白首乌甙对DEN诱发实验性肝癌大鼠肝细胞DNA含量和生长周期变化的影响

用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠发生实验性肝癌,用流式细胞仪分析自首乌甙对该模型大鼠肝细胞DNA含量和细胞生长周期的影响。实验结果表明治疗组大鼠与模型组比较,肝细胞内2倍体细胞明显增多,多倍体细胞明显减少;大鼠肝细胞处于G_0/G_1期的细胞显著增多,处于S期的细胞显著减少,说明白首乌甙可抑制肿瘤细胞DNA的合成,阻止肿瘤细胞分裂。     

人参总皂苷对DC2.4细胞增殖、抗原吞噬和表面分子表达的影响

目的:观察人参总皂苷对树突状细胞系DC2.4细胞增殖、抗原吞噬和表面分子表达的影响。方法:体外培养DC2.4细胞,加入不同剂量人参总皂苷后,MTT法检测不同时点细胞增殖;流式细胞仪检测细胞表面分子CD40、CD86和MHCⅡ的表达,以及对卵清蛋白抗原的吞噬作用。结果:单纯加入脂多糖(LPS)经培养48h后DC2.4细胞增殖明显(P0.05),人参总皂苷可明显抑制LPS诱导的DC2.4细胞增殖(P0.05);此外,人参总皂苷可促进DC2.4细胞吞噬抗原的能力,并协同LPS上调CD40、CD86和MHCⅡ分子表达。结论:人参总皂苷可以维持DC2.4细胞数量的稳态,促进DC2.4细胞吞噬抗原,并与LPS协同促进DC2.4细胞成熟,并具有促进抗原提呈的作用。     

类风湿关节炎大鼠滑膜细胞的类肿瘤样增生与相关基因表达的关系

目的:探讨佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞的类肿瘤样增生和相关基因表达的机制。方法:将Wistar大鼠随机分两组,每组10只,并应用弗氏完全佐剂诱发大鼠AA实验性模型,定期观测踝关节肿胀度至第40天。分别取AA模型组和正常对照组大鼠踝关节进行组织切片,用HE染色后观察病理学变化。取大鼠膝关节滑膜组织体外进行原代细胞培养,用MTT比色法检测大鼠滑膜细胞的增生。同时采用RTPCR法,检测模型组及正常对照组大鼠滑膜组织中相关基因Cmyc和ODCmRNA的转录水平。结果:①体外培养的AA模型组大鼠关节滑膜细胞的增殖显著高于正常组大鼠(P<0.01),并呈类肿瘤样增生。②AA模型组大鼠关节滑膜组织中,Cmyc和ODCmRNA的转录水平明显高于正常对照大鼠(P<0.01)。结论:AA模型组大鼠关节滑膜细胞的类肿瘤样增生,可能与其相关基因Cmyc和ODCmRNA的转录水平增高有关。     

痰热清注射剂对流感病毒FM1感染小鼠肺损伤治疗作用的研究

痰热清注射剂是由黄芩、熊胆粉、山羊角粉、金银花、连翘等五味药物组成的中药制剂，五药相配具有清热解毒、化痰解痉的功效。在临床治疗中，痰热清注射液主要用于治疗呼吸道感染性疾病，本实验采用流感病毒FM1感染小鼠作为模型，研究痰热清注射液对其肺损伤及免疫功能的影响并阐明其作用机制，为痰热清注射液的临床应用提供理论依据。痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠的死亡保护作用、血凝滴度、肺指数的影响：结果发现，痰热清注射液大、中、小治疗组小鼠对流感病毒FM1感染后的死亡保护率分别为（45．45、63．63、54．54％），模型对照组为（33．33％），与对照模型组比较，具有明显的保护作用，P值分别〈0．05；痰热清注射液对小鼠肺组织匀浆病毒血凝滴度明显降低，与流感病毒FM1感染模型组比较，差异显著，P〈0．05；痰热清注射液治疗组小鼠肺组织形态结构较为完整，偶可见少量淋巴细胞的浸润；痰热清注射液治疗组小鼠肺指数与模型组小鼠比较，显著降低，P〈0．05。     

