细胞色素P4502C19基因多态性与肺癌易感性的关系

研究证明致癌物代谢酶的遗传多态性在决定环境致癌物的效应时起着关键性的作用,ＣＹＰ酶体系中许多酶参与致癌物的代谢,其基因的多态性与肿瘤的易感性有关,如ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ１Ａ１、ＣＹＰ２Ｅ１等。１９９４年,ｄｅＭｏｒａｉｓ等发现细胞色素Ｐ４５０２Ｃ１９（ＣＹＰ２Ｃ１９）等位基因的两个突变位点：ＣＹＰ２Ｃ１９ｍ１和ＣＹＰ２Ｃ１９ｍ２,并证明ＣＹＰ２Ｃ１９基因的多态性与ＣＹＰ２Ｃ１９酶活性的多态性有关［１］。我们应用等位基因特异扩增法（ＡＳＡ）原理,建立了ＣＹＰ２Ｃ１９等位基因分型法［２,３］,并对７…     

环境污染物质对儿童身高发育迟缓的影响

儿童身高发育受到某些不良因素的影响会偏离正常的生长曲线.传统的观点认为遗传和营养是造成儿童身高发育迟缓的主要因素,但在环境污染日益严重的今天,不断有研究发现环境污染物质也是造成儿童身高发育迟缓的重要因素,环境污染物质通过各种途径和机制影响儿童身高发育并可能引起身高发育迟缓.     

腹膜间皮瘤组织体细胞突变的分析

［摘要］目的：探讨临床标本全基因组测序中体细胞突变测定技术的应用。方法：对1例手术切除的腹膜间皮瘤肿瘤组织和其癌旁组织进行了第二代全基因组测序,并将结果与人类基因组数据库的参考序列进行比对。结果：发现639 717个肿瘤组织和癌旁组织细胞共有的单核苷酸变异（single nucleotide variation,SNV）,20 302个肿瘤组织独有的SNV和2 185个癌旁组织独有的SNV,还有223个位点,在肿瘤组织和癌旁组织以及人类基因组参考序列三者之间均不相同。结论：仅仅对个体2种组织样本和人类基因组参考序列比对,尚不能准确定位病变细胞的所有体细胞突变。因此,建立个体出生时的全基因组序列或预留出生时的DNA样本有助于排除正常组织体细胞突变的干扰。     

金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素（SEI）单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定。方法：以SEI蛋白免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术,经ELISA检测筛选及3次有限稀释,获得目的杂交瘤细胞株;采用杂交瘤细胞免疫小鼠,制备并纯化了单克隆抗体,并对所获得的单克隆抗体进行性质鉴定。结果：最终获得了两株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞8F7与D8,两者分别为IgG2b型与IgG1型;亲和常数分别为9.215×108L.mol^-1和1.968×1010L.mol^-1;两者均有较强的特异性,与纯化的SEG、SEE、SEC及金黄色葡萄球菌上清液均未有交叉反应;相加实验表明两个单克隆抗体识别的为相同表位。结论：单克隆抗体的成功制备,为初步建立肠毒素SEI的双抗夹心测定方法奠定了基础。     

人细胞色素P450 1A2的异源表达及代谢活性测定

目的获得单一的具有活性的人细胞色素P450 1A2（CYP1A2）重组酶,以进一步进行该酶参与的药物代谢研究。方法以人肝组织提取的总RNA为模板,RT-PCR扩增全长的人类CYP1A2基因片段,插入转座载体pFastBac构建重组转座质粒pFastBac-CYP1A2,转化入DH10Bac大肠杆菌,获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-CYP1A2,以之转染草地夜蛾细胞（Sf9）,与细胞色素氧化还原酶（CYPOR）进行共表达。利用蛋白质印迹分析鉴定其表达,并以非那西丁为底物,利用HPLC对其进行代谢活性测定。结果蛋白质印迹分析表明人CYP1A2蛋白在Sf9细胞中成功表达,且该重组酶对非那西丁的Km值为（82.04±11.39）μmol·L^-1（n=3）,Vmax值为（1.78±0.26）nmol·min^-1·mg^-1蛋白（n=3）,表观清除率Clint值为0.02mL·min^-1·mg^-1蛋白。结论利用杆状病毒/昆虫细胞系统,可获得具代谢活性的人CYP1A2重组酶,该酶可进一步用于其他底物的I相代谢研究。     

