衣原体持续性感染宿主的免疫逃逸机制

全球范围内衣原体感染病例不断增加,且超过半数患者表现为持续性感染或无症状感染,这可能归因于衣原体的免疫逃逸机制.诱发衣原体持续性感染的外界因素包括抗生素的作用与病毒共感染等,同时衣原体感染可抑制免疫细胞应答并引起宿主细胞凋亡而影响免疫细胞的功能,如促进巨噬细胞的极化、抑制中性粒细胞杀菌作用、促进T细胞的耗竭等.深入研究...     

腹腔镜经腹腔腹膜前腹股沟疝修补与Lichtenstein术的临床疗效比较

目的比较TAPP术与Lichtenstein术在腹股沟疝治疗中的临床疗效,探讨提高治疗腹股沟疝临床疗效的手术方式。方法选择腹股沟疝患者135例,按照自愿的原则,分为A组与B组,A组采取TAPP手术方式,B组采取Lichtenstein手术方式,比较两组患者手术一般情况、术后并发症及术后3个月复发情况。结果两组患者在上述方面比较,差异均具有统计学意义（P〈0.05）,A组临床疗效好于B组。结论外科治疗腹股沟疝时,应首选TAPP术治疗,可提高临床疗效,减少并发症及术后复发。     

甲壳低聚糖对抗生素脱污染小鼠肠道菌群的影响

目的观察甲壳低聚糖对抗生素脱污染小鼠肠道菌群的影响,为进一步开发壳聚糖提供理论依据.方法用盐酸林可霉素复制肠道脱污染小鼠动物模型,将模型小鼠随机分为治疗组和对照组,治疗组灌服甲壳低聚糖600mg@kg-1@d-1,对照组灌服等体积蒸馏水.7天后分析肠道菌群.结果模型小鼠治疗组肠道菌群基本恢复正常,与对照组相比差异具有显著性意义(P＜0.05).结论甲壳低聚糖对小鼠肠道菌群失调具有一定的调整作用.     

女性银屑病患者血清性激素浓度测定

对20例女性、非妊娠期、生育年龄的寻常型、进行期银屑病患者检测了雌二醇(E_2)、孕酮(P)和睾酮(T)的血清浓度。结果为:卵泡期E_2平均值为84±61.6pg/ml,黄体期E_2平均值为164.9±115pg/ml,均显著高于正常平均值(P值分别为<0.001,<0.005);黄体期P平均值为2.67±4.62ng/ml,显著低于正常平均值(P<0.005);T平均值在正常范围,提示银屑病可能与血清E_2和P浓度有关。     

肺炎嗜衣原体Cpn0797蛋白的生物信息学分析及其单克隆抗体的制备和鉴定

摘 要： 目的 生物信息学分析肺炎嗜衣原体Cpn0797蛋白的结构,制备特异性的抗Cpn0797蛋白的单克隆抗体。 方法 用ProtParam、SignalP、NPS@ 、和PSORT等软件对Cpn0797蛋白的理化参数、信号肽、二级结构、蛋白亚细胞定位进行分析;原核表达纯化GST-Cpn0797融合蛋白,以其为免疫原免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体的亚类和特异性。 结果 生物信息学分析表明Cpn0797蛋白二级结构以无规则卷曲为主;成功地建立了能稳定分泌抗Cpn0797蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,单克隆抗体能特异性的识别Cpn0797内源性蛋白。结论 成功制备特异性的Cpn0797单克隆抗体,为进一步探究Cpn0797蛋白的生物学功能提供实验基础。     

沙眼衣原体MIP蛋白的原核表达、纯化及免疫学特性鉴定

目的 采用pGEX-6p载体原核表达沙眼衣原体(Ct)巨噬细胞感染增强因子(MIP),进一步纯化后免疫小鼠,评价该蛋白作为Ct疫苗候选抗原的可行性。方法聚合酶链反应技术从Ct D型基因组扩增MIP编码基因,构建pGEX-6p-1/MIP重组质粒并转化大肠杆菌,IPTG诱导重组菌表达GST-MIP融合蛋白,PreScission蛋白酶切除GST标签后免疫Balb/c小鼠,ELISA法检测MIP的免疫学特性。结果MIP编码基因正确插入pGEX-6p-1载体,核苷酸序列与GenBank登陆的Ct D型MIP基因完全一致;重组融合蛋白在E.coli中稳定高效表达,酶切后纯度达90％以上;MIP蛋白具有良好的免疫原性,诱导小鼠产生高滴度特异性IgG型抗体,亚型以IgG2a为主;MIP免疫组小鼠脾淋巴细胞受MIP蛋白刺激,分泌高水平IFN-γ。结论重组表达的Ct MIP 蛋白具有良好的免疫原性,能诱导小鼠产生高特异性的体液及细胞免疫应答,可进一步探讨其作为Ct亚单位疫苗的可行性。     

