蝰蛇(缅甸亚种)毒凝血因子Ⅹ激活物FⅤe-1的分离纯化与理化活性的研究(英文)

【目的】从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离纯化一种凝血活性因子Ⅹ激活物FⅤe-1,并研究其理化性质、序列测定以及凝血活性。【方法】应用阳离子交换层析、分子凝胶过滤层析分离纯化蛇毒,采用MALDI质谱测定法测定分子质量,等电聚焦电泳测定等电点,Edman降解法测定蛋白N末端氨基酸序列,发色底物法和SDS-PAGE等方法测定FⅤe-1的酶学特征和凝血活性。【结果】从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离得到的FⅤe-1为单体蛋白,相对分子质量为13 808,等电点4.6,0.5 mg FⅤe-1的凝血活性与1.5625 u的凝血酶或与54.93 ng RVVⅩ的凝血活性相当;可激活FⅩ,但对凝血酶和纤维蛋白原无作用;酶活性的适宜pH为6.5～7.5,适宜温度为25～60℃;为钙依赖性,凝血活性可被EDTA和DTT抑制;FⅤe-1的N端序列为NH2-N-L-Y-Q-F-G-E-M-I-N;具有呈剂量依赖性的促血浆凝固作用。【结论】从蝰蛇(缅甸亚种)毒纯化出一种FⅤe-1是一个凝血因子Ⅹ的激活物,可激活凝血因子Ⅹ,但对凝血酶和纤维蛋白原的作用微弱。     

氯胺酮预给药对体外谷氨酸诱导大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响

目的探讨氯胺酮预给药对谷氨酸诱导大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的作用及信号转导机制。方法将原代培养的大鼠CGNs随机分为8组:C组:培养基中不加药液;G组:培养基中加入300 μmol/L谷氨酸;K1、K2、K3组:培养基中分别加入10、100、1 000μmol/L氯胺酮预先孵育1 h 后,再加入谷氨酸;LK3组:培养基中加入20μmol/L Ly294002,30min后加入1 000μmol/L.氯胺酮,1 h后加入谷氨酸;L组:培养基中加入Ly294002;LG组:培养基中加入Ly294002,30 min后加入谷氨酸。20 h后,用相差显微镜观察神经元形态学,Hoechst33258核染色后,观察凋亡CGNs;提取DNA行琼脂糖凝胶电泳分析,二乙酸荧光素染色法测定CGNs的存活率。结果谷氨酸可诱导大鼠CGNs凋亡。CGNs 存活率:与G组比较,C组、K1、K2、K3、L组升高幅度下降(P<0.05),LG组差异无统计学意义;C组与L组比较差异无统计学意义;LK3组低于K3组(P<0.01)。CGNs存活率(Y)与氯胺酮浓度(X)呈线性回归,回归方程为Y=0.202logX 0.2596,r3=0.919(P<0.01)。结论氯胺酮剂量依赖性地抑制谷氨酸诱导大鼠CGNs的凋亡,而PI3-K/AKT信号转导通路可能参与了其抗神经元凋亡作用。     

左归丸加减方对谷氨酸诱导的体外培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡影响

目的 :研究左归丸加减方对谷氨酸引起的体外培养的小脑颗粒神经元 (CGNs)兴奋毒性死亡是否有抑制作用及其可能的分子机制。方法 :采用二乙酸荧光素 (PDA)和Hoechst332 5 8DNA染色法 ,观察神经元存活率及形态学特征 ,用琼脂糖凝脉电泳分析神经元死亡的生化特征。结果 :30 0 μmol·L- 1 谷氨酸可引起体外培养的CGNs调亡 ,左归丸加减方水提物 (ZGP)可以剂量依赖地阻断谷氨酸所致的CGNs调亡。PD980 5 9可以阻断谷氨酸的诱导CGNs调亡作用 ,协同ZGP的抗谷氨酸诱导CGNs调亡作用。LY2 94 0 0 2可以阻断ZGP的抗谷氨酸诱导CGNs调亡作用。结论 :ZGP对谷氨酸诱导的体外培养的大鼠CGNs调亡有保护作用 ,PI3 K Akt信号传导通路可能参与其作用。     

五步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的肾纤维蛋白沉积的作用

目的观察五步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的兔肾纤维蛋白沉积的作用。方法用脂多糖(LPS)诱导的兔肾血栓模型作为本实验的研究方法。生理盐水作阴性对照组;尿激酶作阳性对照组。兔肾组织学检查及测定血浆FDP含量以观察五步蛇毒纤溶酶FⅡ对兔肾纤维蛋白沉积的溶解作用。结果阴性对照组,给药2、6h后,兔肾组织有大量的纤维蛋白的沉积,FDP含量分别为(7821±479)%和(8427±621)%;阳性对照组,给药2、6h后,肾组织有少量纤维蛋白的沉积,FDP含量分别为(13334±427)%和(21017±542)%。FⅡ分别以01mg·kg-1·h-1(低)、03mg·kg-1·h-1(中)、06mg·kg-1·h-1(高)3个剂量滴注。低剂量组的兔肾组织有纤维蛋白的沉积,但比阴性对照组减少;中剂量组的兔肾组织有少量纤维蛋白的沉积;高剂量组的兔肾组织几乎无纤维蛋白的沉积;血浆FDP含量在低、中和高剂量组均比阴性对照组增加,并有量效关系(P<005)。结论步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的兔肾纤维蛋白沉积有良好的降解作用。     