基因保存技术研究进展

生命的奥秘存在于DNA分子的4种单核苷酸的排列顺序中。人类基因组计划的研究结果告诉我们：人类基因组由30亿个单核苷酸组成，存在于23对（46条）染色体中。人类许多疾病的产生，不仅受到内部基因的控制，还受到外部环境条件的制约。不同基因型的个体在不同的环境条件下可以产生不同的表现型，即使同一基因型的个体，在不同环境条件下，也可以产生不同的表现型。也就是说，疾病是基因与环境共同作用的结果。随着基因检测和基因治疗的迅速发展，儿童基因保存的概念应运而生。利用保存的婴儿基因，通过对发病后的基因位点与婴儿原始状态下的位点进行比较分析，能正确地判断发生疾病的根源，即能精确地确定与该疾病密切相关的基因突变，为基因治疗提供最直接的参考。     

去甲替林及其代谢产物的分析

细胞色素P450 2D6(Cytochrome P450 2D6,CYP2D6)多态性已被广泛深入研究.欧洲白人发现有6%～8%的该酶慢代谢者[1],亚洲人中约有1%的该酶慢代谢者[2].慢代谢者是由于其酶缺陷等位基因造成表达产物缺陷所致的.CYP2D6参与50多种药物的代谢,其中十几种是抗抑郁药物[3].抗抑郁药物在临床使用中产生副作用的报道较多.由于产生副作用的机理不明,     

尿中美芬妥英手性色谱分离单纯形法最优化

应用单纯形法对尿中美芬妥荚(MP)的手性气相色谱分离条件进行最优化。优化结果选定柱温为185℃,载气流速为2.5ml/min。在此条件下测得柱效(以S-MP计)n=936/m,MP两对映体的分离度R为0.96%。并对20名健康志愿者口服消旋体后0～8h内的尿样进行分析测定。     

人血清白蛋白融合技术研究进展

结合笔者所在课题组的实验研究成果,综述人血清白蛋白融合技术研究进展。人血清白蛋白融合技术是近些年来应用较多的用于改造小分子蛋白和多肽药物的手段。但是众多的研究结果发现将小分子蛋白/多肽和人血清白蛋白融合后会出现一些共性的问题,例如目标蛋白产率低、易降解等。这些共性问题可以通过融合蛋白的优化设计、蛋白酶缺陷宿主的构建、融合基因多拷贝以及与分子伴侣共表达得以解决。     

马钱苷元对人胰腺癌细胞BXPC3的抗肿瘤作用及机制研究

目的 研究山茱萸提取物马钱苷元（Loganetin）对人胰腺癌细胞株BXPC3的体外抗肿瘤作用,并探讨其可能的抗肿瘤机制。方法 本研究共设置两组实验,即对照组和马钱苷元组。采用CCK8（Cell Counting Kit-8）实验检测细胞存活率的改变,流式细胞仪检测马钱苷元对细胞周期的影响。同时利用划痕实验及基质胶Transwell小室实验分别检测马钱苷元对人胰腺癌细胞株BXPC3迁移和侵袭的影响。最后通过Western blot检测AKT-mTOR信号通路相关蛋白AKT、mTOR和S6磷酸化水平的改变。结果 与对照组相比,马钱苷元对人胰腺癌细胞株BXPC3的增殖具有抑制作用,且呈明显的时间和浓度依赖性,100μM马钱苷元作用于BXPC3细胞24、48h的抑制率分别为（21.49±0.01）%、（29.25±0.03）%;马钱苷元能够使细胞周期阻滞于S期并抑制细胞株BXPC3的迁移（p=0.0002）和侵袭(p＜0.0001),下调AKT、mTOR和S6的磷酸化水平。结论 马钱苷元可能通过抑制AKT-mTOR信号通路发挥其抗肿瘤活性。