急性疼痛应激对SD大鼠胃及颌下腺中annexin 5 mRNA表达的影响

目的:研究在甲醛(formaIin)致炎的急性疼痛应激状态下SD大鼠胃及颌下腺中annexin 5mRNA表达水平的变化.方法:单侧后足底皮下注射0.2 mL,甲醛溶液(50 g/L),建立SD大鼠的急性疼痛应激模型,对照组注射等量的生理盐水.实验组与其相应的对照组大鼠分别在注射后1、6、24和72 h用氯胺酮(50 mg/kg)麻醉处死.通过荧光定量PCR分析急性疼痛应激对大鼠胃及颌下腺中anncxin 5 mRNA表达水平的影响.结果:荧光定量PCR结果表明,在甲醛注射后1h胃anncxin 5 mRNA水平与对照组相比显著升高(7.43±2.67 VS 1.00±0.00,P<0.01),至6 h恢复到正常水平(P>0.05);注射后1 h,颌下腺中anncxin 5 mRNA水平也显著升高(4.33±1.50 vs 1.00±0.00,P<0.01),并持续到24 h,至72 h恢复到正常水平.结论:annexin 5可能是消化系统应激反应蛋白,急性疼痛可能通过annexin 5影响胃及颌下腺的功能.     

基于高内涵技术的20种中药提取物对β淀粉样蛋白致SH-SY5Y细胞损伤保护作用研究

目的应用高内涵(HCS)技术快速筛选对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)致SH-SY5Y细胞损伤模型有保护作用的中药提取物。方法选取20种中药饮片,每种药材分别进行20%、40%和95%乙醇提取,以Aβ25-35损伤的SH-SY5Y细胞为模型,采用Hoechst33342和PI双染,并利用HCS技术观察60个提取物对模型细胞的保护作用;在此基础上进一步观察活性提取物对模型细胞Caspase-3/7活性的影响,快速筛选对阿尔茨海默病(AD)有潜在治疗作用的中药提取物。结果 HCS筛选发现,在60个提取物中,有17个提取物对模型细胞具有较好的保护作用;进一步研究显示,其中有8个提取物对模型细胞Caspase-3/7活性有较好的抑制作用。并且以刘寄奴40%乙醇部位及丹参20%、40%乙醇部位效果最优。结论以荧光标记为基础的HCS技术是有效、快速筛选对Aβ25-35致SH-SY5Y细胞损伤模型有保护作用中药提取物的分析方法,筛选出的中药提取物具有潜在的抗AD活性。     

光照应激对SD大鼠小肠促性腺激素释放激素受体表达的影响

目的:机体遭受各种创伤应激后,常出现各种胃肠道症状,并且已有研究表明大鼠的消化系统广泛分布有促性腺激素释放激素(GnRH)受体免疫反应阳性细胞.文中观察光照应激状态下SD大鼠小肠黏膜GnRH受体的分布和表达变化. 方法:建立SD大鼠光照应激模型,24h持续光照,分为短期光照应激(2、3、4、7 d)和长期光照应激(14、21、28d),分别取应激组和相应对照组的小肠组织,采用免疫组化和Western blot技术分析GnRH受体在各时间段大鼠小肠组织中的分布和表达变化. 结果:Western blot结果显示:与对照组相比,持续光照2、3、4、7d后,实验组大鼠小肠GnRH受体表达无明显变化;持续光照14d和21 d后,实验组大鼠小肠GnRH受体的相对表达量分别约升高了56.5%和59.9%,具有显著性差异(P<0.05);持续光照28 d后,实验组大鼠小肠GnRH受体的相对表达量约升高了27.8%.但无显著性差异(P>0.05).免疫组织化学显示,GnRH受体在大鼠小肠中的分布未见明显改变,但长期应激后期实验组(14、21、28 d)GnRH受体免疫组化显色较深,说明GnRH受体表达升高,这与Western blot的结果基本一致. 结论:GnRH受体随着光照应激时间的延长,在大鼠小肠中表达量发生改变.提示在光照应激中,GnRH对消化功能具有潜在的生理调节功能.     

