腹水中乙型肝炎病毒感染的研究

乙型肝炎（乙肝）病毒（ＨＢＶ）在肾脏等肝外组织中都有存在和表达。本研究探讨腹水中ＨＢＶ及其抗原、抗体的存在和表达。一、材料与方法１病例选择：２０例中１７例为乙肝后肝硬化，３例为其他原因合并腹水。１５例有反复输血史。２材料及方法：（１）同时取患者血...     

丙型肝炎病毒NS3区优势表位基因的克隆和高效表达研究

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的Ｃ３３ｃ基因编码蛋白是ＨＣＶ抗体检测中所需的重要抗原。应用打点杂交法得到了来源于３例病人的８个Ｃ３３ｃ的克隆，并从中挑选出能在大肠杆菌中高效表达的克隆─—ｐＫＨ２６。该重组质粒中的插入片段与ＨＣＶ－Ｊ的核苷酸同源性为９２．６％，所编码氨基酸的同源性为９５．９％，属于中国主要的ＨＣＶ流行株，它可通过温度变化这种简单、方便、经济的方式进行诱导表达，得到以天然蛋白形式存在的具有良好免疫学活性的表达产物，表达蛋白产量可占整个细菌蛋白的１５％以上。由于不含有融合蛋白，用于抗－Ｃ３３ｃ的检测特异性高，是建立诊断ＨＣＶ感染方法的良好原材料。     

乙肝病毒X基因与肝癌

目前公认肝癌（ＨＣＣ）的发病是多因素协同作用的结果,其中乙肝病毒（ＨＢＶ）感染是ＨＣＣ的主要病因之一．流行病学调查表明ＨＢＶ感染者ＨＣＣ的发病率较对照人群高出２００倍以上．虽然ＨＢＶ的确切致癌机制尚未完全阐明,但随着分子病毒学的研究进展,人们对ＨＢＶＸ基因及其产物Ｘ蛋白（ｐＸ）与ＨＣＣ之间的关系已有了多方面及多层次的了解,积累了大量研究资料．ＨＢＶ基因组是一不全双链的环状ＤＮＡ分子,其长链含有４个开放读码框架（ＯＲＦ）,分别为编码前Ｓ１蛋白,前Ｓ２蛋白及Ｓ蛋白的Ｓ基因,编码前Ｃ蛋白与Ｃ蛋白的Ｃ基…     

DNA分子杂交检测血清中HBV DNA

目前,国内外对乙型肝炎临床研究已进入病毒分子生物学水平。开展这方面的研究,需要建立敏感的病毒DNA分子研究方法,用同位素标记HBVDNA制备探针,实行DNA分子杂交(以下简称斑试),检测血清中HBVDNA是一项灵敏指标。为将大量检测血清斑试及早应用于临床观察抗病毒治疗效果,我们进行了这方面的研究,现将杂交方法及应用结果报告如下。     

关于HBV-DNA聚合酶检测中的几个问题

自1973年Kaplan报告了HBsAg阳性患者血清中测到特异性HBV-DNA聚合酶(以下简称DNA-P)后,为深入研究HBV提供了一种新指标。国内1978年开展此技术,临床应用日益广泛,并有改进和发展。目前HBV的研究虽已进入分子生处学水平,但DVA-P在观察HBV复制活跃程度方面仍为一简便可靠的指标。本文结合我们工作中遇到的问题,对DNA-P滤膜选择,检测中质控、DNA-P计算方法及血清污染对结果影响等问题加以讨论。     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5a蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立及应用

制备抗丙型肝炎（丙肝）病毒（ＨＣＶ）－ＮＳ５ａ重组蛋白的单克隆抗体（单抗），并探讨其在临床诊断中的应用价值。方法通过常规细胞融合技术制备分泌单抗的杂交瘤细胞株，用含该杂交瘤细胞的腹水对石蜡包埋肝组织细胞中的ＨＣＶ－ＮＳ５ａ抗原进行免疫组化测定，同时用抑制法检测６７例丙肝血清中的ＨＣＶＮＳ５ａ和ＮＳ３抗体分布，并与ＮＳ３单抗的结果进行比较。结果融合后的阳性克隆中筛选出４株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株，命名为８Ｂ２，６Ｆ１１，４Ｃ６和７Ｄ９。这４株单抗与ＮＳ５ａ抗原有良好的反应性；与ＨＣＶ核心区多肽，ＮＳ３区表达多肽及乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的表面抗原均无反应。免疫组织化学检测显示，在ＨＣＶ感染肝组织中，ＮＳ５ａ抗原阳性占５４．９％（１７／３１），而ＮＳ３抗原阳性占５１．６％（１６／３１），抗原分布多呈包涵体分布，少数病例为胞浆型，１例ＮＳ５抗原呈核型表达。在６７例抗ＨＣＶ阳性血清中，ＮＳ５抗体阳性４０例，占５９．７％，而ＮＳ３阳性４７例，占７０％。结论此法制备的单抗有强特异性，在开展ＨＣＶ免疫组织化学研究上具有广阔应用前景。