肝胆肿瘤组织中DNA依赖蛋白激酶的表达及意义

目的 通过检测不同类型肝胆肿瘤组织中DNA依赖蛋白激酶(DNA dependent protein kinase，DNA-PK)及调节亚基Ku70的表达水下，探讨其与肿瘤恶性程度和侵袭性的关系。方法 用免疫组化法险测47例肝胆肿瘤组织和部分癌旁组织中催化、IE基DNA-PKcs和Ku70蛋白的表达情况。结果 Ku70广乏表达于所检测的肿瘤组织中，其中腺癌和部分腺瘤表达量最高，但在不同恶性程度和侵袭性的肿瘤组织辛的表达差异无显著性。而DNAPKCS表达在不同类型肿瘤问存在明显差异，肝细胞癌阳性表达率为92．1％，显著高于胆管腺癌(65．3％)和胆囊腺癌(51．9％)(χ^2值分别为8．95、l2．42，P值分别为0．016和0．0l3)，乳头状腺瘤或胆管腺瘤不表达或弱表达。侵袭性腺瘤(癌)组织表达水平为61．2％，显著高于非侵袭性腺瘤(癌)(30．4％)(χ^2=16．23，P=0．004)。癌旁组织相对低表达DNAPKCS。结论 DNA-PKcs表达水平与肿瘤类型、恶性程度、转移或侵袭性有关，有可能成为肝胆肿瘤的一个新的生物标记物。     

肝癌组织DNA-PKcs过量表达及其靶向siRNA分子的抗增殖作用

目的:研究肝癌组织中DNA依赖蛋白激酶催化亚基DNA-PKcs的表达差异及其生物学意义.方法:用组织芯片和免疫组化法检测肝胆癌组织86例,肝胆管结石切除肝组织17例标本和正常肝组织70例中DNA-PKcs蛋白表达情况,Western blot检测培养细胞中DNA-PKcs表达,Lipofectamine 2000介导DNA-PKcs的siRNA质粒DNA转染,细胞生长曲线分析细胞增殖,克隆形成法分析细胞辐射敏感性.结果:组织芯片检测显示,60例肝癌组织细胞中DNA-PKcs阳性表达率<25%(极低表达),25%-50%(低表达),51%-75%(中等表达)和>75%(高表达)分别占15%,20%,23.3%和41.7%,而64例正常肝组织中各DNA-PKcs阳性表达率分别为68.7%,10.9%,12.6%和7.8%,表明癌组织DNA-PKcs的表达水平显著高于正常组织(P=0.0008).26例肝癌组织病理切片的免疫组化结果也显示,其DNA-PKcs表达水平显著高于23例非肿瘤性肝组织(P= 0.001).Western blot检测结果显示,体外培养的肝癌细胞HepG2,7721和7402中DNA-PKcs表达水平,同样显著高于正常肝细胞LO2.siRNA分子靶向抑制DNA-PKcs表达,不但显著提高HepG2细胞对电离辐射的敏感性,同时还降低肝癌细胞的增殖速度.随着DNA-PKcs表达的抑制,癌基因c-Myc蛋白表达水平也显著降低.结论:肝癌组织细胞中DNA-PKcs表达水平显著高于正常肝组织和非肿瘤性肝病理组织,siRNA抑制DNA-PKcs表达,具有抗癌细胞增殖和放射增敏作用,c-Myc蛋白表达抑制可能是其抗增殖作用的相关机制之一.     

自建非克隆cDNA文库从 EST片段快速克隆全长cDNA

随着国内基因组计划的开展和差异显示技术的广泛应用，产生了大量的ＥＳＴ片段，如何简便、有效地获得其全长ｃＤＮＡ，进行下一步的基因功能研究，已成为新基因研究的瓶颈问题。从已知ＥＳＴ片段获取其全长ｃＤＮＡ，目前国内外常见的方法有ｃＤＮＡ文库筛选，ＲＡＣＥＰＣＲ，电子克隆等等。ｃＤＮＡ文库筛选是比较经典的方法，但它要求有质量较好的ｃＤＮＡ文库，而多数来源于差异显示技术的ＥＳＴ片段，只在经特殊处理（如辐射）诱导后的细胞中表达，因此不能使用常规的ｃＤＮＡ文库进行筛选，而自建ｃＤＮＡ文库不仅费时，且质量难以保…     

α粒子诱发癌变细胞的纺锤体损伤凋亡机理研究

目的　从纺锤体损伤诱导的凋亡反应 ,探讨α粒子诱发癌变细胞的遗传不稳定性机理。方法　用噻氨酯哒唑破坏纺锤体微管蛋白诱发细胞凋亡 ,Giemsa染色以及 3种荧光染料 (FDA、Hoechster 332 5 8和PI )复合染色检测凋亡 ;松胞素B阻止细胞分裂 ,分析凋亡与细胞周期时相的关系。结果　 0 3μg ml噻氨酯哒唑作用 6～ 4 8h ,癌变细胞BERP35T1和BERP35T4的凋亡发生率要显著低于正常BEP2D细胞 2～ 2 5倍 (P <0 0 1) ,而且正常细胞的凋亡主要是发生在细胞有丝分裂前 ,癌变细胞特别是BERP35T4细胞 ,有近 5 0 %的凋亡是发生在有丝分裂之后。结论　纺锤体损伤后凋亡机理异常 ,将导致非整倍体或多倍体的子代细胞增多 ,加剧α粒子照射细胞的遗传不稳定性。     

一种快速简便分离同位素标记DNA探针的方法

一种快速简便分离同位素标记ＤＮＡ探针的方法隋建丽周平坤侯建毅＊军事医学科学院放射医学研究所北京１００８５０核酸杂交是一项应用广泛的分子生物学研究技术，制备和分离同位素标记探针是其中一个重要步骤。以往是通过一个ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０柱将标记ＤＮＡ探针与...     

