高效液相色谱指纹图谱在驱虫斑鸠菊不同提取工艺对比研究中的应用

目的:驱虫斑鸠菊是治疗白癜风的常用药材,其化学成分复杂.文中建立并优化驱虫斑鸠菊高效液相色谱指纹图谱(HPLC-FP)的色谱条件,并在此基础上进行不同提取工艺的对比研究. 方法:通过保留时间及各共有峰的相对峰面积建立并优化分析驱虫斑鸠菊组分的高效液相色谱指纹图谱(HPLC-FP),进行不同提取工艺的对比研究. 结果:建立了驱虫斑鸠菊最优的HPLC-FP分离条件,得到19个指纹图谱共有峰,经对比得知驱虫斑鸠菊85%乙醇提取物与半仿生提取物的指纹图谱比较相似,而与驱虫斑鸠菊水提物指纹图谱差异较大,其中1、4、6、11、12、14、16～19峰为驱虫斑鸠菊85%乙醇提取物及驱虫斑鸠菊半仿生提取物的高效液相色谱指纹图谱特有峰,而20～30峰则为驱虫斑鸠菊水提取物的高效液相色谱指纹图谱特有峰. 结论:实验为驱虫斑鸠菊入血成分、制剂工艺及药效学研究提供实验依据.     

高良姜提取物促进黑素生成的谱效关系分析

目的 建立高良姜提取物指纹图谱,考察其对B16鼠黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素量的影响,并分析其谱效关系。方法 HPLC法建立高良姜醇提物（G1）、G1水沉物（G2）、G2大孔树脂纯化物（G3）、G3聚酰胺精制物（G4）指纹图谱;MTT法检测各提取物对B16细胞增殖的影响;比色法检测其对酪氨酸酶活性和黑素量的影响;灰关联度分析法研究其谱效关系。结果 与对照组相比,G1浓度为1.00～5.00 μmol/L、G2浓度为 0.50～5.00 μmol/L、G3浓度为0.25～5.00 μmol/L,G4浓度为0.25～10.00 μmol/L,能显著促进B16细胞增殖（P＜0.01）;G1、G2浓度为0.50 μmol/L,G3、G4浓度为0.50～1.00 μmol/L,能显著增强酪氨酸酶的活性（P＜0.05、0.01）;G1浓度为0.50、5.00 μmol/L,G2、G4浓度为0.50～5.00 μmol/L,G3浓度为0.25～5.00 μmol/L时,促黑素合成作用显著（P＜0.05）;在相同浓度下,G4促B16细胞增殖和增强酪氨酸酶活性的作用最强。谱效关系分析表明,与药效关联度最高的是高良姜素（7号峰）。G1、G2、G3、G4含高良姜素分别为27.61、88.72、348.53、693.35 mg/g,验证实验结果表明高良姜素在0.25～10.00 μmol/L均有显著的促B16细胞增殖、增强酪氨酸酶活性和促进黑素量升高的作用。结论 随着高良姜素量的增加,高良姜各提取物对B16细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素量的作用逐渐增强,表明高良姜素是高良姜治疗白癜风的有效物质之一。     

管花肉苁蓉提取物正丁醇残留量检测及去除工艺优选

目的:建立管花肉苁蓉提取物正丁醇残留量的检测方法,优选残留正丁醇的最佳去除工艺。方法:以正丁醇残留量为考察指标,运用气相色谱法测定正丁醇残留量,采用正交试验方法,优选最佳的残留正丁醇去除工艺。结果:正丁醇残留量检测方法平均回收率为100.5%,RSD值为1.83%。管花肉苁蓉提取物残留正丁醇最佳去除工艺为每次加水0.8倍,80℃旋转蒸发3次,测得正丁醇残留量符合《中华人民共和国药典》规定限量标准。结论:本正交设计试验所得的正丁醇残留量检测方法准确可靠,优选的正丁醇去除工艺简便、可行,为后续研究提供参考。     

