重组胸腺素α1的克隆、表达与纯化

目的 利用基因工程方法表达胸腺素α1（thymosin alpha 1,Tα1）的串联体并进行纯化、鉴定。方法 将Tα1的基因拆发为4个片段进行合成,退火后经PCR获得串联体基因,测序正确后克隆在硫氧还蛋白（thioredoxin)融合蛋白表达载体pThioHisA中,转化大肠杆菌TOP10菌株,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白经过80℃热处理及阴离子交换柱Q－Sepharose Fast Flow进行纯化,Western-blot进行鉴定。结果 获得了纯化的Thioredoxin-Tα1③,分子质量约为31ku。结论 用基因串联思路表达小分子多肽是一种可行的方法,Tα1③的成功表达为检测其生物学活性奠定了基础。     

EPO模拟肽基因4串联体的构建和表达

目的 克隆和表达EPO模拟肽基因4串联体,方法设计了特殊的基因串联方案,在人工合成EPO模拟肽全基因的基础上,将EPO模拟肽基因由单体逐步地连接成4串联体,继而将获得的正确EPO模拟肽4串联体插入PBV220表达载体诱导表达,结果 构建的EPO模拟肽基因4串联体经酶切和DNA测序分析,结果表明该基因串联体的序列与设计的序列完全相同,EPO模拟肽4串联体插入PBV220载体后,重组菌经42度诱导4h,SDS－PAGE分析结果显示,该串联体得到较高水平的表达,凝胶扫描结果表明,其表达量约占菌体蛋白总量的20％。结论 EPO模拟肽基因4串联体的构建与表达均获得了成功。     

凝胶过滤对地龙胶囊不同组分的分离

实验表明,地龙胶囊(912)有较强的抑制肿瘤细胞生长的作用,但其抑瘤成分还不清楚。作者采用凝胶过滤法分离收集地龙胶囊的不同组分,为进一步对这些组分的活性分析及其抑瘤机理的探讨创造条件.1 材料和方法 将膨胀好的Scphadex G50(Pharmacia)装入色谱柱(Φ2.5cm×50 cm)平衡,     

不同剂量60Coγ射线照射对小鼠脾细胞DNA含量的影响

不同剂量~（６０）Ｃｏγ射线照射对小鼠脾细胞ＤＮＡ含量的影响李子蓉，韩苇，任冬青一般认为，电离辐射对机体细胞的ＤＮＡ代谢可产生重要的影响，如哈成代谢抑制，分解代谢增强等．脾脏既是机体重要的免疫器官，亦是辐射敏感器官，故由电离辐射引起的脾细胞ＤＮＡ的变?..     

加压素在针刺镇痛中的作用及其与中枢单胺类神经递质和脑啡肽含量变化的分析

<正> 鉴于不少文献报导在针刺镇痛中有阿片肽及中枢单胺类递质参与,联系我们以往在实验中曾看到的电针后脑脊液中加压素含量增加。以及近年来发现加压在脑内有镇痛作用。这种镇痛作用不被阿片受体阻断剂NX 所拮抗。本文拟观察在精—加压素(AVP)镇痛效应中亮—脑腓肽(LEK)与单胺类递质的变化以及和电针镇痛的关系。     

胸腺素α1基因串联体的构建

0 引言胸腺素α1(Thymosin alpha 1, Tα1)是从胸腺素组分5(TF5)中分离纯化出的热稳定酸性多肽[1],由28个氨基酸组成,Mr为3108. 它是一种具有多种生物学活性的免疫调节剂,已应用于治疗乙肝、丙肝、癌症和免疫缺陷的研究中. 虽然胸腺素α1有着广泛的应用前景,但由于其基因过短,很难利用基因工程方法实现直接表达,所以目前多是化学合成产品[2],价格比较昂贵,应用的推广受到限制. 为了探索胸腺素α1多聚体的可能的生物学活性及其基因的体外表达,我们利用随机退火与PCR技术相结合的方法构建了胸腺素α1的多串体基因,并成功克隆,从而为进一步研究奠定了基础.     

利用恒溶氧-补料分批技术高密度培养大肠杆菌生产重组肿瘤导向多肽LTL-TNF

目的　探讨重组肿瘤导向多肽 L TL - TNF工程菌的大规模培养与表达方法以获取重组 L TL TNF.方法　首先在试管和三角瓶中探讨工程菌的生长和表达规律 ,筛选其最适宿主菌、最佳培养及诱导表达条件 ,然后在 5 L 自控发酵罐中进行分批补料培养 .结果　保持培养过程中 30 %～ 40 %的溶解氧和限制性流加葡萄糖 ,工程菌 DH5 α/ p BV- L TL TNF在5 L 发酵罐中培养至终密度 A6 0 0 nm 40～ 5 0时 ,目的蛋白的表达最高 ,可达菌体总蛋白的 5 0 % ,L TL - TNF的含量达到5 .12 g· L- 1 ,发酵总时间在 12 h左右 .结论　确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺 ,为重组肿瘤导向多肽L TL TNF工程菌的工业化生产奠定了基础 .