质粒DNA α粒子损伤的原子力显微镜观察

目的：利用原子力显微镜(AFM)直接观察技术,检测α粒子辐射对质粒DNA的损伤。方法：照射质粒DNA吸附于云母表面,用AFM观察DNA的分子结构;用琼脂糖凝胶电泳检测开环和超螺旋结构的质粒DNA相对含量变化。结果：AFM下清晰观察到开环、线性和超螺旋结构的质粒DNA分子。在2Gy α粒子照射下,开环质粒DNA的比例就明显增多,并随照射剂量的增加而上升。相比之下,γ射线需要更大剂量照射才能产生同等的损伤效应。结论：本文获得了AFM下辐射所致DNA损伤的直观图像,体外照射下α粒子对DNA的损伤大于γ射线。     

表皮生长因子受体反义重组腺病毒联合放射线对乳腺癌细胞的作用

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)反义重组腺病毒联合放射线对乳腺癌细胞的作用。方法人EGFR的cDNA片段被反向亚克隆入E1／E3缺失的5型腺病毒载体中而得到AdE5，EGFR反义RNA的表达由CMV启动子控制。进而研究其联合γ射线对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231成克隆能力及细胞周期分布的影响。结果MDA-MB-231细胞被AdE5感染后，EGFR蛋白质的表达被强烈地抑制。AdE5感染后以γ射线照射细胞，成克隆能力被抑制。且这种作用与病毒量和照射剂量相关联。进而流式细胞仪分析显示，300pfu／细胞的AdE5感染可使MDA-MB-231细胞摆脱对放射线抗拒的G0 G1期，进入对放射线敏感的G2 M期，从而使AdE5联合放射线表现为协同效应。结论以腺病毒载体介导的EGFR反义RNA转导可有效地用于针对EGFR的反义治疗策略，提高放射线对乳腺癌细胞杀灭作用。     

α—粒子诱发BEP2D2细胞癌变系的DNA断裂重接修复缺陷与XRCCs修复基因mRNA表达研究

目的 研究α粒子诱发人支气管上皮细胞（BEP2D）癌变细胞系BERP35T－1和BERP35T－4的DNA断裂损伤修复能力，分析其DNA断裂修复基因XRCCs系列的mRNA表达。方法 脉冲电场凝胶电泳法检测DNA双链断裂，RT－PCR分析DNA修复基因的mRNA表达。结果 恶笥转化细胞系BERP35T－1和BERP35T－4受0－150Gy γ射线照射后修复4h的DNA断裂残留损伤显著高于亲本BEP2D细胞，mRNA表达分析显示修复基因XRCC2，XRCC3和Ku80(XRCC5)表达下调2.5-6.5倍，而BERP355－R细胞中DNA－PKcs(XRCC7)表达上调2．4倍。结论 α粒子诱发恶性转化细胞系的DNA链断裂修复机理缺陷，其中部分原因是DNA修复基因的表达抑制。DNA修复缺陷将导致细胞基因组不稳定性，α粒子诱发细胞恶性转化机理可能与此相关。     

仙人掌治疗牛皮癣确有良效

近年来,笔者采用《浙江中医杂志》于1997年11月号上刊出的文章中所介绍的用仙人掌治疗牛皮癣的方法,治疗该病5例,均取得满意的效果。其法:将仙人掌去刺,切成小块,微火焙黄,研末,再用凡士林调成糊状,然后先用温水清洗患处,涂以药膏。每日上、下午各1次。轻者仅治疗3～5日即痊愈,重者则半个月亦获良效,该方既经济又简便,患者乐于接受,值得进一步研究、应用。仙人掌治疗牛皮癣确有良效!264500$山东省乳山市中医院@于洪玉@隋建丽!264500$山东省乳山市中医院     

α粒子诱发BEP2D细胞癌变株中多种基因启动子的异常甲基化

目的：研究α-粒子诱发人支气管上皮细胞癌变株中p14^ARF，p16^INK4a，MGMT，GSTP1，BUB3和DAPK基因的甲基化情况。方法：用甲基特异性的PCR(MSP)分析基因启动子区CpG岛的甲基化情况和用RT-PCR检测细胞的基因转录水平。结果：p14^ARF基因在BEP2D细胞中没有甲基化，但在其癌变细胞BERP35T1中发生了甲基化，且甲基化导致p14^ARF基因的转录水平显著下降。p16^INK4a和BUB3在两种细胞中均没有发生甲基化，BUB3经测序证实；MGMT在BEP2D细胞和癌变细胞中均发生甲基化；DAPK在BEP2D细胞中已有部分甲基化，在BERP35T1细胞中完全甲基化；GSTP1在BEP2D细胞中没有甲基化，在BERP35T1细胞中发生部分甲基化。结论：在辐射诱发人支气管上皮细胞恶性转化中，部分与细胞增殖、DNA修复和细胞凋亡相关的功能基因发生了甲基化。