丙型肝炎病毒的分子生物学

1974年Prince首先指出:大部分具长潜伏期的输血后肝炎与乙型肝炎无关,对输血后肝炎的控制需要首先弄清另一种肝炎病毒。许多研究者试图检测这种病毒及其抗原,仅Bradley领导的实验室就做了4万次以上的血清学分析,均归失败。直至1989年,美国Choo等从受感染的黑猩猩血液标本中,     

HCV E2／NS1基因的PCR检测克隆与序列分析

本文报道了利用ＰＣＲ技术检测了３４例丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因的ｃＤＮＡ并与５非编码区基因的ｃＤＮＡ检测技术进行了比较，应用ｐＵＣ１８质粒对此扩增片段进行了克隆与序列分析，结果表明克隆片段ＨＣＶ－Ｓ１为我国主要流行的ＨＣＶ基因亚型－ＩＩ型，其与ＨＣＶ－ＩＩ型的核苷酸与氨基酸的同源性均在９０％以上，序列分析表明该片段富含脯氨酸和胱氨酸，可能具有复杂的空间构型，且与４个糖基化位点一样保持稳定，另外，     

234例肝病患者血清转氨酶的研究

自从1954年 La Du 等氏报告急性心肌栓死患者血清的转氨酶活力有明显的增高后,临床上继又发现急性肝炎亦有同样的现象,并一致认为测定此酶对上述疾病有特殊的诊断价值。近年来由于临床应用日益广泛,因而又相继发现血清转氨酶在其他肝病,类如慢性肝炎、肝硬变、原发或继发性肝癌,急性     

DNA分子杂交检测血清中HBV DNA

目前,国内外对乙型肝炎临床研究已进入病毒分子生物学水平。开展这方面的研究,需要建立敏感的病毒DNA分子研究方法,用同位素标记HBVDNA制备探针,实行DNA分子杂交(以下简称斑试),检测血清中HBVDNA是一项灵敏指标。为将大量检测血清斑试及早应用于临床观察抗病毒治疗效果,我们进行了这方面的研究,现将杂交方法及应用结果报告如下。     

丙型肝炎研究进展(续)

<正> 丙型肝炎流行病学与预防丙型肝炎呈世界性分布。美国和欧洲正常献血者抗-HCV 阳性率为0.25～1.2％;长畸以供血者血液抗-HCV 阳性为基础,参考各年份人口构成,推算抗-HCV 阳性率为1.41％,并发现与年龄相关,年龄越大阳性率越高。某医院546名医务人员,抗-HCV 阳性者10例,占1.8％;与血库供血者抗-HCV 阳性率相比,两     

酶免疫法检测丙型肝炎病毒RNA的聚合酶链反应产物

目的建立一灵敏、快速的检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ逆转录－套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物的酶免疫法。方法对第２次ＰＣＲ所用的引物进行双标记，使扩增产物同时被修饰有生物素和荧光素（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）成分，再经过固相的链亲合素进行捕获、辣根过氧化物酶标记的抗－ｆｌｕｏｒｅｓ－ｃｅｉｎ反应后显色测定。结果所建立的方法与常规聚丙烯酰胺凝胶电泳法相比灵敏、快速、准确，结果判断客观，重复性也较好；所测结果可反映ＰＣＲ产物量的多少，但不能准确表示模板量的大小。结论建立的方法可取代电泳法而成为ＨＣＶＲＮＡ常规ＰＣＲ反应产物的检测技术。     

TT病毒核酸的检测

目的初步测定献血员、慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎及慢性非甲～戊型，非庚型肝炎患者中ＴＴ病毒的感染情况，分析不同ＴＴ病毒感染者血清中ＴＴ病毒开放读码框架２区部分基因序列。方法以套式聚合酶链反应测定ＴＴ病毒核酸，取献血员（ＴＸ２）、慢性乙型肝炎（ＴＸ３）、慢性丙型肝炎（ＴＸ４）及慢性非甲～戊型，非庚型肝炎患者（ＴＸ１）各１例ＴＴ病毒ＰＣＲ阳性产物，以双脱氧核苷酸链终止法测定核苷酸序列。结果检测２０例献血员、２９例慢性乙型肝炎、３１例慢性丙型肝炎及３２份慢性非甲～戊型，非庚型肝炎标本，ＴＴ病毒核酸阳性者分别占５．０％（１／２０）、６．９％（２／２９）、２９．０％（９／３１）和３４．４％（１１／３２）。与Ｎ２２克隆相比，ＴＸ１、ＴＸ２、ＴＸ３与ＴＸ４在核苷酸水平的同源性分别为９５．４１％、９８．４７％、９７．４５％和９７．９６％。结论本组献血员、慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎及慢性非甲～戊型，非庚型肝炎患者中均存在ＴＴ病毒感染者。从本组不同ＴＴ病毒感染者血清中分离出４株ＴＴ病毒序列，其开放读码框架２区部分基因序列高度保守     

丙型肝炎病毒NS3区优势表位基因的克隆和高效表达研究

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的Ｃ３３ｃ基因编码蛋白是ＨＣＶ抗体检测中所需的重要抗原。应用打点杂交法得到了来源于３例病人的８个Ｃ３３ｃ的克隆，并从中挑选出能在大肠杆菌中高效表达的克隆─—ｐＫＨ２６。该重组质粒中的插入片段与ＨＣＶ－Ｊ的核苷酸同源性为９２．６％，所编码氨基酸的同源性为９５．９％，属于中国主要的ＨＣＶ流行株，它可通过温度变化这种简单、方便、经济的方式进行诱导表达，得到以天然蛋白形式存在的具有良好免疫学活性的表达产物，表达蛋白产量可占整个细菌蛋白的１５％以上。由于不含有融合蛋白，用于抗－Ｃ３３ｃ的检测特异性高，是建立诊断ＨＣＶ感染方法的良好原材料。     

丙型肝炎病毒NS5b区与5'-非编码区不同基因区RNA检测结果的比较

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５ｂ区与５’－非编码区（５’－ＮＣＲ）不同基因区ＲＮＡ检测结果的区别及临床应用价值。利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测１４８例肝炎患者血清ＨＣＶ ＮＳ ５ｂ基因的ｃＤＮＡ,并与５’－ＮＣＲ基因区ｃＤＮＡ检测技术进行了比较。结果 ＨＣＶ ＮＳ ５ｂ基因区ＲＮＡ检出率为２４．３％（３４／１４８）,５’－ＮＣＲ基因区ＲＮＡ检出率为３１．１％（４７／１４８）。Ｈ     

乙肝病毒X基因与肝癌

目前公认肝癌（ＨＣＣ）的发病是多因素协同作用的结果,其中乙肝病毒（ＨＢＶ）感染是ＨＣＣ的主要病因之一．流行病学调查表明ＨＢＶ感染者ＨＣＣ的发病率较对照人群高出２００倍以上．虽然ＨＢＶ的确切致癌机制尚未完全阐明,但随着分子病毒学的研究进展,人们对ＨＢＶＸ基因及其产物Ｘ蛋白（ｐＸ）与ＨＣＣ之间的关系已有了多方面及多层次的了解,积累了大量研究资料．ＨＢＶ基因组是一不全双链的环状ＤＮＡ分子,其长链含有４个开放读码框架（ＯＲＦ）,分别为编码前Ｓ１蛋白,前Ｓ２蛋白及Ｓ蛋白的Ｓ基因,编码前Ｃ蛋白与Ｃ蛋白的Ｃ基…