受精早期观察第二极体对胚胎发育及IVF-ET结局的影响

目的:探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗中早期观察第二极体判断受精的方法对胚胎发育及IVF-ET结局的影响。方法:回顾性研究郑州大学人民医院2010年全年行IVF长方案治疗的患者606例,根据病史判断受精障碍风险将其分为两组。A组:受精后4 h拆除颗粒细胞判断早期受精。B组:受精后17～18 h观察受精。分别比较两组年龄、获卵数、卵子成熟率、正常受精率、可利用胚胎率(可利用胚胎数/2PN卵裂数)、胚胎种植率、临床妊娠率及早期流产率。结果:两组可利用胚胎率差异具有统计学意义(P<0.05),其它各项统计指标均未见明显差异(P>0.05)。结论:受精障碍高风险患者在4 h拆除颗粒细胞观察第二极体有降低可利用胚胎率的风险,不建议所有IVF患者使用。     

严重烧伤后非热力因素所致大鼠肝细胞DNA损伤

目的:研究严重烧伤后非热力损伤因子能否造成远隔部位的肝脏细胞DNA损伤.方法:将18只SD大鼠随机分为正常对照组、烧伤对照组和烧伤延迟复苏组,制作成35%TBSAⅢ度的烧伤模型.各组动物根据设置的时间点麻醉并剖腹取肝.分离单个肝细胞和抽提DNA后,用单细胞凝胶电泳和气相色谱质谱联用方法检测DNA损伤并分析损伤类型.结果:单细胞凝胶电泳显示烧伤对照组与正常对照组的尾部差值(T-C值)为23μm,烧伤延迟复苏组的T-C值为35μm.气质联用检测在烧伤对照组和烧伤延迟复苏组均检测出氧化硷基6-氨基、9羟基嘌呤.结论:严重烧伤后和烧伤延迟复苏条件下非热力损伤因素可以造成肝脏细胞的DNA损伤.     

细胞免疫与烧伤创面愈合的实验研究

为探讨免疫低下对烧伤创面愈合的影响，设计了用低剂量钴源照射的方法建立的免疫抑制模型，并在该模型的基础上观察了免疫抑制大鼠Ⅱ度烧伤创面愈合的情况。结果表明：①大鼠接受２Ｇｙ６０Ｃｏ照射后２０天内，Ｔｈ／Ｔｓ比值和Ｔ细胞肿瘤花环率持续下降。照射后皮肤组织ＤＮＡ含量及细胞周期均无明显改变。②免疫抑制大鼠胶原修复能力下降，创面愈合百分率低于正常大鼠。由此证实了免疫功能低下对创面愈合的抑制作用。     

烧伤创面渗液sTNFR I,sTNFRⅡ的变化

烧伤创面愈合过程中,通过一定程度的炎症反应,能清除坏死组织,分泌生长因子,有利于创面愈合.炎症反应的过度与不足均会影响创面愈合的进展.TNF对炎症反应的启动、调节等作用不容忽视.TNF作用需通过其受体的介导,而可溶性TNF受体(sTNFR)能中和TNF,进而起到调节炎症反应的作用.本实验通过检测人烧伤创面渗液不同时期中的sTNFR I,sTNFR Ⅱ,以期观察它们与创面愈合的关系.     

α-硫辛酸对高糖诱导的系膜细胞核因子-κB活性的抑制作用

目的探讨α-硫辛酸对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及核因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法在体外条件下采用正常糖(NG)、高糖(HG)及HG 不同浓度α-硫辛酸处理大鼠系膜细胞;噻唑蓝法(MTT)测定系膜细胞增殖;采用凝胶电泳迁移率改变法检测NF-κB的活性。结果50~300μmol/L的α-硫辛酸可抑制系膜细胞增殖。HG刺激系膜细胞1h可引起NF-κB活性增强2·2倍(P<0·01),高糖诱导的NF-κB的活化可被α-硫辛酸(200μmol/L)所抑制(0·6±0·3vs2·2±0·2,P<0·01)。结论一定浓度的α-硫辛酸可抑制高糖诱导的系膜细胞增殖,并可降低NF-κB的DNA结合活性。     

