细胞色素P450 2C19在中国汉族人群不同组织中的分布差异研究

 目的调查中国汉族人群中不同组织中CYP2C19mRNA表达情况。方法运用半定量RT-PCR方法检测了包括肝脏在内的11种组织中CYP2C19mRNA的表达情况,并运用WesternBlotting技术检测了CYP2C19mRNA表达产物即蛋白质的表达。结果11种组织除肝脏以外均未有CYP2C19mRNA的表达,对有CYP2C19mRNA表达的肝细胞组织及不同的细胞株进行的WesternBlotting结果显示,只在肝细胞组织和肝癌细胞株上清液中有CYP2C19酶蛋白的表达。结论通过对不同组织中CYP2C19mRNA分布情况的调查,可以了解组织对外来化合物经CYP2C19酶蛋白的代谢情况,为临床用药提供直接的实验资料。     

ASA法测定细胞色素P4502D6酶缺陷等位基因CYP2D6E

目的：建立细胞色素Ｐ４５０ ２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）第３０２３位Ａ→Ｃ突变成ＣＹＰ２Ｄ６酶活性缺陷的等位基因ＣＹＰ２Ｄ６Ｅ的测定方法。方法：利用等位基因特异扩增法（ＡＳＡ）为基本原理,设计两对引物分别扩增野生型等位基因和突变型等位基因。结果：经３９６例测定,发现２例ＣＹＰ２Ｄ６Ｅ与ＣＹＰ２Ｄ６Ｂ的异突变型纯合子,其表现型均为慢代谢者。     

细胞色素P450 2D6等位基因CYP2D6C的特异扩增法测定

细胞色素Ｐ４５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）第２７０３－５位ＡＡＧ缺失造成表达产物第２８１位赖氨酸缺失的等位基因称为ＣＹＰ２Ｄ６Ｃ．利用等位基因特异扩增法（ＡＳＡ）原理,建立了ＡＳＡ－ＰＣＲ测定ＣＹＰ２Ｄ６的方法．经３９６例测定,说明本法快捷,污染少．测定结果显示ＣＹＰ２Ｄ６Ｃ不属于ＣＹＰ２Ｄ６酶缺陷等位基因,表型仍为快代谢．     

绿原酸抑制低密度脂蛋白非酶糖基化和氧化修饰研究

目的: 研究绿原酸对人体低密度脂蛋白（LDL）非酶糖基化和氧化修饰的抑制作用。方法: 建立LDL非酶糖基化孵育体系,采用紫外-可见分光光度法测定糖基化早期产物（Amodori产物）和中期产物（二羰基化合物）的含量,荧光分光光度计测定糖基化末期产物的含量;建立LDL氧化孵育体系,采用紫外-可见分光光度法测定硫代巴比妥酸反应物（TBARS）和共轭二烯的含量,荧光分光光度法测定色氨酸荧光淬灭强度以及脂褐素、总荧光产物、活性醛和丙二醛的含量,并进一步通过三维荧光等高线特征谱验证。结果: 在LDL糖基化修饰模型中,150 μg/mL和300 μg/mL的绿原酸均能够抑制Amodori产物、二羰基化合物和糖基化末期产物的生成;在LDL氧化修饰模型中,15 μg/mL和25 μg/mL的绿原酸均能够抑制TBARS的生成;5 μg/mL和10 μg/mL的绿原酸对色氨酸荧光淬灭,以及对活性醛、丙二醛、总荧光产物、脂褐素和共轭二烯的生成均有抑制作用。三维荧光等高线特征谱结果与前一致。结论: 绿原酸能够抑制LDL非酶糖基化和氧化修饰。     

人UGT1A3催化黄酮类化合物葡醛酸结合反应定量构效关系研究

目的 建立人UGT1A3催化黄酮类化合物定量构效关系,考察不同结构参数对葡醛酸结合反应的影响.方法 采用半经验量子化学计算法MOPAC-AM1及逐步回归方法对11个黄酮类化合物的结构参数和UGT1A3催化葡醛酸反应的Km值进行定量构效关系研究.结果 所建立的QSMR模型(pKm=-2.207 07+0.002 56HOF+3.212 90 QC5)具有较好的拟合性.结论 分子生成热(HOF)和5位C上的静电荷这两个结构参数是影响其葡醛酸结合活性的主要结构因素.     

