利用恒溶氧-补料分批技术高密度培养大肠杆菌生产重组肿瘤导向多肽LTL-TNF

目的　探讨重组肿瘤导向多肽 L TL - TNF工程菌的大规模培养与表达方法以获取重组 L TL TNF.方法　首先在试管和三角瓶中探讨工程菌的生长和表达规律 ,筛选其最适宿主菌、最佳培养及诱导表达条件 ,然后在 5 L 自控发酵罐中进行分批补料培养 .结果　保持培养过程中 30 %～ 40 %的溶解氧和限制性流加葡萄糖 ,工程菌 DH5 α/ p BV- L TL TNF在5 L 发酵罐中培养至终密度 A6 0 0 nm 40～ 5 0时 ,目的蛋白的表达最高 ,可达菌体总蛋白的 5 0 % ,L TL - TNF的含量达到5 .12 g· L- 1 ,发酵总时间在 12 h左右 .结论　确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺 ,为重组肿瘤导向多肽L TL TNF工程菌的工业化生产奠定了基础 .     

热休克蛋白CpkB对nrhTNF体外复性的促进作用

目的;探讨嗜热菌热休克蛋白ＣｐｋＢ在体外与新型重组人肿瘤坏死因子蛋白质复性的关系。方法：在原核细胞中表达并纯化ＯｐｋＢ蛋白;将ｎｒｈＴＮＦ在８ｍｏｌ／Ｌ脲中变民生,然后在不同浓度的ＣｐｋＢ存在下进行体外复性,以复性后ｎｒｈＴＮＦ的和活性检测指标进行分析。     

妊娠高血压综合征患者的新生儿脐血内皮素和一氧化？…

目的 探讨内皮素（ＥＴ）和一氧化氮（ＮＯ）在妊娠高血压综合征（ＰＩＨ）患者的新生儿脐血的变化。方法 使用放免法测定ＥＴ：采用硝酸根还原法结合Ｇｒｉｅｓｓ试剂测定ＮＯ的稳定代谢产物亚硝酸基（ＮＯ＾－２和硝酸基（ＮＯ＾－３）的含量。对２１例ＰＩＨ患者的新生儿和２４例健康孕妇的正常新生儿脐血进行了测定。结果 中、重度ＰＩＨ患者新生儿脐血ＥＴ显著高于对照组,而ＮＯ＾－２和ＮＯ＾－３含量显著低于对照组（Ｐ〈     

四君子汤对脾虚患者血浆细胞因子的影响

目的 观察四君子汤对脾虚患血浆细胞因子的影响。探讨脾虚与细胞因子的关系。方法 66例脾虚患分为四君子汤治疗组和六味地黄汤治疗组,采用免疫分析技术对脾虚患及其血浆IL-2,IL-2R,IL-4,IL-5,TNF-α,IgE,sICAM-1等细胞因子水平进行测定,用逆转录聚使边反应技术（RT-PCR）对外周淋巴细胞IL-4mRNA,IL-5mRNA表达进行定量分析,用斑点杂交法检测外周血CD2mRNA。结果 脾虚患ＩL-2,IL-4,IL-5,TNF-α,IgE 水平下降,sICAM-1和sIL-2R水平升高,外周淋巴细胞IL-4mRNA,IL-5mRNA和CD2mRNA弱表达,表现为免疫功能下降,经过四君子汤治疗,上述各项指标恢复正常。结论 四君子汤可通过益气健脾调节细胞因子的水平和功能。结论 四君子汤可通过益气健脾调节细胞因子的水平和功能。从而达到增强免疫功能的作用。     

介导可溶性MHCⅠ产生的去整合素金属蛋白酶初步筛选研究

目的:以HEK293细胞为研究模型,筛选介导可溶性MHCⅠ产生的去整合素金属蛋白酶。方法:将ADAM8、ADAM10、ADAM15和ADAM17cDNA分别克隆入pcDNA3.1/V5载体,并用TransIT-LT1转染试剂将构建好的载体转染入HEK293细胞,用潮霉素B筛选ADAMs蛋白稳定表达克隆;用SDS-PAGE、免疫印迹结合化学发光法检测ADAMs在HEK293细胞中的表达;用细胞表面生物素标记、免疫沉淀、SDS-PAGE、免疫印迹结合化学发光检测ADAMs过表达对可溶性MHCⅠ产生的影响。结果:成功获得稳定表达ADAMs的HEK293细胞;过表达ADAM10和ADAM17可增强HEK293细胞产生可溶性MHCⅠ。结论:ADAM10和AD-AM17具介导可溶性MHCⅠ产生的潜能。     

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因的克隆与表达

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因的克隆与表达颜真，韩苇，李芳梅，赵宁，张英起（生物技术中心）关键词粒细胞巨噬细胞集落刺激因子；基因克隆；基因表达中图法分类号　Ｒ３３４粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）是一功能很强的造血生长因子，人ＧＭ－Ｃ...     

葛根素冻干粉针剂制剂工艺的改进

目的 探讨葛根素冻干粉针剂的制剂工艺改进。方法 通过调节pH值或羟丙基-β-环糊精包合比例使葛根素冻干粉针剂达到良好的物理性质。结果 当葛根素溶液pH值达到7．3以上或羟丙基-β-环糊精的包合比例大于5时，制成的粉针剂外观完整，溶解性及溶液稳定性良好。结论 两种方法都能较好地解决制剂工艺中原先存在的严重缺陷。     

嗜热菌热休克蛋白基因的克隆与表达

克隆和在原核表达系统中表达超嗜热古球菌之热休克蛋白基因β亚基。方法：用ＰＣＲ技术从ＨＰＫ基因组ＤＮＡ中扩增ｃｐｋＢ基因片段，经克隆和核苷酸序列分析后再克隆至原核表达载体ｐＢＶ２２０，升温诱导ｃｐｋＢ基因表达，利用ＣｐｋＢ蛋白的耐温特性纯化该蛋白。结果：扩增和克隆了１．６ｋｂ的ｃｐｋＢ基因，并经ＤＮＡ测序证实，实现了ｃｐｋＢ基因在原核系统ＰＬＰＲ启动子控制下的表达，建立了纯化ＣｐｋＢ蛋白的方法。结论     

肌营养不良蛋白在假肥大肌营养不良症肌组织中的表达研究

目的检测假肥大肌营养不良症肌组织中肌营养不良蛋白（ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ）的表达。方法用针对ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ棒状区第１５～１８重复区域的多克隆抗血清Ａｎｔｉ５～７，对２２例Ｄｕｃｈｅｎｎｅ型（ＤＭＤ）和４例Ｂｅｃｋｅｒ型肌营养不良症（ＢＭＤ）患者及１１例无神经肌肉疾病的急诊外伤患者（作为对照）的肌组织进行免疫组化分析。结果在对照组肌细胞中ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ存在着可达检测水平的表达，并特异地定位于肌细胞膜上。１９例ＤＭＤ没有可达检测水平的ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ表达，３例ＤＭＤ存在着ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ表达。４例ＢＭＤ肌细胞膜上则呈现出斑片状、不连续ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ弱阳性表达。结论ｄｙｓ－ｔｒｏｐｈｉｎ的缺乏是造成ＤＭＤ／ＢＭＤ表型的基本生化因素，此方法为临床上对ＤＭＤ／ＢＭＤ患者作出确诊提供了直接的特异生化测试指标。