咖啡因对LY294002诱导的小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用

研究了咖啡因对磷酸肌醇-3-激酶抑制剂诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用及机制。应用神经元体外培养,凝胶电泳,ＳＡＰＫ/ＪＮＫ分析盒测定ＪＮＫ活性。结果:ＬＹ294002浓度依赖性地触发小脑颗粒神经元凋亡,但咖啡因具有浓度依赖性的保护作用。此作用不受ｒｙａｎｏｄｉｎｅ-敏感性钙释放阻断剂、Ｌ-型钙通道阻断剂和ＮＭＤＡ受体阻断剂的影响。而且,ＲＰ-ｃＡＭＰ,Ｈ89和ＫＮ62均不能抑制咖啡因的保护作用。ｃ-Ｊｕｎ的磷酸化是ＬＹ294002诱导神经原凋亡所必需,咖啡因可直接抑制ＪＮＫ的活性,降低神经元内磷酸化ｃ-Ｊｕｎ的含量。咖啡因通过…     

3-磷酸甘油醛脱氢酶与神经元凋亡

综述了3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)的基因表达、酶活性及亚细胞定位等三个方面与神经元凋亡的关系的研究新进展,并列举了一些GAPDH参与神经退行性疾病的临床证据.     

小剂量谷氨酸预先给药对谷氨酸致大鼠大脑皮质神经元神经毒性作用的影响

目的探讨小剂量谷氨酸预先给药对谷氨酸致大鼠大脑皮质神经元（CCNs）神经毒性作用的影响及其信号转导机制。方法出生24h内健康SD大鼠8只，雌雄不拘，原代培养CCNs，随机分为7组（n=4），对照组（C组）不加任何处理因素；G50组加入50μmol／L谷氨酸孵育24h；G10＋G50组：先加入10μmol／L谷氨酸孵育1h，再加入50μmol／L谷氨酸孵育24h；U＋G10＋G50组：加入细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/ERK2）上游的激酶抑制剂U0126 10μmol／L孵育1h后，按G10＋G50组处理；U＋G50组：10μmol／L U0126孵育2h后，按G50组处理；U组：10μmol／L U0126孵育26h；G10组加入10μmol／L谷氨酸孵育25h。计算CCNs存活率。结果与C组比较，G50组CCNs存活率降低（P〈0．01），G10组差异无统计学意义（P〉0．05）；与G50组比较，G10＋G50组CCNs存活率增高（P〈0．01）；与G10＋G50组比较，U＋G10＋G50组CCNs存活率减低（P〈0．01）。结论小剂量谷氨酸（10μmol／L）预先给药可减轻50μmol／L谷氨酸致大鼠CCNs的神经毒性作用，其机制与激活ERK1／ERK2信号转导通路有关。     

藻酸双酯钠对蜂毒肽诱导的皮质神经元凋亡的保护作用

目的　研究藻酸双酯钠（ＰＳＳ） 对蜂毒肽（ｍａｓｔｏｐａｒａｎ）诱导的皮质神经元凋亡是否具有保护作用。方法　体外培养大鼠皮质神经元，定性定量检测细胞凋亡：①用ＦＤＡ（ｆｌｕｏ ｒｅｓｃｅｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ） 染色检测细胞存活率，用Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ 染色，分析细胞核的形态变化；②琼脂糖凝胶电泳分析ＤＮＡ 断裂；③流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果　ＰＳＳ使皮质神经元存活率增加，使ｍａｓｔｏｐａｒａｎ 引起的细胞核固缩、凝聚和断裂现象消失；ｍａｓｔｏｐａｒａｎ 使神经元的ＤＮＡ电泳图谱出现明显的“梯子状”，而ＰＳＳ使此现象消失；ｍａｓｔｏｐａｒａｎ使神经元的流式细胞仪分析图上出现明显的凋亡峰，ＰＳＳ可使此凋亡峰消失。结论　藻酸双酯钠对蜂毒肽诱导的皮质神经元凋亡具有明显的保护作用     

脑活素对原代培养大鼠小脑颗粒神经元影响的研究

目的研究脑活素(现药名施普善)对原代培养的大鼠小脑颗粒神经元的影响。方法采用原代培养的大鼠小脑颗粒神经元,观察脑活素对细胞形态学及生存的影响。用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率。结果脑活素在0～40mL/L浓度下,剂量依赖性诱导小脑颗粒神经元死亡。兴奋性氨基酸受体拮抗剂地佐环平(MK-801)可保护低浪度脑活素(＜50mL/L)的神经毒性。脑活素浓度＞50mL/L时MK-801无明显保护作用。而对照药物胞二磷胆碱(0～10g/L)、单唾液酸四己糖神经糖甙脂(GM-1,0～20mg/L)两者被认为具有护脑作用的药物,对小脑颗粒细胞均无毒性作用。结论脑活素对原代培养的大鼠小脑颗粒神经元具有毒性作用,其机制部分是通过兴奋性氨基酸介导的。提示脑活素的神经药理作用值得进一步探讨。     

局灶性脑缺血后鼠脑组织tPA基因表达及其与细胞凋亡

目的 探讨局灶性脑缺血后组织型纤溶酶原激活物（tＰＡ）基因的表达及其与细胞凋亡的 关系。方法 用原位杂交和免疫组织化学方法检测tＰＡ基因在大鼠局灶性脑缺血（大脑中 动脉阻塞）后的表达,用ＴＵＮＥＬ法检测缺血不同时间的细胞凋亡状况。结果 脑缺血６h缺血中心部位的胶质细胞和梗死灶周边缺血半影区的神经元均观察到tＰＡ免疫反应性信号,在大脑皮层后肢体区、顶皮层区、海马区和齿状回可见凋亡细胞,但缺血１８h缺血侧神