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目的:获取一株重组人白细胞介素4选择性剪接变异体(IL-482)蛋白的高效表达菌株,为研究变态反应性疾病的发病机制以及阻滞IL-4的生物学效应奠定基础。方法:分离人外周血琳巴细胞,提取mRNA,RT- PCR获得人IL-482基因后,克隆入大肠杆菌表达载体,构建高效表达人IL-482的重组菌株。结果:成功构建了人IL-482的高效表达菌株(TNFHis-hIL-482),序列测定与文献报道一致。SDS-PAGE分析显示此菌株所表达的目的蛋白产物的相对分子质量为3.4×104,与预期结果相符。光密度扫描重组hIL-482蛋白质占细菌总蛋白的30%。结论:在大肠杆菌中成功地表达了hIL-482基因。 相似文献
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目的 在大肠杆菌中表达抗原癌基因c-erbB-2表达产物p185的单 链抗体e23(scFv)/假单孢菌属外毒素活性片 段PE40免疫毒素的融合蛋白,为乳腺癌、胃癌等多种c-erbB-2呈过量表达的恶性肿瘤的免疫治疗奠定基础. 方法 去除克隆在真核表达载体pLNCX中的e23 (scFv) PE40基因5′端编码信号肽的核苷酸序列,并将改建后的融合基因克隆到原核融合表达载体pGEX-4T中表达. 结果 序列测 定 表明. 改建后的抗p185 e23(scFv)/PE40序列正确. 融合基因经IPTG诱导表达4 h后,经SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,在Mr 90 000处出现一条新生蛋白带,表达量约占菌体总蛋白的15%. 结论 成功改建并在原核中表达了抗p185 e23 (scFv)/ PE40融合蛋白. 相似文献
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目的 克隆、表达和鉴定人破骨细胞抑制因子(OPG) .方法 从培养的人胚肺成纤维细胞 (WI- 38)中提取总 RNA,经 RT- PCR获得人破骨细胞抑制因子基因 .将该基因克隆到 p GEM3zf-载体中 ,测序鉴定 .继而将 OPG基因插入 TNFHis融合表达载体中 ,4 2℃诱导表达 4~ 5 h,做 SDS-PAGE分析 .以免疫印迹法鉴定 TNFHis OPG融合蛋白的表达 .结果 DNA测序证明 ,获得了 OPG基因 ,其序列与国外文献报道不完全一致 .SDS- PAGE分析表明 ,TNFHis OPG融合蛋白获得表达 ,其 Mr为 7.1× 10 4 ku,表达量约占菌体总蛋白的 10 % .免疫印迹法鉴定显示 ,该融合蛋白可与抗 TNF-α单抗产生阳性反应 .结论 OPG基因的克隆和表达均获得了成功 . 相似文献
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人MUC-1全长cDNA基因真核表达载体构建及在COS-7细胞中的表达 总被引:6,自引:2,他引:4
目的 构建含人MUC-1全长cDNA序列的真核表达载体,并观察其在COS-7细胞中的表达。方法 将目的基因MUC-1克隆入pGEM-3zf(-)载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定。亚克隆入真核质粒pcDNA3.1( ),构建真核表达载体pcDNA3.1( )-MUC-1。用电穿孔法将重组质粒转入COS-7细胞,以免疫荧光和流式细胞仪检测MUC-1的表达。结果 酶切鉴定和序列分析证实,重组质粒含有人MUC-1全长cDNA编码序列,转染实验表明MUC-1基因能在COS-7细胞中表达。结论 人MUC-1全长cDNA基因真核表达载体构建及其在COS-7中的表达均获成功,为基因疫苗的进一步研究奠定了基础。 相似文献
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胸腺素α1—硫氧还蛋白融合蛋白基因的表达及其生物学功能的初步研究 总被引:4,自引:2,他引:2
胸腺素α1(thymosin alpha1,Tα1)作为一种免疫增强剂,临床用途广泛。为了大量制备Tα1,按大肠杆菌惯用密码子用人工方法合成Tα1基因,克隆于pUC19的EcoRi和PstI位点,经测序证明序列正确后,串联为4串体(Tα1(4)),经再次确认后克隆入pThioHisA的EcoRI t PstI位点,转化大肠杆菌TOP10菌种,酶切鉴定证明正确后,经1mmol/L IPTG诱导4h,获得硫氧还蛋白与Tα1(4)的融合表达,并经Western blot分析证实,用离子交换柱层可纯化出硫氧还蛋白与Tα1(4)融合蛋白,利用3H-TdR掺入法证实,该融合蛋白具有刺激小鼠脾淋巴细胞的活性。α 相似文献