促性腺激素释放激素拮抗剂对In-R1-G9细胞表达胰高血糖素的影响

目的:促性腺激素释放激素拈抗剂(GnRHant)能降低小鼠糖尿病的发生率,文中在细胞水平研究GnRHant对In-R1-C9细胞内胰高血糖素(glucagon)表达的调控作用. 方法:分别用终浓度为0.1、10、1000 nmol/L的GnRHant处理培养的In-R1-G9细胞2 h(对照组用什露醇处理),通过Western blot和荧光定量PCR技术观察胰高血糖素在蛋白水平及转录水平的变化. 结果:与对照组相比,低浓度的GnRHant(0.1 nmol/L)使胰高血糖素在蛋白水平和转录水平的表达均有所降低,但是无统计学意义(P>0.05);而高浓度的GnRHant(10 nmol/L、1000 nmol/L)能明显地降低胰高血糖素的表达(P<0.05). 结论:一定浓度的GnRHant能降低In-R1-C9细胞内胰高血糖素的表达.     

大鼠睾丸间质细胞中促性腺激素释放激素激动剂调控睾酮合成的机制

目的:研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的调控机制?方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞,GnRHa (10-7 mol/L)分别处理间质细胞6?12?24?36?48 h后,Western blot方法分析3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)蛋白的变化;MEK1/2抑制剂PD98059 (50 μmol/L) 和GnRHa共作用于间质细胞后,分析3β-HSD蛋白表达和睾酮水平的变化?结果:GnRHa处理间质细胞不同时间后,结果显示3β-HSD蛋白的表达对GnRHa的刺激具有时间依赖性?GnRHa处理12 h后,3β-HSD蛋白表达与对照组相比显著上升45% (P < 0.05),24 h达到最高水平,升高1.0倍(P < 0.05);48 h后3β-HSD恢复至正常水平?加入PD98059后,显著抑制了GnRHa对3β-HSD的刺激作用,3β-HSD水平下降了61% (与GnRHa组相比,P < 0.05),睾酮水平也随之显著下降45% (与GnRHa组相比,P < 0.05)?结论:GnRHa可能通过细胞外信号调节激酶(ERK1/2)途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD的表达,进而促进睾酮的合成?     

银杏二萜内酯K抗血小板聚集及神经保护作用研究

观察不同浓度的银杏二萜内酯K(GK)对血小板活化因子(PAF)诱导血小板聚集的拮抗作用及对缺血再灌注损伤细胞和动物模型的神经保护作用。制备GK家兔含药血清,用血小板聚集功能测定法观察GK含药血清对PAF诱导的家兔血小板聚集的影响。建立缺糖缺氧复氧(OGD/R)细胞模型,采用Hoechst/PI双染考察不同浓度的GK对OGD/R损伤的SHSY5 Y细胞凋亡的影响;建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(I/R),检测GK对神经行为评分及脑梗死体积的影响。GK能剂量依赖性的抑制PAF诱导的血小板聚集,逆转OGD/R损伤造成的细胞凋亡并改善大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经行为评分及脑组织梗死体积。GK能抑制PAF诱导的血小板聚集、改善脑缺血再灌注神经损伤。     

Annexin 5对雄性SD大鼠应激损伤的保护作用

摘要：目的：研究膜联蛋白5（annexin 5,A5）对坐骨神经选择性损伤引起的慢性疼痛应激致雄性SD大鼠生殖损伤的保护作用。 方法：32只雄性SD大鼠随机分为4组,分别建立对照组、假手术组、手术组和手术＋A5组模型。手术＋A5组于术后第2天腹腔注射15 μg/kg 剂量的A5,其他实验组腹腔注射等量的pH 8.0 Tris-HCl,每日1次,连续21 d。分别测各组SD大鼠体重、称重睾丸和附睾,计算其脏器系数,并对附睾尾进行精子计数。HE染色观察睾丸组织结构变化。用化学发光法检测各组大鼠血清中睾酮浓度。 结果：手术组大鼠与对照组相比,睾丸系数、附睾系数以及精子相对计数均降低（P<0.05）;睾酮水平下降显著［（5.10±2.61） vs （22.40±4.30） mmol/L,P<0.01)］;病理切片见睾丸生精细胞与腔内精子数量明显减少。假手术组大鼠与对照组比,上述指标均无统计学差异。手术＋A5组与手术组比,精子相对计数与睾酮含量［（19.67±2.02） vs （5.10±2.61） mmol/L,P<0.01］均显著提高,其他参数均有不同程度的恢复,睾丸生精细胞与腔内精子数量减少程度显著恢复。 结论：A5对慢性疼痛应激引起的生殖损伤具有一定的保护作用。     