沙眼衣原体ompA基因真核表达载体的构建及在HeLa细胞中的表达

目的　构建沙眼衣原体 (Ct)ompA基因真核表达重组质粒 ,利用脂质体体外转染HeLa细胞 ,为核酸疫苗的研制作准备。　方法　应用PCR技术从D型Ct基因组中扩增ompA全长基因 ,重组入 pUCm -T克隆载体。将pUCm -T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应 ,亚克隆入 pcDNA3 .1真核表达载体的相应位点 ,进行序列分析和酶切鉴定后 ,运用脂质体将重组体 pcDNA3 .1/ompA转染HeLa细胞 ,免疫组化法观察目的基因的表达。　 结果　PCR扩增得到约 1.2kb的特异性ompA基因片段 ;序列测定证实与发布序列一致 ;构建得到真核表达重组体 ;重组质粒pcDNA3 .1/ompA在HeLa表达MOMP。　结论　CtompA基因能够在体外真核细胞中表达 ,为进一步研究CtDNA疫苗以及研究该蛋白的生物学功能提供实验基础。     

沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答

目的构建沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗,并观察其诱导小鼠产生的体液免疫和细胞免疫。方法将核酸疫苗(pcDNA3.1MOMP)或对照空质粒(pcDNA3.1)注射于4～6周龄小鼠后腿股四头肌,每次剂量为100mg。间隔2周加强免疫2次。末次免疫后,ELISA法测定脾淋巴细胞培养上清液中IFNγ及小鼠血清中抗MOMP水平;MTT法测定脾淋巴细胞特异性增殖反应。结果小鼠接种核酸疫苗后,能产生特异性抗体,第3次免疫后抗体最高滴度达1∶1024,培养上清液中IFNγ达(532.0±45.4)pg/mL;实验组小鼠脾淋巴细胞刺激指数为3.94±0.25,其抗原特异性反应明显高于对照组。结论沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗能刺激机体产生特异的细胞免疫和体液免疫。     

重症监护病房病原菌分布及耐药性分析

目的 了解医院近2年重症监护病房(ICU)病原菌分布及其耐药情况.方法 收集2007～2008年ICU送检的1013份标本,采用API鉴定系统进行菌株鉴定及药敏试验.结果 共分离出562株病原菌,阳性率55.5%,革兰阴性菌构成比明显高于革兰阳性菌,最常见的革兰阴性菌分别是铜绿假单胞菌(21.0%)、鲍氏不动杆菌(16.7%)、大肠埃希菌(8.2%)、产酸克雷伯菌(7.1%)、肺炎克雷伯菌(6.0 0A)、嗜麦芽寡养单胞菌(5.2%)与阴沟肠杆菌(4.6%);在革兰阳性菌中以葡萄球菌属和肠球菌属为主;主要革兰阴性杆菌对头孢哌酮/舒巴坦均敏感,而对其他多数常用抗菌药物耐药,肠杆菌科中产ESBLs菌株对青霉素类和头孢类抗菌药物耐药率明显高于非产ESBLs菌株,葡萄球菌属对万古霉素、替考拉宁等敏感;耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)对常用抗菌药物耐药性均高于对甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS),肠球菌属对多数常用抗菌药物耐药,仅对万古霉素与喹奴普汀/达福普汀敏感.结论 调查结果表明,ICU病原菌以革兰阴性菌为主,检出菌均存在严重耐药问题,及时监测病原菌变化及耐药趋势以指导临床用药至关重要.     

沙眼衣原体外膜蛋白2重组蛋白的表达纯化和免疫性鉴定

目的表达沙眼衣原体外膜蛋白2,纯化表达产物,并对其免疫性进行鉴定。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术获得沙眼衣原体D型外膜蛋白2第167～434位氨基酸的编码基因片段,将此片段克隆于表达载体pET28b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE、蛋白印迹试验分析表达产物,亲和层析法纯化重组蛋白;重组蛋白免疫家兔以检测其免疫原性。结果重组质粒酶切分析及DNA测序证实成功构建pET28b(+)/Omp2aa167～aa434表达质粒;通过优化表达和纯化条件,获得了相对分子质量约为35.0×103纯化蛋白产物,蛋白印迹试验证实该重组蛋白能与Ct感染者阳性血清反应;ELISA法测定免疫血清特异性抗体效价在1∶1280以上。结论表达的重组外膜蛋白2aa167～aa434具有良好的免疫性。