抗纤维蛋白单克隆抗体及t—PA／u—PA用于血栓显…

血栓性疾病的及时，准确诊断及溶栓治疗效果，对疾病的预后起着关键作用，核素标记的抗纤维蛋白单抗及其片段，如鼠抗人纤维蛋白Ｄ－双聚体单抗ＭＡ１５Ｃ５与人纤维蛋白β链单抗５９Ｄ８，以及与抗纤维溶酶原活化剂ｔ－ＰＡ单抗组成的双特异嵌合抗体，作为血栓显像剂显示了很好的应用前景，由抗纤维旧白单抗与小分子纤溶酶原活化剂重组的蛋白分子，则可能成为新的有效溶栓剂。     

脂联素与肿瘤相关关系的研究现状

脂联素是由脂肪细胞特异分泌的一种生物活性分子，与肥胖、胰岛素抵抗等多种疾病相关。近几年关于脂联素与乳腺癌、子宫内膜癌、子宫平滑肌瘤、白血病、结肠直肠癌、胃癌、前列腺癌等几种恶性肿瘤的相关关系及其作用机制的研究取得了较大的进展．     

脂联素与肿瘤相关关系的研究现状

脂联素是由脂肪细胞特异分泌的一种生物活性分子,与肥胖、胰岛素抵抗等多种疾病相关。近几年关于脂联素与乳腺癌、子宫内膜癌、子宫平滑肌瘤、白血病、结肠直肠癌、胃癌、前列腺癌等几种恶性肿瘤的相关关系及其作用机制的研究取得了较大的进展。     

重组脂联素融合蛋白的表达及其生物学活性测定

目的 表达重组脂联素融合蛋白(adiponectin-Trx),并测定其生物学活性.方法 从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-T载体,序列经DNA测序证实.将目的 序列(18-247氨基酸)亚克隆至pET-32(a)表达载体,重组质粒adiponectin/pET32(a)的序列经测序证实.将adiponectin/pET32(a)转化表达宿主菌OrigamiTM(DE3),在27℃以1mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达目的 蛋白,SDS-PAGE和氨基酸测序检测目的蛋白的表达,目的 蛋白经组氨酸镍螫和树脂亲和纯化.以不同浓度的融合蛋白adiponectin-Trx和Trx蛋白处理体外培养的人脐静脉内皮细胞,细胞增殖法测定其生物学活性.结果 小鼠脂肪组织脂联素基因的编码序列,337位点上的碱基A被C置换,导致在113位的蛋氨酸被缬氨酸取代.序列测定表明,构建的重组表达载体adiponectin/pET32a序列完全正确,诱导工程菌主要表达可溶性的融合蛋白adiponectin-Trx,部分以包含体形式表达.表达产物的相对分子量(Mr)同预期分子量相同,adiponectin-Trx Mr为43 000,Trx Mr为19 000.在低浓度时融合蛋白刺激人脐静脉内皮细胞增殖.结论 小鼠脂肪组织脂联素基因编码序列与来自3T3-L1脂肪细胞的编码序列不同.成功地在E.coli中表达了重组脂联素融合蛋白并具有生物学活性.     

重组脂联素融合蛋白的表达及其生物学活性测定

目的表达重组脂联素融合蛋白（adiponectin-Trx）,并测定其生物学活性。方法从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-T载体,序列经DNA测序证实。将目的序列（18-247氨基酸）亚克隆至pET-32（a）表达载体,重组质粒adiponectin/pET32（a）的序列经测序证实。将adiponectin/pET32（a）转化表达宿主菌OrigamiTM（DE3）,在27℃以1mmol/L IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE和氨基酸测序检测目的蛋白的表达,目的蛋白经组氨酸镍螯和树脂亲和纯化。以不同浓度的融合蛋白adiponectin-Trx和Trx蛋白处理体外培养的人脐静脉内皮细胞,细胞增殖法测定其生物学活性。结果小鼠脂肪组织脂联素基因的编码序列,337位点上的碱基A被G置换,导致在113位的蛋氨酸被缬氨酸取代。序列测定表明,构建的重组表达载体adiponectin/pET32a序列完全正确,诱导工程菌主要表达可溶性的融合蛋白adiponectin-Trx,部分以包含体形式表达。表达产物的相对分子量（Mr）同预期分子量相同,adiponectin-Trx Mr为43000,Trx Mr为19000。在低浓度时融合蛋白刺激人脐静脉内皮细胞增殖。结论小鼠脂肪组织脂联素基因编码序列与来自3T3-L1脂肪细胞的编码序列不同。成功地在E.coli中表达了重组脂联素融合蛋白并具有生物学活性。     

