IL-1β辅助小胶质细胞M1型活化的作用机制研究

目的探讨IL-1茁辅助小胶质细胞M1型活化的作用和机制。方法将BV2细胞分为对照（Control）组、脂多糖（LPS）组、LPS+IL-1茁组。Control组常规培养;LPS组用终浓度为1mg/L的LPS处理;LPS+IL-1β组先用15滋g/L的IL-1β预处理6h,再用终浓度为1mg/L的LPS处理。LPS的处理时间为24h。酪氨酸激酶（JAK1）抑制剂IN-7处理的实验中,将BV2细胞分为LPS组、LPS+IL-1茁组、LPS+IL-1茁+IN-7组,其中LPS+IL-1茁+IN-7组在IL-1茁处理前6h用0.5滋mol/LIN-7预处理,阻断JAK1,其余处理同前。采用ELISA法检测培养基中IL-6、TNF-琢、一氧化氮（NO）和前列腺素G2（PEG2）水平;免疫荧光染色观察BV2细胞中CD86的荧光强度;Westernblot法检测M1型标志物单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、趋化因子8（CXCL-8）的表达以及JAK1-信号转导及转录激活蛋白1（STAT1）信号蛋白JAK1、STAT1、磷酸化的JAK1（p-JAK1）、磷酸化的STAT1（p-STAT1）的表达。结果与LPS组比较,LPS+IL-1β组培养基中在3、6、12、18、24h时IL-6、TNF-α、NO和PEG2表达水平均上调（均P＜0.05）,细胞中CD86荧光强度上调（P＜0.05）,细胞中MCP-1、CXCL-8、JAK1、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）。而IN-7处理后,与LPS+IL-1β组比较,LPS+IL-1β+IN-7组培养基在3、6、12、18、24h时IL-6、TNF-α、NO和PEG2表达水平均下调（均P＜0.05）,细胞中CD86荧光强度下调（P＜0.05）,细胞中MCP-1、CXCL-8、JAK1、STAT1、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达水平均下调（均P＜0.05）。结论IL-1β可以通过激活JAK1-STAT1信号,进一步促进小胶质细胞M1型活化,这是神经炎症进展的机制之一。     

樟芝多糖对6-OHDA构建的帕金森小鼠模型的行为及抗氧化损伤/抗炎能力的影响

目的：探索樟芝多糖对于6-OHDA诱导的的帕金森小鼠脑组织抗氧化/抗炎能力及行为学的影响。方法：6-OHDA毁损MFB构建帕金森小鼠模型,小鼠分组为：对照组、6-OHDA组、实验组(50、100、200mg/kg),腹腔注射给药。游泳实验和水迷宫实验观察行为学变化,Elisa法检测纹状体GSH-Px、SOD、CAT、LDH、MDA含量和炎症因子IL-6、IL－1β表达。结果：与6-OHDA组相比实验组的小鼠的GSH-Px、SOD、CAT、LDA有不同程度上升,MDA、IL-6和IL－1β有不同程度的下降。小鼠的认知、行动能力得到明显的改善。结论：樟芝多糖可以一定程度上改善6-OHDA的帕金森小鼠行为学,其原因可能与多糖具有抗氧化抗炎的作用有关,多糖可以提高了脑组织抗氧化能力,减少炎症因子表达。     

乙醇分级沉淀的樟芝多糖对于小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究不同浓度乙醇沉淀获得的樟芝多糖对于急性肝损伤小鼠的保肝作用。方法 采用不同浓度的乙醇沉淀获得樟芝多糖,建立D-氨基半乳糖的急性肝损伤小鼠,Elisa法检测各组血清的谷丙转氨酶（ALT）,谷草转氨酶（AST）,肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）的表达以及肝组织中SOD、CAT、GSH-Px、GSH的表达,肝脏HE染色检查组织病理,qPCR检测肝组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3的mRNA的表达。确定樟芝多糖中对于小鼠急性肝损伤有效的部分。结果 樟芝多糖的各浓度的乙醇沉淀物均有一定的保肝作用,其中90%乙醇沉淀的多糖对于小鼠模型ALT、AST的含量具有显著的降低作用且优于其他组多糖（P<0.05）。4种多糖可以显著降低血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、和肝组织中Bax、Caspase-3mRNA的表达,提高白介素-10（IL-10）和肝组织中SOD、CAT、GSH-Px、GSH蛋白表达以及Bcl-2mRNA的表达（P<0.05）。且PW90多糖效果较好。结论 不同浓度乙醇沉淀的樟芝多糖对于急性肝损伤有着一定的保护作用,90%乙醇沉淀获得的多糖保肝作用优于其他浓度乙醇沉淀获得的多糖。     

