环境污染物内暴露剂量测量的应用研究现状及其前景

环境污染物的内暴露剂量检测可以用于职业健康评价、环境监控、国家普查等多个领域.近年来,为了考察日益严重的环境污染对人体的危害影响,环境污染物的内暴露剂量测量方法在国内外迅速发展.随着"多污染多效应模型"的提出和环境污染物内暴露剂量测量方法的不断完善,反映了这一技术在健康生活环境建设中的重要应用价值.     

利用高效液相制备柱分离胸腺素α1

利用高效液相C₁₈反相制备柱，从小牛胸腺中分离到实验室制备量的胸腺素α₁．ELIsA检测有免疫 学活性，等电聚焦电泳为一条谱带，微量玫瑰花结试验表明，0.10 μg本法制备的胸腺素α₁，即具有促进T淋巴 细胞成熟的作用。     

与CYPOR共表达CYP2D6~*1和CYP2D6~*10及其代谢活性比较

细胞色素P450 2D6(cytochrome P450 2D6,CYP2D6)是一种重要的氧化代谢酶,呈基因多态性,对药物的代谢呈现明显的个体差异和种族差异,CYP2D6*10在中国人群中的发生率高达51.3%。采用杆状病毒昆虫表达系统,采用与细胞色素氧化还原酶(cytochrome oxidoreductase,CYPOR)共表达的方式获得具有代谢活性的CYP2D6*1/CYP2D6*10,并初步研究其催化右美沙芬的代谢活性差异。构建重组质粒pFastBac-CYP2D6*1,pFastBac-CYP2D6*10和pFastBac-CYPOR,并分别转化DH10Bac菌株构建重组Bacmid-CYPOR,Bacmid-CYP2D6*1和Bacmid-CYP2D6*10,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒用于病毒扩增和感染Sf9昆虫细胞。通过测定混悬蛋白催化右美沙芬的速率来优化重组CYPOR和CYP2D6病毒感染Sf9昆虫细胞的感染复数(multiplicity of infection,MOI)值和其比例,获得活力较高的重组CYP2D6*1和CYP2D6*10。重组CYP2D6*1催化右美沙芬的Km为(...     

密码子优化提高重组金葡菌肠毒素O在大肠杆菌中的表达水平

目的:优化稀有密码子提高重组肠毒素O的表达量.方法:将带His标签的肠毒素O成熟肽克隆至pET28a质粒上,采用PCR方法对15个稀有密码子进行突变,将突变后的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),并进行蛋白表达及活性鉴定.结果:通过稀有密码子优化,重组肠毒素O的表达量由茵液总蛋白的7.49%提高至19.8%;小鼠淋巴细胞增殖试验表明,通过密码子优化的肠毒素O具有刺激淋巴细胞增殖的作用,并且其增殖作用与未优化前的肠毒素O相当.结论:稀有密码子优化能够有效增加肠毒素O的表达量.     

油菜蜂花粉中雌激素含量和活性测定

为了辨明油菜蜂花粉是否具有雌激素活性以及其活性物质是否是雌二醇,本文对油菜蜂花粉提取液作了高效液相层析、放免测定和雌激素受体活性分析。油菜蜂花粉抽提液经高效液相层析结果发现存在雌二醇峰;放免测定表明每克油菜蜂花粉的雌二醇含量为1.82ng;用培养的兔子宫内膜细胞ZMRUE-85作雌激素受体分析,发现油菜蜂花粉提取液能诱发培养细胞雌激素受体活性,其活性相当于每克油菜蜂花粉含雌二醇1.7ng。从而肯定了油菜蜂花粉中含有以雌二醇形式存在的具有生物学活性的雌激素。     

高效亲和色谱法检测细胞培养上清中的抗体融合蛋白质

目的建立高效亲和色谱检测抗体融合蛋白质的方法,用于抗体及抗体融合蛋白质生产的过程控制。方法正压匀浆法装填rProtein A Sepharose,用不同pH值缓冲液分步洗脱。结果在25~1 000μg/mL浓度范围内,重组人肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(TNFR-Fc)浓度和峰面积显著相关,r=0.999 6;回收率范围为91%~99%,对表达TNFR-Fc的CHO工程细胞的不同培养阶段的3份上清分别进行3次重复测定,RSD在2%以内。结论该方法适用于抗体及抗体融合蛋白质生产的过程控制。     

小鼠肝脏内组成型雄烷受体基因表达剪切突变体的研究

目的研究组成型雄烷受体(CAR)在小鼠肝脏内是否存在剪切突变体.方法以小鼠的肝脏为原料提取核酸,采用逆转录的方法获得小鼠的组成型雄烷受体的cDNA序列,并将其构建到T载体中进行测序分析.结果实验发现CAR在小鼠肝脏内有不同的剪切体存在.结论剪切体的不同主要集中在受体结合部位,估计这种不同与不同外源性物质对受体的调节功能不同有关.     

人UGTIA3催化黄酮类化合物葡醛酸结合反应定量构效关系研究

目的建立人UGTlA3催化黄酮类化合物定量构效关系，考察不同结构参数对葡醛酸结合反应的影响。方法采用半经验量子化学计算法MOPAC-AMl及逐步回归方法对11个黄酮类化合物的结构参数和UGTlA3催化葡醛酸反应的K。值进行定量构效关系研究。结果所建立的QSMR模型（pKm=-2．20707＋0．00256HOF＋3、21290Qc5）具有较好的拟合性。结论分子生成热（HOF）和5位C上的静电荷这两个结构参数是影响其葡醛酸结合活性的主要结构因素。     

利用电泳滴定曲线选择多核苷酸磷酸化酶快速离子交换层析的最佳条件

目的：选择多核苷酸磷酸化酶快速离子交换层析的最佳条件,方法：制备大肠杆菌提取物的电泳滴定曲线,根据该曲线选择快速离子交换怪析ＭｏｎｏＳＩ柱的洗脱缓冲液的ｐＨ。结果：根据该滴定曲线选择ｐＨ８．０作为快速离子交换层析ＭｏｎｏＳＩ柱的洗脱缓冲液的ｐＨ,在该条件下只一步层析,得到的多核苷酸酸化酶的比活性提高２５００倍,结论：电泳滴定曲线法能够用于离子交换层析的最佳条件的选择。