.0 mg·kg^-1组小鼠白细胞数目明显增加,血清中IL-2、IL-4、IgG、IgM水平升高及脾匀浆LDH、ACP活性增强。结论 一定剂量的人参超微粉对正常和免疫力低下小鼠具有免疫调节作用,提示将人参超微粉化后仍具有增强免疫的作用,这为人参超微粉的进一步开发利用提供了实验依据。     

贮存时间对柳叶蜡梅挥发油及桉油精含量的影响

该文采用水蒸气蒸馏法提取不同贮存时间的柳叶蜡梅挥发油,GC测定挥发油中桉油精含量,研究贮存时间对柳叶蜡梅挥发油及桉油精含量的影响,为柳叶蜡梅的质量控制提供参考。试验表明,新鲜柳叶蜡梅的挥发油含量为0.023 0 mL·g^-1,贮存4,12个月后,挥发油含量分别降为0.020 0,0.017 5 mL·g^-1;GC方法学考察的精密度、稳定性、重复性,RSD均小于2.0%,平均回收率99.50%,RSD 1.7%;新鲜提取的挥发油中桉油精含量54.30%,随着保存时间的推移,桉油精含量升高至62%左右并保持稳定。因此,贮存时间对挥发油及其中桉油精的含量有一定影响;GC测定桉油精含量准确可靠,专属性强,可重复,适合作为柳叶蜡梅的质量控制方法。     

铁皮石斛HPLC特征图谱研究

目的:建立铁皮石斛HPLC特征图谱,为铁皮石斛鉴别提供可靠方法.方法:采用Ultimate XB C18(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-0.2％磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长280nm,柱温30℃.运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会)进行分析.结果:以柚皮素为参照峰,初步构建了由6个特征峰组成的铁皮石斛乙醚部位HPLC特征图谱.结论:该法建立的特征图谱可为铁皮石斛鉴别提供参考.     

铁皮石斛SCoT-PCR反应体系的优化

目的 观察蠲痹通督汤配合小针刀松解术等治疗强直性脊柱炎的临床疗效。方法 126例强直性脊柱炎（AS）患者随机分为治疗组与对照组,对照组患者口服非甾体类抗炎药＋柳氮磺胺吡啶片＋雷公藤多苷片;治疗组患者口服蠲痹通督汤,同时采用小针刀闭合松解术治疗,可配合中药熏蒸及激光照射,4周为一个疗程,两组均治疗3个疗程。采用国际AS评价工作组（ASAS）推荐的ASAS20改善标准和患者主要相关体征进行疗效评价。结果 治疗组ASAS20改善例数、临床疗效指标及主要体征的改善均明显优于对照组（P＜0.05）。结论 蠲痹通督汤配合小针刀松解术及中药熏蒸治疗强直性脊柱炎疗效确切,不良反应少,值得临床推广。