樟芝多糖通过CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞对小鼠非酒精性脂肪性肝病的保护作用

目的 研究樟芝多糖通过CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（Treg）的调控对小鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的保护作用。方法 高脂饮食构建小鼠NAFLD模型,设置对照组、模型组、低剂量组、高剂量组。樟芝多糖干预1~4周中每周流式细胞术检测外周血Treg细胞的比例,谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）的表达,外周血中转化生长因子β（TGF-β）、白介素-6（IL-6）的表达。樟芝多糖干预4周后,小鼠处死,取肝脏进行油红染色,Western blot法检测肝组织中TGF-β和Foxp3、Smad3蛋白的表达,RT-qPCR检测IL-6、TGF-β、Foxp3、Smad3的mRNA表达。结果 高脂饮食喂养4周后成功构建NAFLD小鼠模型,且模型组中Terg比例显著低于对照组（P<0.05）,樟芝多糖干预后Treg比例相比模型组显著增高（P<0.05）,小鼠肝功能得到显著改善,外周血中TGF-β表达上调、IL-6的表达下调,肝组织中TGF-β和Foxp3、Smad3蛋白和mRNA均上调,而IL-6的mRNA表达下调。结论 樟芝多糖可以通过Treg和TGF-β-Smad3信号对NAFLD起到保护作用,作用机制和免疫改善有关。     

IL-9通过TGF-β/Smad通路诱导胃癌MKN-45细胞上皮-间充质转化

目的:研究白细胞介素9(IL-9)通过激活转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路促进人胃癌MKN-45细胞上皮-间充质转化(EMT)的机制。方法:将常规培养的MKN-45细胞分为对照组和IL-9刺激组,利用CCK-8检测细胞活力;光镜下观察细胞形态的变化; RT-qPCR和Western blot检测EMT相关蛋白、TGF-β、Smad3和Smad5 mRNA和蛋白表达的变化; Transwell法检测细胞侵袭能力;免疫荧光染色检测细胞中波形蛋白(vimentin)的表达。结果:IL-9可以提高MKN-45细胞的存活率,且具有时间依赖性; IL-9刺激组关键转录因子Snail与Slug的表达上调,EMT相关蛋白N-cadherin、fibronectin、collagen I和vimentin表达上调,E-cadherin表达下调(P 0. 05)。Transwell结果显示IL-9组细胞侵袭能力增强,镜下观察迁移运动的细胞形态呈长梭形,RT-qPCR和Western blot结果显示TGF-β、Smad3和Smad5表达升高(P 0. 05)。结论:IL-9可以促进MKN-45细胞EMT,其作用与TGF-β/Smad信号的激活有关。     

钠-氢交换蛋白调节细胞内环境酸化并激活肝癌细胞焦亡的作用及相关机制

目的探讨钠-氢交换蛋白1（NHE1）调节细胞内环境酸化并激活肝癌细胞焦亡的作用及相关机制。方法采用Westernblot和RT-qPCR法检测4株肝癌细胞中NHE1蛋白及mRNA表达水平,选出表达最高的MHCC97细胞株进行实验。小干扰RNA（siRNA）技术沉默MHCC97细胞中NHE1,将常规培养的MHCC97细胞作分为对照组、NHE1无关对照的序列转染的细胞作为siRNA-NC组、NHE1转染的细胞株作为siRNA-NHE1组,检测3组细胞活性,细胞凋亡情况,细胞中半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、炎性小体（NLRP3）、消皮素D（GSDMD）表达水平,培养基中IL-1β、IL-18水平以及细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出水平,观察NHE1沉默对细胞焦亡的影响。另取NHE1沉默后细胞设立NHE1沉默组和Caspase-1抑制组（用Caspase-1抑制剂AC-YVAD-CMK干预）,观察阻断Caspase-1对细胞焦亡的影响。结果NHE1沉默后的MHCC97细胞活性下降（P＜0.05）,凋亡增多;细胞Caspase-1、NLRP3表达水平,培养基IL-1β、IL-18水平及LDH漏出水平升高,GSDMD表达水平降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。阻断Caspase-1后细胞活性增强（P＜0.05）,凋亡减少;细胞Caspase-1、NLRP3表达水平,培养基IL-1β、IL-18水平及LDH漏出水平降低,GSDMD表达水平升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论NHE1沉默会造成细胞内酸化,同时激活细胞焦亡,这是NHE1在肝癌中的作用机制之一;阻断Caspase-1可以抑制细胞焦亡。     

