雷公藤内酯醇诱导淋巴细胞凋亡的作用与细胞活化程度的关系

目的　通过观察雷公藤内酯醇诱导 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠脾细胞凋亡与细胞活化程度的关系,探讨该化合物免疫抑制的作用机理。方法　 以脾淋巴细胞为研究对象, Ｐ Ｈ Ａ Ｐ、 Ｐ Ｍ Ａ 和ｒｈ Ｉ Ｌ２ 为有丝分裂原活化淋巴细胞。结合荧光染色法, Ｄ Ｎ Ａ 凝胶电泳及 Ｄ Ｎ Ａ 片段测定等方法,检测雷公藤内酯醇诱导凋亡的作用。结果　（１） 雷公藤内酯醇能够造成活化的淋巴细胞凋亡,并呈浓度依赖性;（２） 雷公藤内酯醇不能使处于静止状态的脾淋巴细胞凋亡;（３） 雷公藤内酯醇诱导淋巴细胞凋亡的作用,与淋巴细胞的活化程度和增殖反应程度密切。结论　雷公藤内酯醇不能造成静止状态的淋巴细胞发生细胞凋亡,只能够诱导已活化淋巴细胞发生细胞凋亡,并以此影响机体的免疫功能。     

利用CRISPR/Cas9构建稳定遗传的斑马鱼TYRO3纯合突变体

目的:本研究利用CRISPR/Cas9构建稳定遗传的斑马鱼TYRO3纯合突变体,为利用斑马鱼研究TYRO3功能构建模型。方法:通过PCR和测序鉴定基因型,筛选获得TYRO3基因突变斑马鱼。通过观察斑马鱼水肿的表型以及用透射电镜观察足突融合的情况了解TYRO3突变的影响。结果:我们得到了两个移码的TYRO3突变体,每个TYRO3突变体在F2中获得2和5个纯合子,并且F0杂合子突变率可达50%。TYRO3基因突变斑马鱼出现卵黄囊、心包及眼周水肿,电镜下出现明显的足突融合。结论:本研究成功构建了TYRO3基因突变的纯合子斑马鱼,并初步证实,TYRO3突变会导致斑马鱼肾脏足细胞损伤。     

雷公藤甲素干预足细胞病变的体外观察

目的：雷公藤甲素对Heymann肾炎和嘌呤霉素肾病大鼠的疗效及其对足细胞病变的影响提示，雷公藤甲素有可能直接作用于足细胞，从而改善其病变状况。本研究借助小鼠足细胞系，体外观察了雷公藤甲素对足细胞损伤的保护和修复作用，并对其作用机制进行了研究。方法：体外采用氨基核苷嘌呤霉素（puromycin aminonucleoside，PAN）致足细胞损伤模型。观察雷公藤甲素对足细胞损伤的保护作用研究中，雷公藤甲素与足细胞预孵育30min后，再加入含PAN的培养基，继续作用24h；观察雷公藤甲素对足细胞损伤的修复作用研究中，PAN作用足细胞24h，造成足细胞明显损伤后，再加入含或不含雷公藤甲素的培养基，继续培养3天。免疫荧光法和流式细胞仪分析足细胞骨架相关蛋白F-actin和Synaptopodin的变化，并进一步观察了细胞内调节骨架装配的Rho／ROCK信号通路的活性，即采用Western Blot检测ROCK-Ⅰ底物——肌球蛋白磷酸酶结合亚单位（MBS）磷酸化水平，以及Rho／ROCK信号通路选择性阻断剂Y-27632对雷公藤甲素作用的影响。同时采用免疫荧光法和流式细胞仪分析足细胞裂孔膜相关分子Nephrin和Podocin在足细胞的分布及表达量的变化。结果：正常分化足细胞F—actin呈丝状结构，密度大，丝强劲有力，沿细胞极性分布；Synaptopodin呈颗粒状沿细胞骨架分布。裂孔膜蛋白Nephrin沿足细胞膜和细胞骨架分布，Podocin呈线状均匀分布于胞浆内，PAN作用24h后，细胞足突回缩，F—actin几乎完全解聚，Synaptopodin表达消失。Nephrin和Podocin表达减弱，正常丝状结构消失。而经过雷公藤甲素的预处理，PAN诱导的足细胞损伤明显减弱，足细胞未表现出上述骨架结构的改变，Synaptopodin表达没有明显减弱。同时我们的结果显示，在PAN造成足细胞明显损伤后再加入雷公藤甲素，足细胞损伤能够得到一定修复，细胞内重新出现极性分布的微丝，同时，Synaptopodin的表达也得以修复。Rho／ROCK信号通路研究显示，100μg／ml PAN明显降低Rho／ROCK通路活性。雷公藤甲素能有效遏制MBS磷酸化水平的降低，维持足细胞Rho／ROCK通路的活性状态。Rho／ROCK信号通路选择性抑制剂Y-27632可阻断雷公藤对足细胞骨架结构的保护作用。此外，对裂孔膜蛋白Nephrin，Podocin的研究表明，不论是在预防组和治疗组，PAN对Nephrin和Podocin的损伤可在一定程度上被雷公藤甲素预防和修复。结论：雷公藤甲素可稳定足细胞的细胞骨架，拮抗PAN对足细胞的损伤。在足细胞损伤已经发生后，雷公藤甲素可逆转足细胞的损伤，修复足细胞骨架结构和相关分子的表达。雷公藤甲素的上述作用与细胞内Rho／ROCK信号通路密切相关。雷公藤甲素对足细胞的影响可能是其降低肾小球肾炎患者尿蛋白的重要机制之一。     

