结直肠癌及淋巴结组织CEA mRNA表达的实时荧光定量检测

目的:建立检测CEA mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,并探讨结直肠癌及淋巴结组织中CEA mRNA表达的应用价值。方法:应用SYBR Green Ⅰ作为荧光染料,以GAPDH作为内对照,建立检测CEA mRNA的FQ-PCR方法,并对56例结直肠癌组织、淋巴结组织CEA mRNA的表达水平进行检测。结果:CEA mRNA在结直肠癌组织中均表达,但表达水平在不同病理分化程度(P=0.8661)及不同Duke分期(P=0.2986)中无明显变化;在检测的231个淋巴结中,共有137个淋巴结CEA mRNA表达为阳性,表达水平为18.31±36.85,其阳性表达率为59.3%(137/231),明显高于常规病理检测[29.4%(68/231)],χ2=41.7497,P=0.0001;CEA mRNA在Duke C D期淋巴结中表达水平(32.85±53.49)显著高于Duke A B期(6.54±14.57),P=0.0001。结论:FQ-PCR方法简便、特异和可靠;比常规病理检查更加敏感,可有效补充常规病理检查的不足,在预测肿瘤微转移方面具有重要的临床应用价值。     

硫化氢与胱硫醚-γ-裂解酶在变应性鼻炎豚鼠中作用机制的研究

目的:制备豚鼠变应性鼻炎(AR)动物模型,通过干预性处理研究内源性硫化氢(H2S)及其限速酶胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)在AR中的变化及意义.方法:将24只豚鼠随机分为4组,分别为卵清蛋白致敏豚鼠变应性动物模型组(致敏组)、NaHS处理组及CSE抑制剂炔丙基甘氨(PPG)干预组(PPG组),同时以生理盐水处理豚鼠作为对照组,分别测定各组动物鼻腔灌洗液eotaxin、血浆H2S浓度,采用实时荧光定量RT-PCR法测定鼻黏膜中CSE的表达.结果:豚鼠致敏后eotaxin含量明显增加,而血浆H2S浓度及鼻黏膜CSE的表达明显低于对照组(P<0.05),而干预处理的NaHS组与致敏组相比,eotaxin相应减少(P<0.05),而H2S浓度及CSE的表达量增加(P<0.05),2组间差异有统计学意义,而经PGG干预处理后,eotaxin含量则增加,而H2S浓度及CSE的表达量降低,2组间差异有统计学意义(P<0.05),其中H2S含量与CSE的表达呈线相关.结论:内源性H2S参与AR的炎症过程,其含量主要受限速酶CSE的调控.     

血清AIF、SF、AFP、CEARIA在原发性肝癌及肺癌诊断中的临床价值

本文检测85例原发性肝癌患者AFP、AIF，SF阳性率依次为84．7％、76．5％，54．1，AFP与AIF或SF联检可使阳性率分别提高至97．6%、94．1％。在AFP阴性或低浓度时，AIF与SF联检可弥补AFP之不足。测定36例肺癌患者CEA，AIF、SF阳性率分别为72．2％、77．8％，72．2％，三项指标联检阳性率可达100％。由此说明多项标志物联捡对提高恶性肿瘤诊断的阳性率和特异性具有重要临床价值。     

限制性酶切片段差异显示技术搜寻和克隆肝癌相关基因

目的:筛选新的肝癌相关基因并对其作用进行研究，探讨肝癌的发生机制，从而对肝癌的早期诊断和治疗提供新的思路。 方法:应用限制性酶切片段差异显示技术对比研究手术切除的新鲜的原发性肝细胞癌组织及其周围相对正常的肝组织，通过放射自显影显示结果并筛选差异条带。对差异表达基因序列进行克隆、测序和GenBank同源性比对，进一步分析差异表达的基因片段。 结果:筛选出18条表达有差异的条带，其中肝癌组织表达上调的基因有16条，肝癌组织低表达或缺失，正常组织高表达的基因有2条。二次PCR扩增出3条差异条带，进行克隆、鉴定和测序，并进行同源性比较。其中1条基因与已知基因无明显同源性，可能为新的基因；1条基因序列与编码人类核糖体蛋白基因的cDNA同源性较高（86%）；另有1条基因序列与编码P选择蛋白的基因高度同源（98%）。 结论:共克隆鉴定了3条肝癌相关基因，并初步探讨其功能，为进一步探讨肝癌的发生机理提供了理论依据。     

缺血性脑血管病和冠心病患者Aid与ET-1相关性研究

目的：探讨缺血性脑血管（ICVD）和心血管（CHD）疾病患者醛固酮（aldosterone,Ald）与内皮素（endo-thelin-1,ET-1）的关系。方法：缺血性脑血管病和心血管病及其相关组分诊断标准采用WHO及国家相关机构认可的工作定义。应用放射免疫分析,对93例缺血性脑血管病和103例冠心病患者进行了血清Ald和血浆ET-1的测定,与相同年龄对照组进行比较,并进行相关性分析。结果：①与正常人（62.52±10.40）pg/ml比较,ICVD和CHD各组Ald水平均显著增高,以高血压组（HBP）增高最为显著（89.69±30.11）pg/ml,两组Ald水平增高顺序为HBP〉椎基底动脉供血不足（VBI）〉急性脑梗死（ACI）〉冠心病（CHD）〉脑梗死后遗症（SCI）。②ET-1水平与对照组（58.25±12.2）pg/ml比较各组亦显著升高,HBP组ET-1为（80.29±18.35）pg/ml,相差极为显著（P〈0.01）,其中HBP〉ACI〉CHD〉VBI〉SCI。③线性回归分析显示,两组患者Ald与ET-1之间均呈明显正相关关系,其中ICVD组93例患者,血清Ald与血浆ET-1（r=0.459,P〈0.01）;HBP组Ald与ET-1（r=0.561,P〈0.01）;CHD组Ald与ET-1（r=0.20,P〈0.05）。结论：Ald与ET-1与缺血性脑血管和心血管疾病的发生、发展密切相关,其浓度变化可作为评价心脑血管疾病时血管受损程度的客观指标。     