应用免疫磁珠负选法分离与纯化小鼠骨髓间充质干细胞

目的:拟建立体外分离纯化小鼠骨髓间充质干细胞的新方法,从而得到高纯度的骨髓间充质干细胞。方法:实验于2002-09/2005-03在解放军第二军医大学附属长海医院烧伤科实验室完成。①选取清洁级7d龄FVB/N小鼠15只,利用免疫磁珠法(CD11b负选)从小鼠的骨髓细胞中分离纯化骨髓间充质干细胞:颈椎脱臼处死后无菌条件下取出小鼠双侧股骨,消毒离断后去除上清及脂肪层,吹打成单细胞悬液后接种于培养基中。贴壁细胞达到90%左右融合后,用胰蛋白酶和乙二胺四乙酸进行消化,将悬浮的细胞与CD11b抗体避光反应2min,移入已预置入磁场的LD管,不加压通过,收集管中的细胞成分,用培养基重悬并吹打成单细胞悬液后以1×109L-1～2×109L-1的密度接种于培养基中培养。②培养传代后流式细胞仪检测细胞周期、表面标记物,并利用诱导剂观察其定向诱导为脂肪细胞和成骨细胞的能力。结果:①细胞形态学观察:免疫磁珠法获得的细胞几乎无圆形细胞夹杂,贴壁率高,形态单一呈典型成纤维样、漩涡状生长,体外增殖迅速。②细胞生长曲线绘制情况:细胞贴壁后一两天为细胞生长缓滞期,之后进入对数增长期,六七天后进入平台期。③细胞周期分析结果:G0/G1期细胞约86%,S G2 M期约14%。④细胞表面标记物检测结果:第3代骨髓间充质干细胞3%表达CD45,68.7%表达CD29,3%表达CD34,89.6%表达CD105。⑤骨髓间充质干细胞向脂肪细胞与成骨细胞定向分化情况:在地塞米松、1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、吲哚美辛等诱导剂作用下,脂肪细胞 成骨细胞诱导组细胞第5天开始油红O染色显示细胞核呈蓝色,细胞内脂滴呈橙色;在β-甘油磷酸钠、2-磷酸-抗坏血酸等诱导剂的作用下,第10天开始AKP染色显示细胞内有致密颗粒形成,VonKossa染色显示钙盐沉积。结论:本实验通过免疫磁珠法(CD11b负选)成功地从FVB/N小鼠骨髓细胞中分离纯化出骨髓间充质干细胞。根据表面标记物的检测结果提示该法获得的细胞纯度高、周期性慢、多分化潜能,符合干细胞特性。     

大鼠烫伤后早期转化生长因子β1/Smads信号通路的活化

1材料与方法 1.1 主要试剂来源 一抗:小鼠抗大鼠β肌动蛋白单克隆抗体(美国Sigma公司),山羊抗大鼠磷酸化Smad 2/3多克隆抗体、兔抗大鼠Smad 3多克隆抗体(美国Santa Cruz公司);二抗:辣根过氧化物酶(HRP)标记的驴抗兔或山羊多克隆抗体(美国Santa Cruz公司),HRP标记的山羊抗小鼠多克隆抗体(美国Calbiochem公司).     

应激性溃疡大鼠胃黏膜中核因子κB信号通路的活化情况

目的观察核因子κB(NF-κB)信号通路在应激性溃疡大鼠胃黏膜中的活化情况。方法采用浸水-束缚应激的方法制作大鼠应激性溃疡模型。应激前(0min)及应激5-360 min过程中设不同时相点处死大鼠,共9组,每组5只。采用凝胶电泳迁移分析(EMSA)法检测大鼠胃黏膜NF-κB与DNA的结合活性,蛋白质印迹(Western blot)法检测胃黏膜核因子抑制蛋白(hoBs)降解水平,RNA印迹杂交(Northern blot)法检测胃黏膜NF-κB下游效应分子肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)1β、细胞因子诱导中性粒细胞化学趋化因子(CINC)1、细胞间黏附分子(ICAM)1和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达水平。结果应激处理15 min内可见大鼠胃黏膜NF-κB迅速呈双相模式活化,其峰值出现于应激45 min和360 min,分别为应激前正常水平的(10．6±1．3)倍和(8．9±1．2)倍(P<0.01);抗体supershift实验结果表明,活化的NF-κB主要为p50／p65异二聚体。NF-κB活化第1相和第2相分别伴有明显的IκBα和IκBβ降解。应激15-30 min时TNF-α、IL-1β、CINC-1和ICAM-1基因转录明显上调,iNOS基因上调发生在应激30-90 min时,应激360 min时这些基因表达仍持续增加。结论NF-κB信号通路活化发生于浸水-束缚应激大鼠应激早期的胃黏膜中,可能在胃黏膜促炎性基因的过度表达中发挥了重要作用。     

重组人表皮细胞生长因子对Ⅱ度烧伤创面愈合的促进作用

外用人表皮细胞生长因子是否能够促进Ⅱ度烧伤创面愈合，目前尚有争议。笔者通过随机双盲试验进一步临床观察重组人表皮细胞生长因子对烧伤创面愈合的促进作用。方法５６例患者被分为两部分，第１部分１９例浅Ⅱ度创面患者进行３种不同浓度ｒｈＥＧＦ的疗效比较，第２部分３７例患者在第１部分研究结果基础上选取最适用药浓度进行随机双盲研究所有病例采用自身对应创面对照。分别观察创面痊愈５０％，８０％愈合时间，以及伤后１０天     

严重烧伤大鼠精氨酸治疗的实验研究

为探讨精氨酸在严重烧伤治疗中的意义，采用大鼠３０％ＴＢＳＡⅢ度烧伤模型，观察并分析了严重烧伤大鼠外周血Ｔｈ／Ｔｓ比值的变化及精氨酸对该变化的调节作用和对大鼠存活率的影响。结果表明：①严重烧伤后第３天起即有Ｔｈ／Ｔｓ比值的下降，第１０天下降最为明显。②精氨酸能防止烧伤后Ｔｈ／Ｔｓ比值下降，这种作用在伤后第５天起就比较显著。③精氨酸能提高伤后动物的存活率。提示严重烧伤后补充精氨酸是增强机体免疫力和抗感染能力，提高存活率的有效的治疗手段。