雷公藤内酯醇对人树突状细胞体外发育及免疫学功能的影响

目的：观察雷公藤内酯醇对人树突状细胞（dendritic cells,DC）体外发育及免疫学功能的影响。方法：人DC体外培养时,加入不同剂量（0、0.3、1.0、3.0、10、30、100μg/L）的雷公藤内酯醇处理,观察DC的生成情况,以流式细胞仪分析各处理组生成细胞的免疫表型及抗原内吞能力,体外混合淋巴细胞反应检测各组细胞的抗原呈递功能,TUNEL方法检测细胞凋亡。结果“体外培养7天后,10μg/L及以上剂量雷公藤内酯醇处理组细胞大部分破坏死亡。低剂量（0.3、1.0、3.0μg/L）雷公藤内酯醇处理对生成的DC的形态及数量、共刺激分子的表达、内吞蛋白质抗原OVA－FITC的能力、同种T细胞的免疫刺激活怀均无显著影响;但正常DC与同种T细胞混合培养时,雷公藤内酯醇以剂量依赖性方法抑制T细胞的增生;正常DC以30μg/L雷公藤内酯醇处理24h,有54％的细胞发生凋亡;结论：低剂量（0.3、1.0、3.0μg/L）的雷公藤酯醇处理对DC的体外发育及免疫功能均无显著影响,高剂量则阻止DC发育生成及诱导DC调亡。     

肾组织中葡萄糖转运蛋白与糖尿病肾病的关系

目的：了解葡萄糖转运蛋白－１（ＧＬＵＴ１）和葡萄糖转运蛋白－４（ＧＬＵＴ４）在糖尿病患者肾组织中的分布特点及其与糖尿病肾病（ＤＮ）发生及病情进展的关系。方法：应用免疫组化技术和特异性抗体，对１９例ＤＮ和４例糖尿病无肾病患者组织中ＧＬＵＴ１和ＧＬＵＴ４进行了观察，并结合肾脏病理，血糖水平和ＧＬＵＴ１基因型进行了分析。结果：肾组织中ＧＬＵＴ１和ＧＬＵＴ４主要分布在部分肾小球，肾小管和间质血管。肾小球内     

HPLC柱切换法血浆直接进样测定糖肾平

采用HPLC柱切换技术,以Merck Lichroprep RP2(25～40μm)为预处理柱填料,以水为预处理流动相,以0.2mol/L乙酸-乙酸铵为净化清洗液,血浆直接进样,在线富集净化样品。血浆样品以0.2ml/min慢速转移通过预处理柱,净化回收率达80%。以ShimpackCLC-ODS为分析柱(15cm×6mm,ID),甲醇-异丙醇-0.2mol/L 乙酸铵(61:5:34)为分析流动相,310nm波长检测,外标法定量测定人体血浆中糖肾平的浓度。血浆样品仅需稀释后即可进样,净化富集样品操作简便,预处理柱可长期反复进样使用。血浆中最低检测浓度为30ng/ml,日内变异系数为2.0%～5.4%,日间变异系数为2.4%～2.7%,在浓度为60～2020ng/ml血浆范围内呈线性关系。     

吖啶橙—碘化丙啶染色法检测补体依赖的淋巴细胞毒活性

移植受者体内预存的循环抗体是诱发超急性排斥反应的主要原因 ,目前各实验室将淋巴细胞毒交叉配合试验作为术前筛选抗体的常规方法。补体依赖淋巴细胞毒活性 (ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｄｅｐｅｎｄｅｎｔｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ,ＣＤＣ)检测的基本原理是将被检血清与淋巴细胞及补体共同温育 ,如果被检血清中含有相应的细胞毒抗体 ,则可以和淋巴细胞表面抗原特异性结合 ,激活补体 ,引起细胞膜破损 ,细胞死亡 ,细胞膜通透性增加 ,染料渗入细胞内 ,使死亡细胞染上颜色 ,根据着色细胞的数目 ,可以估计淋巴细胞毒的强度。对死亡细胞染色计数 ,目…     

不同负压引流法防止乳腺癌术后皮下积液的观察及护理

目的　评价负压引流在预防乳腺癌术后皮下积液中所起的临床作用。方法　本文通过472例乳腺癌术后随机采用一次性负压吸引球、一次性简易胸腔负压引流瓶、管道负压吸引三种方法行创口负压引流 ,对术后皮下积液发生率进行对比观察。结果　一次性负压吸引球与一次性简易胸腔负压引流瓶比较 ,P >0 .0 5 ,无显著性差别 ,而管道负压吸引与上述两种引流方法比较 ,P <0 .0 5 ,均有显著性差异。结论　管道负压吸引加预防措施是预防乳癌术后皮下积液等并发症的有意义的方法     

医用弹力袜预防开胸术后下肢深静脉血栓形成的效果观察

目的探讨医用弹力袜预防开胸术后下肢深静脉血栓形成的临床疗效。方法将50例胸外科术后的患者随机分成两组,各25例。实验组采用常规预防措施加用医用弹力袜;对照组单纯采用常规预防措施。术后3～10d行血管无创多普勒超声检查或患侧静脉造影,以了解深静脉血栓发生的情况。结果两组疗效比较．P〈0．05,差异有显著意义,实验组明显优于对照组。结论医用弹力袜能安全有效地预防术后深静脉血栓的形成。     

Stanford A型主动脉夹层患者术后谵妄风险预测评分模型的构建与效果验证

目的 构建Stanford A型主动脉夹层患者术后谵妄风险预测评分模型,并验证其预测效果.方法 选取2014年1月—2020年6月温州市某三级甲等综合性医院心脏外科收治的Stanford 245例A型主动脉夹层术后住院患者作为研究对象,回顾性收集相关资料.按术后是否发生谵妄分为谵妄组(n=51)和非谵妄组(n=194)...