白热斯丸质量标准研究

目的:建立白热斯丸质量控制的定性与定量方法。方法:采用薄层色谱法(TLC)对制剂中胡椒碱和槲皮素进行色谱鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)测定制剂中槲皮素和胡椒碱,色谱柱:Shimadzu VP-ODS(250 mm×4.6 mm,5μm);流速:1 mL·min~(-1);进样量:10μL;柱温:30℃。槲皮素以甲醇-0.2%磷酸溶液(56∶44)为流动相,检测波长:367 nm。胡椒碱以甲醇-水(77∶23)为流动相,检测波长:343 nm。结果:薄层色谱图中能清晰检出槲皮素与胡椒碱;槲皮素在6.25～200μg·mL~(-1)线性关系良好,胡椒碱在6.25～200μg·mL~(-1)线性关系良好(r分别为0.999 5、0.999 9);槲皮素与胡椒碱平均回收率分别为95.7%和104.8%。结论:本方法专属性强、快速、简便,可作为白热斯丸的质量控制。     

微量元素与白癜风关系的研究进展

白癜风是一种以后天性皮肤粘膜局限性或泛发性色素脱失斑为症状的常见疾病。对白癜风的病因及发病机制如今尚未阐述清楚,目前,大量临床表明某些微量元素的过量或缺乏与白癜风的发病直接或间接相关。基于大量文献对近年来白癜风与微量元素相关性研究作一综述。     

类叶升麻苷对冈田酸诱导的阿尔茨海默病细胞模型的保护作用研究

目的:研究类叶升麻苷(acteoside)对冈田酸(0A)诱导的SK-N-SH神经细胞损伤的影响.方法:以20 nmol·L-1的冈田酸处理SK-N-SH神经细胞,建立AD样细胞模型,并以5,10,20 mg·L-1的类叶升麻苷拮抗其作用.通过倒置显微镜观察细胞形态,采用MTT比色法检测细胞存活率,酶标法试剂盒测定LDH渗漏率,应用Western blot技术检测神经细胞磷酸化tau蛋白的表达情况.结果:类叶升麻苷可明显改善SK-N-SH的细胞形态,提高细胞的存活率,降低细胞LDH的漏出率,下调磷酸化tau蛋白在p-Ser 199/202,p-Ser 404位点的表达,上调非磷酸化tau蛋白在Ser 202,Ser 404位点的表达.结论:类叶升麻苷对冈田酸诱导的SK-N-SH神经细胞损伤具有明显保护作用.     

驱白巴布期胶囊对SD大鼠抑郁模型的作用研究

目的:探讨驱白巴布期胶囊对慢性应激导致的SD大鼠抑郁模型的作用。方法:通过旷场试验筛选合格SD大鼠60只,分为正常对照组、模型组、氟西汀组、驱白巴布期胶囊低、中、高剂量组,每组10只。正常对照组动物群养,正常饲养;造模动物孤养,接受不同的应激刺激3周。模型建立成功后,采用相应药物灌胃治疗9 d,采血,取血清,用ELISA试剂盒测4种神经肽的含量。结果:经过3周刺激后,与正常对照组相比,模型组大鼠的体质量及旷场试验动物活动次数明显降低,灌服药物后,中剂量组恢复效果较好。结论:中剂量组对精神刺激引起的大鼠抑郁有一定的调节作用,为驱白巴布期胶囊疗效的进一步研究做了铺垫作用。     