疏风宣肺方、解表清里方药对流感病毒小鼠TLR7、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察疏风宣肺和解表清里方药对流感病毒亚甲型肺适应株（FM1）感染小鼠肺组织细胞Toll样受体7（Toll-like receptor 7, TLR7）、髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88, MyD88）、激活核因子Kappa B（nuclear factor-kappaB,NF-κB） mRNA及蛋白表达的影响。方法 选择108只小鼠,随机分为9组：正常组,模型组,磷酸奥司他韦胶囊组［西药组,2.5 g/（mL?d）］,疏风宣肺方（中药1）高、中、低剂量组［3.762、1.881、0.941 g/（kg?d）］,解表清里方（中药2）高、中、低剂量组［4.368、2.184、1.092 g/（kg?d）］,每组12只。将各组小鼠用乙醚轻度麻醉,正常组以0.05 mL生理盐水滴鼻,其余各组以0.05 mL 4LD50流感病毒FM1稀释液滴鼻感染小鼠。造模成功率100%。感染后2 h灌胃给药。正常组、模型组灌胃蒸馏水, 0.2 mL/次,1次/d,连续干预4天。采用RT-PCR反应测定肺组织TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达,采用Western blot法测定肺组织TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达升高（P<0.01）;与模型组比较,西药组,中药1高、中、低剂量组TLR7、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,中药2高、中剂量组TLR7、NF-κB mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,中药2高、中剂量组MyD88 mRNA表达降低（P<0.05）,中药2中剂量组MyD88蛋白表达降低（P<0.05）,中药2低剂量组TLR7、NF-κB蛋白表达降低（P<0.05）。与西药组比较,中药1低剂量组MyD88蛋白表达降低（P<0.05）,中药1中、低剂量组NF-κB蛋白表达降低（P<0.01）;中药2高、中、低剂量组TLR7 mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,MyD88蛋白表达降低（P<0.01）,中药2低剂量组NF-κB mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。结论 疏风宣肺方各剂量和解表清里中剂量能通过调节MyD88依赖的TLR信号传导通路下调NF-κB活性,发挥抗流感病毒的作用。疏风宣肺方效果优于解表清里方。     

黄芩苷对流感病毒FM1肺炎小鼠肺损伤的保护研究

目的:研究黄芩苷对流感病毒FM1感染小鼠肺组织NO及氧化损伤的保护作用。方法:将96只ICR鼠随机分为正常对照组、模型组、利巴韦林组(100mg.kg-1.d-1),黄芩苷大剂量组(1 500mg.kg-1.d-1),黄芩苷中剂量组(750mg.kg-1.d-1)和黄芩苷小剂量组(375mg.kg-1.d-1),每组16只。用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠,建立小鼠流感病毒性肺炎的生物模型,用不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,观察小鼠肺指数、肺组织H-E染色切片病理形态变化,比色法检测肺组织匀浆总NO合成酶(NOS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量或活性。结果:黄芩苷中、小剂量组均能明显降低肺指数,减轻肺组织病变;显著下调肺匀浆总NO合成酶、丙二醛及上调谷胱甘肽过氧化物酶含量或活性(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩苷可通过抑制流感病毒性肺炎小鼠肺组织NO及过氧化物水平而发挥保护作用。     

清热解毒中药对流感病毒感染细胞NF-κB转录活性及TNF-α mRNA水平的影响

目的 观察清热解毒中药毒热平、痰热清注射液对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FMI)感染人胚肾上皮细胞株HEK-293T细胞中报告基因NF-κB相对转录活性以及靶基因肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的影响,探讨清热解毒中药抗流感病毒FM1的作用机制.方法 采用四唑盐(MTT)比色法体外检测毒热平、痰热清及利巴韦林注射液对HEK-293T细胞增殖的影响.FM1感染HEK-293T细胞后,利用双荧光素酶顺式报告系统,以利巴韦林对照,检测不同药物组中报告基因NF-κB-Luc相对荧光素酶活性;RT-PCR方法检测各组细胞中TNF-αmRNA水平.结果 MTT结果显示,毒热平、痰热清、利巴韦林各药物组不影响细胞正常增殖(P＞0.05).报告基因结果显示,与细胞对照组相比,流感病毒FMl组细胞NF-κB转录活性显著增高(P＜0.01),与FM1病毒组相比,毒热平1、10、100 mg/L,痰热清1/300、1/200、1/100倍稀释药液,利巴韦林50 mg/L均可不同程度下调NF-κB的转录活性(P＜0.01).RT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,FM1病毒组的TNF-αmRNA表达明显增高(P＜0.05),各药物组与FM1病毒组相比,TNF-αmRNA表达量明显降低(P＜0.01).结论 毒热平、痰热清治疗流感病毒的作用机制之一,可能是通过下调转录因子NF-κB的转录活性,从而影响下游靶基因TNF-α的表达,减少肺损伤和相应炎症反应.     