99Tcm-HYNIC-fMLFK用于小鼠炎症显像

目的　研究99Tcm 标记的趋化肽类似物fMLFK在小鼠体内的分布特征以及用于炎症显像的可能性。方法　以固相方法合成趋化肽类似物fMLFK ,经HYNIC衍生化后以99Tcm 标记。经小鼠尾静脉给药 ,观察99Tcm HYNIC fMLFK在正常和炎症小鼠体内的生物学分布。炎症小鼠于给药后6 ,12及 2 0h进行显像。结果　99Tcm HYNIC fMLFK在小鼠心脏、甲状腺、肌肉和胃肠道中每克组织百分注射剂量率 (%ID g)较低 ,且随时间延长清除较快 ;炎症病灶 %ID g相对较高 ,随时间延长清除较慢。同时 ,其在血液中清除迅速 ,给药后 3h %ID g降低为 0 5h的 2 4 %。给药后 2 ,3和 2 0h的炎症病灶肌肉 正常肌肉比值 (T NT)分别为 2 8± 0 4 ,3 1± 0 3和 14 3± 2 0。给药后 12h显像可见炎症病灶 ,2 0h延迟显像病灶更加清晰。结论　99Tcm HYNIC fMLFK能够选择性浓聚于炎症病灶 ,可用于急性炎症的临床诊断。     

人整分子促甲状腺素免疫放射分析法的建立及其初步临床应用

用两种抗人促甲状腺素（ｈＴＳＨ）单克隆抗体、固相试管包被技术建立了ｈＴＳＨ免疫放射分析法。方法的灵敏度为０．０３ｍＩＵ／Ｌ，批内、批间变异系数均小于５％，与人促卵泡激素、促黄体激素和绒毛膜促性腺激素的交叉反应率均小于１％，药盒在４℃下存放六周分析结果稳定，适用于临床诊断甲亢症。     

抗Resistin合成多肽抗体的制备及鉴定

目的制备抵抗素合成肽及其抗体.方法根据人抵抗素cDNA编码的氨基酸序列合成抵抗素分子22～34位的13个氨基酸的多肽(CSMEEAINERIQE),并利用MBS双功能试剂将人工合成多肽成功地与KLH进行偶联,免疫家兔制备抗抵抗素合成多肽的抗体,并经亲和层析进行了纯化.结果对此抗体进行鉴定的结果表明,抗人抵抗素合成多肽抗体可与天然抵抗素分子发生特异性反应,并可用于免疫沉淀和Western blot.结论该抗体的制备为Resistin分子功能的研究及肥胖和2型糖尿病的机制研究提供了有用的工具.     

人瘦素放免分析法的建立及初步临床应用

瘦素是由肥胖基因编码, 由脂肪细胞合成和分泌的一种亲水性激素蛋白.本文用高纯的重组人瘦素抗原免疫家兔, 得到高效价的兔抗人瘦素多克隆抗体, 氯胺-T法制备125I-瘦素标记物, 建立人血清瘦素RIA.本方法特异性强, 灵敏度较高, 精密度较好, 其测定值与Linco公司的放免药盒有很好的一致性.用本法建立的正常参考值(BMI 18-25): 男性(34例)为2.15±1.46ng/mL,女性(36例)为7.86±3.60ng/mL.将112名健康者的检测结果分成男、女两组, 血清瘦素值与BMI之间有明显的正相关(r=0.72,P＜0.001).瘦素水平与年龄之间无明显相关性(P＞0.05).女性的促黄体激素、促卵泡激素、泌乳素、孕酮和雌二醇与瘦素无明显相关性(P＞0.05).而对于男性, 睾酮与瘦素水平成明显的负相关(r=0.792,P＜0.01).     

化学发光免疫分析

化学发光免疫分析技术基于放射免疫分析的基本原理,其特点是以化学发光物质为示踪物,灵敏度高,快速,简便,主要试剂包括氧化剂、发光剂和催化剂等,测试中不使用有害的试剂,因此成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法。