雄激素应答元件陷阱DNA抑制PSA基因启动子的作用并诱导LNCaP细胞凋亡(英)

目的：研究雄激素应答元件陷阱DNA（ARE decoy）对前列腺特异抗原（PSA）基因启动子的抑制作用及其对前列腺癌细胞LNCaP细胞生长活性的影响，为前列腺癌的基因治疗寻求新的策略。 方法:联合运用报告基因和陷阱DNA策略，构建含PSA基因5’侧启动子区640 bp DNA的荧光素酶表达载体pGL3-PSA， ARE陷阱DNA共转染前列腺癌细胞株PC3-M。应用双荧光素酶测定系统，检测荧光素酶的表达活性。然后，应用2 mg/L ARE decoy转染LNCaP细胞，通过相差显微镜观察细胞超微结构变化，MTT比色法检测细胞生长活性，DNA ladder和流式细胞技术（FCM）检测细胞凋亡以研究ARE decoy DNA对前列腺癌细胞LNCaP细胞生长活性的影响。同时提取LNCaP细胞核蛋白，应用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测ARE decoy DNA与雄激素受体的特异结合。结果:ARE decoy DNA显著抑制报告基因荧光素酶的表达，抑制率可达95%。EMSA显示ARE decoy DNA能特异与核蛋白中雄激素受体结合。LNCaP细胞转染ARE decoy DNA后，镜下观察部分细胞出现凋亡形态学的改变，细胞体外生长受到抑制，染色体DNA凝胶电泳可见明显梯形条带。转染48h的凋亡率为22.4%。 结论:实验表明ARE decoy DNA能竞争结合雄激素受体(AR)，阻断AR的作用而诱导LNCaP细胞凋亡，有可能为前列腺肿瘤的治疗提供新的策略。     

四君子汤免疫活性部位多糖SJZPS-Vb-1～2的分离纯化及理化性质研究

目的 :为四君子汤免疫药理作用的物质基础研究提供资料。方法 :以多糖对小鼠溶血素抗体生成反应的影响为药效评价指标 ,比较四君子汤复方多糖免疫活性部位 (SJZPS V)各组分 (SJZPS Va～d)的免疫活性 ;应用凝胶过滤法 ,自免疫活性最强的组分SJZPS Vb中分离得到 2个酸性多糖SJZPS Vb 1～ 2 ,分别采用比色法、凝胶过滤法、甲基化分析、GC、GC/MS联用等技术 ,进行了理化性质研究。结果 :SJZPS Vb 1～ 2的分子量分别为 3 83及2 6 0万 ;组成单糖及其分子摩尔比分别为 :SJZPS Vb 1glucose :galactose :mannose 1∶0 4 6∶2 15 ;SJZPS Vb 2 glucose:galactose :mannose 1∶1 4 1∶4 18。甲基化分析结果表明 ,SJZPS Vb 1及SJZPS Vb 2的组成单糖中 ,末端、4 、6 、4或 6位分支的甘露糖残基数目基本相当 ,而半乳糖的连接位点则有较大差别。结论 :SJZPS Vb 1及SJZPS Vb 2的免疫活性有待研究 ,其结构的异同与活性有否相关值得研究。     

稳定同位素示踪法用于Caco-2细胞葡萄糖吸收模型的研究

目的 建立Caco-2细胞葡萄糖吸收模型,为考察药物对葡萄糖吸收的影响提供方法。方法 Caco-2细胞培养7,14,21 d后,分别加入25,50,75,100 mmol·L-1的葡萄糖溶液孵育5,10,15,20 min,采用高效液相色谱-质谱联用技术,以稳定同位素示踪法比较培养时间、葡萄糖浓度以及孵育时间对葡萄糖吸收的影响。结果 Caco-2细胞培养21 d后葡萄糖的吸收优于培养7 d和14 d的吸收,吸收量大,趋势稳定。此时用75 mmol·L-1的葡萄糖溶液孵育细胞10 min,葡萄糖吸收量与100 mmol·L-1比较差异无统计学意义,但高于25,50 mmol·L-1时的葡萄糖吸收量。结论 本实验条件下建立的Caco-2细胞模型可作为研究葡萄糖吸收的模型。     

