丙型肝炎病毒核心区抗体分型方法的研究

用丙型肝炎病毒核心区２个型特异性俣成肽作为包被抗原，建立了ＥＬＩＳＡ法，对血清中抗－ＨＣＶ进行分型。在１２１份抗－ＨＣＶ阳性血清中检出ＣＰ９阳性率为８３．４７％，在１０１份ＣＰ９阳性血清中进行核心区抗体分型，其中血清１型１７．８２％，血清２型２５．７４％、１．２混合型７．９２％。     

乙肝病毒 X基因真核表达载体的构建及表达

目的：探讨HBVX基因在肝癌发生中的作用,并构建含X基因真核表达质粒。方法：用PCR法扩增含EcoRI与P stI 酶切位点的X基因序列,对PAS2－1载体及X基因PCR产物经双酶切,用连接酶将两者连接并转化到大肠杆菌JM105,对得组质粒经序列测定,称PAS2－1X。用乙酸锂转化法将重组质粒转化入酵母菌AH109,经Western blot法证实重组质粒在酵母细胞中的表达。结果：已构建的质粒AS2-1X经序列测定含有完整的 X 基因片段,转入酵母后经Western blot证实酵母细胞表达X蛋白。结论：PSA2－1X表达载体是为了解X基因与X蛋白的致癌机制而构,为通过酵母双杂交体系筛选体内与X蛋白相互作用 的X相关蛋白奠定了基础。     

病毒性肝炎诊断指标的选用

病毒性肝炎诊断指标的选用陶其敏现代分子生物学技术的迅猛发展及其广泛应用，使人们对各型肝炎病毒的认识进入了一个更加深入的阶段，而且为病毒性肝炎的实验室诊断开辟了一个广阔的空间。分子生物学技术应用于病毒感染指标的检测上，使得直接检测病毒核酸成为可能。特别...     

丙型肝炎病毒5''-非编码区RNA检测及酶切基因分型

我们应用逆转录套式聚合酶链反应 (ＲＴ -ｎｅｓｔｅｄ-ＰＣＲ)对河南地区 90例抗 -ＨＣＶ阳性献血员血清及北京地区 2 6 9例各型肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ检测 ,并对 5’ -非编码区 (5’ -ＮＣＲ)ＰＣＲ阳性扩增产物用酶切法进行ＨＣＶ基因分型 ,现将结果报告如下。1　材料和方法　 (1)材料 :ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ试剂盒由北京大学人民医院肝病研究所提供 (批号 980 813) ;逆转录酶为Ｐｒｏｍｅｇａ公司产品 ;Ｔａｑ -Ｐ及限制性内切酶ＨａｅⅢ 16ＩＵ·μＬ- 均为ＳＡＢＣ产品 ;Ⅱ、Ⅲ型对照血清经日本自治医科大学检测确定。 90例抗 -…     

固相放射免疫法检测血清中HBcAg

乙型肝炎的完整病毒(HBV)是Dane颗粒,早在1970年已被Dane证实。被HBV感染后的患者血清内存在这种Dane颗粒,用去垢剂Tween 80处理,可使Dane颗粒裂解为内核和外壳两部分。其外壳即表面抗原(HBsAg),是由蛋白质、脂质和碳水化合物组成,人体被感染后肝细胞浆内可大量复制HBsAg,机体即可产生相应的抗体,即抗-HBs,国内外对此系统研究较多并先后建立了敏感的检测方法。其内核部份是HBV的第二抗原抗体系统,称核心抗原抗体系统(HBcAg、抗-HBc)。不少报导认为抗-HBc的出现是代表病毒的复制,而肝细胞核内的HBcAg则更是     

HCV E2和HBV preS融合蛋白真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞 …

目的 构建丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｐｒｅＳ融合蛋白的真核表达载体。方法 用ＰＣＲ方法扩增ＨＢＶｐｒｅＳ和ＨＣＶＥ２蛋白基因,并将二者克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中,用脂质体转染试剂将其转入ＣＯＳ７细胞,通过免疫荧光检测细胞瞬时表达的融合蛋白,结果Ｅ２－ｐｒｅＳ融合蛋白基因包括了全长的ＨＢＶｐｒｅＳ和ＨＣＶＥ２蛋白基因,嵌合基因长度约１．６ｋｂ表达载体在ＣＯＳ７细胞表达出     