含驱白巴布期胶囊血清对人黑素瘤细胞A375增殖和迁移的影响

目的探讨驱白巴布期胶囊(QBC)对白癜风的治疗作用。方法大鼠ig给予QBC 0.54,2.7和5.4g·kg-1组,每天2次,连续3 d,末次给药2～3 h后腹主动脉采血,分离血清。用MTT比色法测定含QBZ血清体外对人黑素瘤A375细胞增殖的影响,酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,比色法测定黑素含量,Transwell微孔膜法观察A375细胞迁移;显微镜下观察划痕后A375细胞伤痕愈合的能力。结果与正常对照组比较,给予QBC0.54 g·kg-1大鼠的30%含药血清,2.7 g·kg-1的10%含药血清和5.4 g·kg-1的20%含药血清均能促进A375细胞增殖。QBC 0.54 g·kg-1组的5%含药血清及QBC 5.4 g·kg-1组的5%,10%和20%含药血清均有促进酪氨酸酶活性的作用。QBC 2.7和5.4 g·kg-1组的20%含药血清具有显著促黑素含量增加的作用(P<0.01),且QBC5.4 g·kg-1含药血清促黑素含量增加的能力明显高于QBC 0.54和2.7 g·kg-1(P<0.05)。QBC 0.54,2.7和5.4 g·kg-1的20%含药血清均能显著提高A375细胞的迁移能力,且QBC 5.4 g·kg-1组促A375细胞迁移的能力明显高于QBC 0.54和2.7 g·kg-1组。划痕实验结果表明,QBC 0.54,2.7和5.4 g·kg-1组的含药血清均能明显促进A375细胞伤痕愈合,QBC 5.4 g·kg-1组促伤口愈合能力明显高于QBC 0.54和2.7 g·kg-1。结论 QBC可促进黑素细胞增殖,提高酪氨酸酶活性,促进黑素细胞迁移,对白癜风可能具有一定的治疗作用。     

不同纯度高良姜素的药代动力学比较研究

目的研究不同纯度高良姜素(galangin,GL)在大鼠体内的药代动力学。方法取健康SD大鼠(240～300)g随机分组,每组6只,单次口服给药后尾静脉分时采血、处理。采用反相高效液相色谱法,以外标法测定GL在大鼠血浆中的浓度,应用DAS2.0软件计算主要药代动力学参数。结果在所建立的方法学下,GL在0.05～1.8 mg.L-1的血浆浓度范围内呈良好的线性关系,最低检测限为0.03 mg.L-1(S/N=3),在0.24、0.47、0.94 mg.L-1 3个浓度下的绝对回收率为75.5%～86.9%,相对回收率为85.8%～91.2%,日内和日间RSD均小于5.0%(n=5)。按100 mg.kg-1单次口服给药后,GL在大鼠体内的药代动力学过程均符合二室模型,主要药代动力学参数T12α、T12β、Ka、AUC、Cl/F、V1/F,90%GL分别为19.415 min、33.983 min、0.059 min-1、101.722 mg.min.L-1、0.983 L.min-1.kg-1、5.073 L.kg-1;99%GL分别为24.398 min、31.719 min、0.048 min-1、55.201 mg.min.L-1、1.812 L.min-1.kg-1、6.861 L.kg-1。结论所建立的方法简便、准确、快速,能够满足GL的药代动力学要求。GL纯度为99%时较90%吸收缓慢,消除快。     

驱虫斑鸠菊提取物指纹图谱与其对人A375黑素瘤细胞增殖作用的灰关联度分析

目的:建立驱虫斑鸠菊不同乙醇浓度提取物指纹图谱,考察各醇提物共有峰成分对人A375黑素瘤细胞增殖作用的影响;探讨驱虫斑鸠菊醇提物指纹图谱与药效的相关性,为建立驱虫斑鸠菊谱效结合的中药质量控制模式提供理论依据和数据支持。方法:采用HPLC建立驱虫斑鸠菊不同乙醇浓度提取物指纹图谱,并对其进行相似度评价;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法研究人A375黑素瘤细胞增殖作用;用灰关联度分析法研究"谱效关系"。结果:驱虫斑鸠菊醇提物指纹图谱有13个共有峰,其对人A375黑素瘤细胞有增殖作用,其中4号峰对其增殖作用贡献最大,灰关联度最高。结论:驱虫斑鸠菊不同乙醇浓度提取物的指纹图谱存在一定差异,指纹图谱共有峰与其对细胞增殖的作用之间有一定的关联性。