丙型肝炎病毒非结构基因5b的变异及与干扰素治疗的关系

以聚合酶链反应直接序列分析方法测定了４例无症状慢性丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者，与９例接受干扰素治疗的慢性丙型肝炎患者血清中ＨＣＶ非结构基因５ｂ（ＮＳ５ｂ）ｃＤＮＡ的序列。发现，与已发表的Ⅱ／１ｂ型ＨＣＶ序列相比，无症状慢性ＨＣＶ感染者的ＨＣＶ在核苷酸水平的同源性高于干扰素治疗有效的慢性丙型肝炎患者（９５．６５％±２．６１％比９４．３５％±２．２９％），后者又高于干扰素治疗无效的慢性丙型肝炎患者（９２．７０％±１．９０％）。还发现在干扰素治疗后，治疗无效者血清中ＨＣＶＮＳ５ｂｃＤＮＡ序列发生明显变化，在所测定的３８０个核苷酸中有９～４８个发生碱基替换，从而导致所编码的氨基酸中有６～２０个发生突变。结果提示，ＨＣＶＮＳ５ｂ基因变异与病情及干扰素治疗有一定关系。变异较大者常出现明显的临床表现，且干扰素治疗可能趋势于失败。     

原位PCR技术检测石蜡包埋肝组织中HBV DNA

采用原位PCR技术对22例石蜡包埋肝组织中HBV DNA进行检测,并与提取组织DNA PCR技术及原位杂交技术进行比较。结果表明,22例标本经原位PCR检测有9例为阳性;经提取组织DNA PCR检测有7例阳性,两者敏感性相近,符合率达80％;经原位杂交检测有4例阳性,其敏感性只及原位PCR的44％。提示原位PCR是项快速、敏感及特异性较高的检测技术。     

丙型肝炎病毒HCV E1区基因在真核细胞中的表达及表达产物的初步应用

目的:建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并对表达产物进行鉴定,同时测定表达产物与抗HCV阳性血清的反应情况。方法:用限制性内切酶XbaⅠ和EcoRⅠ从原核表达载体pMSCVE1中切下HCVE1区的基因片段,并将其克隆到真核表达载体PcDNA3.1中,阳性克隆经SmaⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定后,用磷酸钙共沉淀法将其转染入小鼠骨髓瘤细胞SP2/0中,同时利用WesternBlot方法对表达产物进行鉴定;测定表达产物与20份抗HCV阳性血清标本和10份抗HCV阴性的血清标本的反应性。结果:经酶切过夜后从原核表达载体上切下的基因片段与经过同样双酶切的真核表达载体PcDNA3.1连接,阳性克隆经SmaⅠ和XbaⅠ酶切后产生了预期大小的354bp的片段。经磷酸钙转染,产生了具有对G418抗性的细胞克隆,经WesternBlot方法用抗HCVE1区合成肽抗原的单抗检测表达产物,产生了特异的反应;并证实该表达产物与HCV患者的血清有特异反应。经WesternBlot证实在抗HCV阳性血清中有35%(7/20)可与表达产物产生特异的反应;阳性细胞经3个月传代后,仍可检测到HCVE1的表达产物。结论:此项研究所建立的能够表达HCVE1基因细胞系表达产物可与阳性血清发生特异性反应,该细胞系的建立为进一步研究抗HCVE1抗体的临床意义及进行有关HCV核酸免疫的研究创造了条件。     

乌鲁木齐市部分高危人群庚型肝炎病毒感染现状及5′ UTR区基因序列分析

新疆地处我国西部边陲 ,存在着各型肝炎散发流行的危险因素 ,庚型肝炎病毒在乌鲁木齐市的流行现状尚未见报道。在新疆医科大学第一附院收集了2 67份各类人群的血清 ,用酶标法检测血清中庚型肝炎病毒抗体 (抗 ＨＧＶ) ,再以庚型肝炎病毒ＮＳ3区为引物运用ＲＴ ＰＣＲ法对抗 ＨＧＶ(阳性 )血清进行庚型肝炎病毒核酸 (ＨＧＶＲＮＡ)的扩增检测 ,阳性扩增产物为 83ｂｐ。最后 ,选择该病毒 5′非编码区为引物对第一次ＲＴ ＰＣＲ扩增ＨＧＶＲＮＡ(阳性 )血清 ,再次进行163.ｃｏｍ)ＲＴ ＰＣＲ扩增 ,阳性扩增产物为 1 90ｂｐ ,对第二次扩增ＨＧＶ…     