HBV、HCV、HGV重叠感染的回顾性研究

目的了解10年前我国HBsAg阳性献血员中HBV,HCV,HGV重叠感染状况。方法采用逆转录套式PCR技术检测血清中HCWI：NA、HGVRNA,免疫PCR技术检测HBVDNA。结果发现在HBsAg阳性献血员中,HBVDNA阳性率90％,HCVRNA阳性率20％,HGVRNA阳性率6％,三重感染阳性率3％。结论HBsAg阳性献血员中有较高比例的双重感染,且以HCV感染为主。     

庚型肝炎病毒与丙型肝炎病毒混合感染的初步研究

庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ)在健康献血员中主要以携带者形式存在 ,同时也存在于输血后肝炎、非甲～戊型肝炎患者中。为了解ＨＧＶ在北京地区丙型肝炎患者中的感染状况 ,我们采用ＨＧＶ非结构基因 3(ＮＳ3)区逆转录 -套式 -聚合酶链反应 (ＲＴ-ｎｅｓｔｅｄ -ＰＣＲ)方法检测了 80例丙型肝炎患者血清中的ＨＧＶＲＮＡ ,现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　标本来源　所有病例选自 1996年 4月～ 1998年 12月北京医科大学人民医院肝病研究所肝炎科门诊及病房病人 ,慢性丙型肝炎患者 80例 ,其中男 42例 ,女 38例 ,年龄 3～ 68岁 ,平均40 7岁。Ｈ…     

血清乙肝病毒X基因的检测方法及意义

目的 探讨血清乙肝病毒（ＨＢＶ）Ｘ基因的检测方法及肝病患者Ｘ基因检测的意义。方法 通过ＰＣＲ扩增法探讨ＨＢＶ Ｘ基因的检测方法,对扩增产物的序列进行测序分析,并对３０例肝癌及３２例肝硬化患者血清ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ与Ｘ基因进行检测。结果经琼脂糖电泳与序列分析表明,扩增产物与Ｘ基因序列一致。血清学检测显示,２例肝癌与２例肝硬化患者血清中Ｘ基因检测阳性,但ＨＢｓＡｇ检测阴性。结论 应用ＰＣＲ法能在血清中扩增出完整Ｘ基因片段,为研究Ｘ基因的序列变化与肝癌发生的关系提供了一个有效途径。部分肝病患者血清ＨＢｓＡｇ阴性,但在血清中能检出Ｘ基因,提示肝组织中存在Ｘ基因整合。     

聚合酶链反应检测TT病毒核酸的优化条件

目的探讨聚合酶链反应(PCR)扩增TTV核酸的优化条件,初步测定慢性丙型肝炎及慢性非甲-戊,非庚肝炎患者中TT病毒的检出率.方法将标本分别予以4℃保存1wk、室温保存1wk及1wk内将标本于-35℃与室温间反复冻融6次3种储存方法.分别以SDS-蛋白酶K方法(方法1),NP-40法(方法2)及聚乙二醇法提取TTV DNA,分别以套式PCR与单管套式PCR检测TTV.以PCR直接序列分析方法测定扩增产物以验证扩增产物的特异性.结果在10份已知病毒标志均为阴性的血清中,方法1与方法2提取核酸后可在4份血清中检出TTV,方法3提取核酸后的检出率为0.1次PCR、单管PCR与单管套式PCR对10份已知病毒标志均为阴性血清的TTV检出率分别为10%,40%和40%.将2份血清按原血清、10-1～10-10系列稀释后检测,发现,1次PCR、套式PCR和单管套式PCR的检出水平分别为原倍、10-5与10-4及阴性、10-4与10-4.4℃保存1wk、室温保存1wk及反复冻融标本的最低检测稀释度为10-5,10-4,10-3与10-4,10-4,10-3.对一份PCR产物进行序列分析证实为TTV特异性基因.检测31份慢性丙型肝炎及32份慢性非甲-戊,非庚肝炎标本,阳性率分别为29.03%和34.38%.结论建立了一种敏感、快速、特异的TT病毒检测方法.在1wk内,不同的标本储存方法对检测结果的影响不大,TT病毒可能是慢性非甲-戊,非庚肝炎及输血后肝炎的重要致病因子.