气功外气对小鼠淋巴细胞和肿瘤细胞作用的体外试验

一、气功外气对小鼠脾淋巴细胞增殖的作用按本室常规制备小鼠脾细胞悬液(2×10~6/ml),ConA最终浓度为3μg/ml或不加ConA,淋巴细胞转化试验用~3H-TdR掺入法测定,细胞悬液分装于设有对照组与试验组的平皿内各6ml,试验组接受气功外气15分钟,对照组不接受外气,发功完毕两组细胞充分摇匀后,分别吸取0.2ml加入96孔培养板内,每组设6个复孔,37℃,5%CO_2培养72小时。结果发现,气功外气对无     

利用生物芯片技术检测人参皂苷Rg1对小鼠树突状细胞功能调控相关基因表达的影响

目的:利用基因芯片技术检测人参皂苷Rg1对小鼠骨髓来源DC细胞功能调控相关基因表达的影响.方法:分离C57小鼠骨髓细胞,经GM-CSF、IL-4体外诱导培养6天的未成熟DC细胞(iDC)经不同因素处理并分为:对照组(Ⅰ)、人参皂苷Rg1组(Ⅱ)、内毒素(LPS)组(Ⅲ)、Rg1+LPS组(Ⅳ),24小时后收集各组细胞,抽提总RNA,利用树突状和抗原呈递细胞基因芯片对细胞功能相关基因进行检测.结果:(Ⅱ/Ⅰ)上调≥2倍基因23个,下调≥2倍基因45个;(Ⅲ/Ⅰ)上调≥2倍基因15个,下调≥2倍基因47个;(Ⅳ/Ⅱ)上调≥2倍基因35个,下调≥2倍基因15个;(Ⅳ/Ⅲ)上调≥2倍基因37个,下调≥2基因10个.这些基因功能主要涉及细胞因子分泌及其受体表达、抗原摄取、抗原提呈、细胞表面受体、信号传导.结论:人参皂苷Rg1对DC作用涉及多个基因的表达调控,这些基因控制并影响着DC功能、分化和成熟,为进一步寻找药物靶点提供了线索.     

束缚应激条件下S180荷瘤小鼠Th1/Th2细胞因子失衡与肿瘤的生长

背景束缚是研究心理应激的可靠方法.束缚应激可以通过下丘脑-垂体-肾上腺轴抑制T细胞免疫.目的观察束缚应激状态下小鼠体内Thl/Th2平衡的改变以及荷瘤小鼠肿瘤生长情况,并试图发现心理应激对肿瘤细胞生长的影响.设计以实验动物为研究对象的对照研究.单位北京中医药大学基础医学院微生物学与免疫学教研室.材料实验在北京中医药大学基础医学院免疫学实验室开展.选择鼠龄6～8周的昆明种小鼠为实验对象.购进后适应性饲养3 d,称质量,并按体质量顺序编号,剔除体质量最大和最小的个体,再随机分入4个实验组中.分组后每组有小鼠16只(雌雄各8只),体质量18～20 g.方法取腹腔传代第7天的肿瘤细胞S180,用生理盐水洗涤后,用RPMI1640细胞培养基调细胞密度至1×1010L-1,在单纯肿瘤组和肿瘤束缚组小鼠右腋皮下注射0.2 mL/只.同时在正常对照组和单纯束缚组相同部位注射生理盐水0.2 mL/只,接种后将单纯束缚组和肿瘤束缚组小鼠用特制小管限制活动,8 h/d.10 d后处死小鼠,剥取肿瘤和胸腺并分别称其质量,计算胸腺指数,分别采用四甲基偶氮唑盐比色法和丝裂原激活淋巴母细胞法检测脾T细胞增殖及产生Thl型细胞因子白细胞介素2、干扰素γ的能力,并取血清用酶联免疫吸附法检测Th2型细胞因子白细胞介素4、白细胞介素10的含量.主要观察指标主要结局束缚应激对T细胞产生Thl型细胞因子白细胞介素2、干扰素γ的能力和Th2型细胞因子白细胞介素4和白细胞介素10的影响,以及对荷瘤小鼠肿瘤生长的促进作用.次要结局束缚应激对小鼠T细胞增殖能力的抑制作用和对胸腺指数的影响.结果束缚应激可明显增加荷瘤小鼠的瘤质量,降低小鼠胸腺指数和脾T细胞的增殖能力,降低荷瘤小鼠脾细胞产生白细胞介素2和干扰素γ的能力,并可使小鼠血清白细胞介素4和白细胞介素l0的含量明显增加.结论束缚应激可显著抑制荷瘤小鼠的细胞免疫功能,使产生Thl型细胞因子的功能减弱,Th2型细胞因子的含量增加,导致Thl/Th2细胞的平衡进一步向Th2细胞漂移.这可能是其促进肿瘤生长的重要机制.