白木香种子的超低温保存研究

【目的】探讨白木香种子长期保存的方法。【方法】将不同含水量的白木香种子放置在液氮罐(-196℃)中保存55 d后取出,测定其发芽率,并考察冷冻方法对其发芽率的影响。【结果】含水量为16.30%的种子发芽率完全丧失;含水量为13.02%、9.34%的种子发芽率大大降低;而含水量为7.35%的种子仍能保持较高的发芽率。速冷的白木香种子比缓冻的发芽率高。【结论】含水量为7.35%的白木香种子置于液氮中保存为一种安全、有效的长期保存方法。     

慢性胃炎脾气虚证与脾胃湿热证的差异表达基因比较

目的：比较慢性胃炎脾气虚证与脾胃湿热证患者差异表达基因。方法:分别提取慢性胃炎脾气虚和脾胃湿热患者胃黏膜组织RNA各4例，逆转录荧光探针标记后杂交制作BiostarH-140 s基因芯片。采用荧光值ratio、生物信息学、t检验等方法分析结果，实时荧光定量PCR检测部分相关基因。结果:获得差异表达基因245条，主要为营养物质消化吸收运输、物质能量合成代谢、细胞周期增殖分化、免疫反应等相关基因；有显著意义的差异表达基因77条；实时定量PCR检测10条基因，6条与芯片结果一致。结论:慢性胃炎脾气虚和脾胃湿热2个证型基因表达存在明显差异，提示中医的临床辨证分型与基因差异表达有一定关系。     

连黛胶囊抗胃癌的药理特性与临床应用

目的观察连黛胶囊防治胃癌的药理活性与临床疗效方法采用MNNG诱发胃癌大鼠进行药理实验,基因蛋白表达用免疫组化法检测,细胞分子药理采用甲基绿-派诺宁染色、吖啶橙染色、原位末端标记、琼脂凝胶电泳、免疫组化、MTT、流式细胞仪分析、615近交系小鼠皮下成瘤等方法进行,药理基因差异条带检测采用mRNA差异显示法,临床观察随机单盲设计结果试药灌胃使大鼠胃癌发生率明显降低,使p21ras和c-erbB2表达阴性(对照组阳性).试药血清可抑制MGC-803细胞生长和诱导细胞凋亡.盐酸小檗碱(试药的主要有效成分)可使SGC-7901和MGC-803细胞软琼脂集落形成率降低,增殖抑制及移植成瘤率降低;能抑制MGC-803细胞生长,诱导细胞凋亡,使bcl-2弱阳性表达;能抑制BGC-823细胞生长,并出现基因差异显示条带.临床观察31例胃肠癌患者,服药1mo能改善证候,提高生存质量,提高NK细胞和CD3水平.结论连黛胶囊具有防治胃癌的功效,作用机制与抑制癌基因蛋白过表达和诱导癌细胞凋亡有关,有药理作用靶基因存在.     

胃酸直接滴定法在新药临床药理研究中的应用

胃酸分泌与消化性溃疡病、慢性胃炎、返流性食管炎、消化不良等疾病有密切的关系。临床使用先进方法监测胃酸分泌可以协助诊断和指导治疗用药。某些治疗消化性溃疡和胃泌素瘤的药物如组织胺第2(H_2)受体拮抗剂、生长抑制素、氢—钾离子ATP酶抑制剂等,在临床药理研究中,采用24小时胃酸连续监测、胃内酸度直接滴定(Intragastric titration,IGT)等方法检测胃酸分泌,是评价新药临床疗效的主要指标之一。现将我们进行的一些有关试验结果报告如下。     

CR1409拮抗缩胆囊素升高细胞内Ca~(2+)的作用

CR1409是一种新合成的缩胆囊素(CCK)受体拮抗剂。本文使用荧光指示剂Fura-2作为细胞内钙离子的探测物,在离体的大白鼠胰腺细胞研究OR1409对CCK引起细胞内钙离子浓度升高的拮抗作用。结果表明:10μmol/L CR1409完全抑制1nmol/L CCK的作用,半效抑制浓度为0.37μmol/L,比另一种拮抗剂双丁酰环鸟嘌呤核苷(db cGMP)强100倍。随着CR1409浓度的递增,使CCK升高细胞内钙离子浓度的量效曲线右移,根据Schild方法计算,pA_2值为6.93(r=0.992)。CR1409对氯氨甲酰胆碱和蛙皮素无拮抗作用。实验结果证明CR1409是一种效力较强的、特异性的和竞争性的CCK受体拮抗剂。