Bioz.com在TURP患者血流动力学变化监测及TURS的早期诊治中的应用

目的 探讨Bioz.com在经尿道前列腺电切术（TURP）患者中早期诊治电切综合征（TURS）的应用价值。方法 选择我院择期行TURP的患者30例,行腰硬联合麻醉,记录患者麻醉前（T0）,麻醉后（T1）,灌洗液量3000 ml（T2）,灌洗液量6000 ml（T3）,灌洗液量9000 ml（T4）,灌洗液量12000 ml（T5）,灌洗液量15000 ml（T6）,灌洗液量18000 ml（T7）时的心率（HR）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、搏出量（SV）、体血管阻力（SVR）、胸液成分（TFC）等血流动力学指标以及动脉血Na+,K+,Hb,Hct浓度。记录TURS发生情况。结果 与T0时比较,T1~T7时:HR升高（P＜0.05）,其中T1时升高最明显;SBP与DBP降低（P＜0.05）,其中T1时降低最明显;T2~T7时:Na+,Hb,Hct逐渐降低（P＜0.05）,K+逐渐升高（P＜0.05）;SV逐渐升高（P＜0.05）,SVR逐渐降低（P＜0.05）,其中T1时变化最明显;T2~T7时,TFC逐渐升高（P＜0.05）;与T1时比较,T2~T7时:HR逐渐降低（P＜0.05）;SBP与DBP逐渐升高（P＜0.05）;Na+,Hb,Hct逐渐降低,K+逐渐升高（P＜0.05）。SV逐渐升高（P＜0.05）,SVR逐渐降低（P＜0.05）,TFC逐渐升高（P＜0.05）。直线相关分析示,SV与Na+呈负相关（r=-0.948,P＜0.01）,与K+呈正相关（r=0.969,P＜0.01）,与Hb呈负相关（r=-0.976,P＜0.01）,与Hct呈负相关（r=-0.973,P＜0.01）。TFC与Na+呈负相关（r=-0.980,P＜0.01）,与K+呈正相关（r=0.996,P＜0.01）,与Hb呈负相关（r=-0.995,P＜0.01）,与Hct呈负相关（r=-0.997,P＜0.01）。所有患者均未发生TURS。结论 应用Bioz.com持续监测血流动力学变化,有助于通过无创的方法来早期预防TURS的发生。     

丁苯酞对于星型胶质细胞炎症反应的保护作用及缝隙连接蛋白Cx43表达的影响

目的 研究丁苯酞(dl-3-n-butylphthalidle,NBP)对于脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的星型胶质细胞(astrocytes,Ast)炎症反应的抑制作用和机制,同时观察其对于缝隙连接蛋白Cx43表达的影响.方法 Ast细胞采用梯度浓度的NBP处理,1μg·mL-1的LPS诱...     

响应面法优化微波辅助提取樟芝子实体多糖及人T淋巴细胞体外增殖的促进作用

目的:利用响应面法优化微波辅助提取樟芝子实体多糖的工艺,研究樟芝子实体多糖体外促进人T淋巴细胞的增殖作用。方法:根据单因素试验结果,从提取时间、微波功率以及料液比为自变量,多糖提取率为响应值,采用响应面法研究各自变量及其交互作用对樟芝子实体多糖提取的影响,利用Elisa法和MTT检测樟芝子实体多糖体外促进人T淋巴细胞增殖的作用。结果:提取时间20 min、微波功率500 W、料液比为1∶5.5的条件下樟芝子实体多糖的提取率为11.25%,而不同浓度的樟芝多糖可以促进T淋巴细胞的增殖,并且增加IL-2和IFN-γ的表达,促进T淋巴细胞活化。结论:该研究可以为樟芝子实体多糖的提取提供参考,樟芝子实体多糖对人T淋巴细胞的增殖和活化有促进作用。     

1-甲基色氨酸对大鼠脑缺血再灌注模型小胶质细胞活化的干预作用

目的 研究IDO抑制剂1-甲基色氨酸（1-methyltryptophan,1-MT）对大鼠脑缺血再灌注模型小胶质细胞活化的干预作用及相关炎症因子表达的影响。方法 SD大鼠分为假手术组、模型组和1-MT组。使用大脑中动脉闭塞法（middle cerebralartery occlusion,MCAO）构建缺血再灌注模型。对大鼠进行神经功能缺损评分,TTC法测定脑梗死体积,HE染色检测梗死区域的病理形态变化,免疫组化法检测梗死区域IBA-1和GFAP的表达,免疫荧光技术检测NeuN阳性细胞数,Westernblot法检测组织中IL-1β、TNF-α、NF-κB的表达水平。体外培养BV2细胞,采用氧糖剥夺法（oxygen glucose deprivation,OGD）模拟缺血缺氧条件,设置对照组、模型组和1-MT组,Western blot法检测小胶质细胞标志物IBA-1、IL-1β、NF-κB以及TNF-α的表达水平。结果 1-MT可以显著改善MCAO大鼠的神经功能,缩小梗死面积,抑制小胶质细胞的活化和相关炎症因子的表达。细胞实验中,1-MT可以显著下调OGD-BV2细胞中IBA-1的表达水平和IL-1β、NF-κB、TNF-α的水平。结论 IDO抑制剂1-MT对于大鼠脑缺血再灌注模型有着很好的保护作用,其作用机制与小胶质细胞的活化抑制以及相关炎症因子的表达有关。