层析凝胶DEAE Sepharose Fast Flow分离纯化5’-混合脱氧单核苷酸

目的针对5’-混合脱氧单核苷酸的理化特性,研究利用DEAE Sepharose Fast F low凝胶分离纯化5’-混合脱氧单核苷酸。方法上样缓冲液采用20 mmol/L Tris,pH9.0,上柱量≤7.5mg/mL.gel,上柱流速5mL/m in,洗脱缓冲液采用20 mmol/LTris+0.025mol/L NaC l,pH 9.0,洗脱流速0.5mL/m in。结果实验结果发现dCMP,dAMP,dTMP的收率为95%以上,dGMP的收率为85%以上,所获得的混合脱氧单核苷酸经高效液相色谱检测色谱纯达98%以上。     

等位基因特异扩增法分析CYP2C19m2突变

[目的]建立一步PCR法测定CYP2C19m2等位基因。[方法]根据等位基因特异扩增法（ASA）原理，设计两对分别对应于野生型基因和突变型基因的引物，经PCR扩增后进行基因分型。[结果]通过对60名随机健康受试者CYP2C19m2等位基因进行基因分型，发现其中49名为野生到纯合于，11名为CYP2C19m2杂合子，没有发现CYP2C19m2纯合子。[结论]ASA法可用于CYP2C19m2位基因分型，该法具有简便、快速、经济、可靠等优点。     

多核苷酸磷酸化酶的研究进展(综述)

多核苷酸磷酸化酶(Polynucleotide Phosphorylase EC.2.7.7.8,简称PNP酶)具有催化ADP,IDP等末端磷交换反应、催化核苷二磷酸的聚合及多核苷酸的磷酸解的作用,被广泛地应用于核酸的研究.作为工具酶的PNP酶已被人们熟知,但作为生物体中的PNP酶却没有得到人们的重视.近年,一些研究结果表明,PNP酶在生物体中也有非常重要的意义.本文就该酶的分子结构、基因结构、作用机理和生理功用四个方面作一简单综述.     

从肺癌组织提取高纯度总RNA方法的优化及应用

目的 通过对传统TRIzol提取组织中RNA的方法进行优化,建立一种较为简便、高效、经济的提取方法,并用优化后的方法检测非小细胞肺癌组织中ERCC1、RRM1和BRCA1的mRNA表达水平。方法 非小细胞肺癌的组织标本(包括肿瘤组织和正常组织)36例,采用传统和优化后的方法提取肺癌组织及正常组织中RNA,以SYBR Green荧光实时定量PCR分析各组织中ERCC1、RRM1、BRCA1以及管家基因GAPDH的mRNA表达水平。结果 传统方法的RNA浓度和纯度分别为(0.76±0.07)mg·mL^-1和1.87±0.04,优化方法的RNA浓度和纯度分别为(1.12±0.07)mg·mL^-1和1.95±0.03;琼脂糖凝胶电泳表明RNA没有降解,各个引物的熔解曲线均呈单峰,特异性良好。实时荧光定量显示,肺癌组织中ERCC1、RRM1和BRCA1的相对mRNA表达高于正常组织;ERCC1和BRCA1在不同病理类型(腺癌、鳞癌)的肿瘤组织中表达无显著性差异,RRM1在肺鳞癌中的表达显著高于腺癌(P<0.05);不同性别中的基因表达均无显著性差异。结论 相比传统方法,利用优化后的方法提取样本的总RNA浓度、纯度和完整性均显著提高,能满足各种基因表达和定量检测实验的需要。非小细胞肺癌中ERCC1、RRM1和BRCA1的表达水平与肿瘤增殖活性密切相关,与临床肿瘤的病理类型也有一定的相关性。