大鼠膜联蛋白5的重组表达及其对人精子体外运动功能的影响

目的:先前研究发现促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白5(annex-in5)的翻译和转录水平都有一定的影响,推测annexin5可能是睾酮分泌调节中的一个信号分子。为研究annexin5在雄性生殖调节中的作用,本研究拟获得具有活性的大鼠annexin5重组蛋白,并观察其对人精子运动功能的影响。方法:化学合成法合成大鼠annexin5的编码基因序列,将该基因插入组氨酸标签(HIS)融合表达载体pET28a中,在T7启动子控制下,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达HIS融合蛋白;以亲和层析法纯化表达融合蛋白并用活化部分凝血激酶时间(APTT)交叉试验法验证该蛋白的抗凝血活性。15例供精者的精液标本一式2份,1份加重组蛋白annexin5(终浓度为10-8mol/L),1份做对照,分别处理20和60min,用计算机辅助精液分析系统(CASA)分析精子活力、活动率;处理20min后,做精子爬高试验。结果:合成的目的基因产物长度为974bp,插入序列与annexin5的序列完全一致。在IPTG诱导下,BL21(DE3)重组菌高效表达出相对分子质量为36000的融合蛋白,经纯化获得95%纯度的融合蛋白,纯化蛋白具有很强的抗凝血活性。Annexin5处理20min后精子活动率提高了21%(P<0.05),活力提高了40%(P<0.01),而处理60min后精子活力、活动率与对照组比较均无显著性差异;精子爬高高度与对照组比较具有极显著差异[(37.84±6.35)mmvs(49.5±12.27)mm,P<0.01]。结论:成功构建了大鼠annexin5重组表达载体并在大肠埃希菌中高效表达annexin5蛋白,且该蛋白体外处理精子20min时提高精子的运动能力。     

GnRH类似物对大鼠睾丸间质细胞MAPK的影响

目的:研究大鼠睾丸间质细胞中GnRH激动剂(GnRHa)和拮抗剂(GnRHant)对促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞24h后,血清饥饿2h。GnRHa(10-7mol/L)或Gn-RHant(10-6mol/L)处理大鼠睾丸间质细胞不同时间(0、5、15、30、60、90min)后,Western印迹检测磷酸化ERK(p-ERK)和磷酸化p38(p-p38)蛋白水平以0min组为对照。此外,不同终浓度(1、5、10、20μmol/L)的PKC抑制剂GF109203X和GnRHa或GnRHant共同作用后,Western印迹检测p-ERK蛋白水平。结果:GnRHa或GnRHant刺激间质细胞不同时间后,p-p38蛋白水平与对照组比较均无显著性差异(P>0.05);加入不同终浓度的PKC抑制剂GF109203X处理细胞20min后,再用GnRHa刺激细胞10min,发现GF109203X在终浓度为10μmol/L和20μmol/L时p-ERK水平显著下降(P<0.05)。GnRHant刺激间质细胞后,p-ERK水平在15min时升高了约65%(P<0.05);30min时升高了约81%,达到最高水平(P<0.05);60min时开始下降,90min时恢复到基础水平。不同浓度GF109203X处理细胞20min后,再用GnRHant刺激细胞30min,p-ERK水平与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:GnRHa可能通过PKC途径来诱导ERKMAPK信号通路的活化,而GnRHant对ERKMAPK信号通路的激活作用并非通过PKC途径来实现的;p38可能不参与间质细胞中GnRH类似物作用的MAPK分子信号通路。     

39个中药材提取物对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用筛选研究

以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,建立茁淀粉样蛋白（Aβ_{25-35）诱导细胞损伤的阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）体外细胞筛选模型,并将其应用于筛选39个中药材提取物中的抗神经细胞损伤活性组分。方法：采用CCK-8法进行活性初筛,CCK-8法和Hoechst33342/PI双染色分析法复筛活性组分。结果：初筛和复筛结果一致表明,39个药材提取物中黄柏40%乙醇部位（HB40）和95%乙醇部位（HB95）有较好的抗Aβ损伤活性。结论：提示黄柏有潜在的治疗抗阿尔茨海默病的药用价值。}