丙型肝炎病毒E2基因激发小鼠细胞免疫的实验研究

目的 :研究丙型肝炎病毒E2基因接种能否诱导机体产生细胞免疫以及乙型肝炎病毒preS基因对其诱导细胞免疫能力的影响。方法 :以BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞株 (SP2 /O)为宿主细胞 ,建立表达丙肝病毒E2蛋白的靶细胞 ,将其注射于E2基因或 preS与E2融合蛋白基因免疫的小鼠腹腔 ,记录小鼠接种瘤细胞后的存活期 ,以小鼠存活期的长短作为反映基因免疫小鼠对HCVE2蛋白细胞免疫的有无或强弱的指标。结果 :靶细胞表达了相对分子质量约为 70 0 0 0的E2蛋白 ,E2基因接种小鼠的存活期长于对照组 ,单独E2基因接种组的存活期显著长于对照组 ,也长于 preS与E2融合蛋白基因免疫组。 结论 :E2基因接种能诱导细胞免疫 ,但与 preS融合后 ,其诱导细胞免疫的能力会降低。     

酶免疫法量化分析乙型肝炎病毒核酸扩增产物

有关聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术应用研究的重点，是利用其能够短时间内在体外扩增出数百万个特异性靶ＤＮＡ序列拷贝的特点，对感染者体内含量极低的病原体核酸模板（如乙型肝炎病毒ＨＢＶ、丙型肝炎病毒ＨＣＶ等）进行...     

丙型肝炎病毒E2及preS融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｃ基因与ｐｒｅＳ２基因嵌合，嵌合基因免疫小鼠能产生抗ＨＣＶＣ蛋白的抗体，而单独接种ＨＣＶＣ基因则不能诱导小鼠产生抗Ｃ蛋白的抗体［１］。为研究ｐｒｅＳ能否增加ＨＣＶＥ２蛋白的免疫原性提供物质基础，我们在哺乳动物细胞稳定表达了Ｅ２?..     

聚合酶链反应检测HGV RNA方法的建立及应用

目的：了解我国不同人群中庚型肝炎病毒（ＧＢＶＣ／ＨＧＶ）感染的状况。方法：以ＮＳ５区序列分析为基础设计引物，建立聚合酶链反应方法，并对我国几个地区、不同疾病状况的２６８例患者进行庚型肝炎病毒核酸的检测。结果：有输血史的健康人群、ＨＢＶ和ＨＣＶ感染者及慢性非乙非丙型肝炎患者的ＧＢＶＣ／ＨＧＶＲＮＡ阳性率均高于自然人群，分别为１３．３％，１８．４％，１９．８％，８．９％，其中有明确血液暴露史者的检出率达２０．１％。结论：庚型肝炎在我国有广泛的流行，输血等肠道外途径为重要危险因素。     

庚型肝炎病毒的检测和临床研究

１庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）的检测１１ＲＴ－ＰＣＲ法ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的检测，目前普遍采用的方法为ＲＴ－ＰＣＲ法，其敏感性、特异性均较好。但由于操作时间长，对人员、设备条件要求高，故大规模的流行病学研究还有待于可靠的ＥＬＩＳＡ检验抗体法的建...     

EBV体外转化丙型肝炎病人PBMC中HCV持续存在的研究

丙型肝炎病毒(hepatitis c virus,HCV)感染的一个主要特征是病程慢性化并迁延发展。近年越来越多的研究显示,HCV感染单个核细胞在疾病发展过程中起着不容忽视的作用,与干扰素治疗后丙型肝炎的复发关系密切。HCV不仅具有亲肝细胞性,也有淋巴细胞嗜性。丙型肝炎病人外周血单个核细