一氧化碳对豚鼠变应性鼻炎动物模型中硫化氢体系的影响

目的 制备豚鼠变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)动物模型,干预处理后研究内源性一氧化碳(CO)与硫化氢(H2S)在AR发病机制中的作用,并分析CO对AR模型中硫化氢体系的影响.方法 以卵清蛋白成功致敏豚鼠制备AR动物模型,分别以血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)诱导剂(氯化血红素)和抑制剂(锌原卟啉)干预处理致敏后豚鼠,同时以生理盐水处理豚鼠作为对照组,分别观察各组动物行为学改变,测定血清总IgE,鼻腔灌洗液中嗜酸细胞活化趋化因子含量,并测定血浆CO与H2S浓度,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定鼻黏膜中CO限速酶HO-1与H2S两种限速酶胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的表达.结果 豚鼠致敏后行为学计分、血清总IgE、鼻腔灌洗液嗜酸细胞活化趋化因子浓度及血浆CO含量明显增高(P值均<0.01),鼻黏膜中HO-1的表达量(x±s,下同)为(7.61±2.80)×10-3,较对照组[(2.32±1.14)×10-3]明显增高(P<0.05).诱导组各项指标与血CO含量、HO-1的表达[(14.00±5.73)×10-3]与致敏组相比进一步增高(P值均<0.05);抑制组则各指标明显降低(P值均<0.05),而血浆H2S浓度在AR组[(14.80±1.60)μmol/L]明显低于对照组[(18.90μ1.00)μmoL/L,P=0.002],鼻黏膜中CBS和CSE均有表达,其中CSE在AR中的表达明显减少(P<0.05),HO诱导组H2S浓度和CSE表达量进一步降低(P值均<0.05),抑制组则有所增加(P值均<0.05),而CBS的表达较弱,且各组间差异无统计学意义(P>0.05),提示鼻黏膜中H<,2>S浓度主要受CSE的调控,二种气体相关分析提示H2S浓度与CO含量呈负相关(r=-0.702,P<0.001).结论 内源性CO与H2S参与AR的炎症过程,其中CO含量主要受HO-1的调控,H2S主要与鼻黏膜中CSE的表达有关,H2S浓度的变化受CO影响.     

59例急性白血病形态学分型与免疫分型结果对比分析

目的 探讨急性白血病(AL)形态学分型与免疫分型结果的关系,以提高细胞形态学诊断水平.方法 采用骨髓细胞形态学、骨髓细胞化学染色及免疫分型检测方法.结果 59例AL中,24例急性淋巴细胞白血病(ALL)经免疫分型诊断为7例T-ALL、17例B-ALL;32例急性髓细胞白血病(AML)CD13、CD33、CD14、CD15、CD34、HLA-DR阳性率分别为43.3%、93.8%、22.7%、50.0%、52.6%、22.2%;FAB不能分型的3例AL,经免疫分型证实为AML、T-ALL、B-ALL各1例.FAB分型的1例M2b、3例ALL经免疫分型证实为双表型AL.结论 白血病免疫分型是诊断AL的必要手段,是对形态学分型的补充和修正.     

实时荧光定量PCR检测结直肠癌UbcH10基因的表达

目的：通过检测UbcH10 mRNA在结直肠癌中的表达,探讨UbcH10作为结直肠癌诊断标志物的可能性。方法：采用Trizol提取组织总RNA,RT-PCR获得UbcH10 cDNA,实时荧光定量PCR检测45例结直肠癌患者肿瘤组织与相应癌旁正常组织中UbcH10 mRNA的丰度。结果：在所有肿瘤组织样本中UbcH10 mRNA的相对表达量与其自身的癌旁正常组织样本中的相对表达量相比明显升高,平均表达水平是正常组织的10倍以上（0.0802±0.0907vs0.0079±0.0088,P〈0.01）,其中超过20倍的占37.78%（17/45）。结论：UbcH10基因在结直肠癌患者肿瘤组织中过度表达,可作为结直肠癌诊断的潜在肿瘤标志物及结直肠癌基因治疗的新靶点。     

人组织激肽释放酶6在胃癌中的表达及其临床意义

胃癌是常见恶性肿瘤之一,由于起病隐匿,早期诊断极为困难,目前尚未发现特异性肿瘤标志.人组织激肽释放酶基因家族(Kallikreins,KLKs)是近年发现的肿瘤标志家族,KLK6基因是该家族成员之一,其编码的蛋白--人组织激肽释放酶6(human kallikrein 6,hK6)是由223个氨基酸组成的丝氨酸蛋白酶,具有胰蛋白酶样活性[1].国外研究发现,hK6参与了人类多种恶性肿瘤的形成过程,且与肿瘤的侵袭、浸润和转移等生物学行为密切相关[2-3],但hK6与胃癌的关系在国内尚鲜见报道.我们采用免疫组织化学链霉菌抗生素蛋白一过氧化物酶连接法(SP)检测hK6在胃癌、胃溃疡和正常胃黏膜组织中的表达情况,并探讨hK6表达与胃癌患者临床病理参数间的关系.