坏变细胞的DNA对HpaⅡ限制性片段分析法测量DNA甲基化水平的干扰作用

用~3H-TdR在不同时期标记细胞DNA,以区别在HpaⅡ限制性片段放射活性分析中的DNA系来自增殖中的或坏变中的细胞.实验证明MNNG处理后存活的细胞中并无DNA甲基化水平的变化.而经MNNG或Hanks液处理的脱落细胞DNA,在HpaⅡ水解前后其DNA片段的L_w皆明显降低,并可干扰对新复制DNA的HpaⅡ识别位点的分析.因此作者认为,在缺乏严格设计以除外上述因素的体系中,作出关于细胞DNA甲基化状态变化的结论是不可信的.     

细菌波动试验

在一系列检测环境诱变/致癌物的生物学短期试验中,Ames试验是行之有效、广为应用的试验方法。但对于弱的、具有毒性的和低浓度的诱变/致癌物的检测,Green等建立的波动试验具有其优越性,可作为Ames试验的补充方法。     

用^32P后标记法分析沥青和非沥青接触者外周血单个核细胞中DNA加成物

本研究用~(32)P后标记法分别对铺柏油路工人、献身员、大学生外周血单个核细胞DNA加成物进行 了分析,结果发现他们分别可分离到1-7、0-7、0-5个加成物斑块,其相对加成物标记量(RAL,加成物个数/10~7个核苷酸)分别为1.34-4.24(2.29±0.88)、0-0.93(0.50±0.48)、0-0.32(0.16±0.18).经统计学处理后,铺柏油路工人组与后2组之间有非常显著性差异(P<0.01).提示:沥青环境中的暴露对人     

MNNG非定标性诱发基因突变的序列特异性分析

我们以穿梭质粒pZ186作为探针已在猴肾vero细胞中证实了非定标性突变的存在，本实验进一步对突变子质粒中的靶基因supF tRNA基因作序列分析，以揭示非定标性突变的序列特异性．结果表明：89％(24／27)的碱基置换发生在G：C碱基对，59％(16／27)为颠换，41％(11／27）为转换，主要为G：C-T：A颠换和G：C-A：T转换；48％的碱基置换发生在supF tRNA基因的6个位点中，     

低浓度N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍对HeLa细胞DNA聚合酶及拓扑异构酶Ⅱα mRNA表达水平的影响

利用定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，研究了低浓度甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ聚合酶（Ｐｏｌα，β，δ，ε）及拓扑异构酶Ⅱα（ＴｏｐⅡα）ｍＲＮＡ表达水平的影响．发现经０．２μｍｏｌ·Ｌ－１ＭＮＮＧ处理２．５ｈ后，ＨｅＬａ细胞ＰｏｌβｍＲＮＡ水平在６－２４ｈ内升高约１倍，而Ｐｏｌα，δ，ε及ＴｏｐＩαｍＲＮＡ水平则无明显改变．提示ＰｏｌβｍＲＮＡ水平改变可能参与ＭＮＮＧ诱发细胞遗传不稳定的发生．     

甲基硝基亚硝基胍诱发的遗传不稳定细胞DNA聚合酶βmRNA表达水平研究

目的和方法：本实验室曾报道，低浓度０－２ μｍｏｌＬ 烷化剂甲基硝基亚硝基胍（ Ｎ－ ｍｅｔｈｙｌ－ Ｎ′－ ｎｉｔｒｏ － Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ ， ＭＮＮＧ） 可以诱导哺乳类细胞遗传不稳定状态。为明确其发生机制，本文利用定量ＲＴ－ ＰＣＲ 方法，研究了该低浓度ＭＮＮＧ 对人ＨｅＬａ 及猴肾ｖｅｒｏ 细胞ＤＮＡ 聚合酶β（ｐｏｌ β） ｍ ＲＮＡ 表达水平的影响。结果：经０－２ μｍｏｌＬ ＭＮＮＧ２ ．５ ｈ 处理后，ＨｅＬａ 细胞ｐｏｌ βｍ ＲＮＡ 水平在６ ～２４ ｈ 内升高约１ 倍；而ｖｅｒｏ 细胞ｐｏｌ βｍ ＲＮＡ 水平在１２ ～３０ ｈ 内亦升高１倍左右。结论：提示ｐｏｌ βｍＲＮＡ 水平改变可能参与ＭＮＮＧ 诱发细胞遗传不稳定的发生     

细胞周期对细胞ADPRT基础活性及DNA损伤剂诱发活性的影响

真核细胞染色质中的腺苷二磷酸核糖基转移酶(ADPRT)是维持有效DNA切除修复所必需的。本研究证明在通透化了的FL细胞中ADPRT活性呈细胞周期依存性波动。它的活性峰值见于DNA合成峰值后的4～6小时;同步培养于G_1期的细胞在按触DNA-损伤剂,甲基硝基亚硝基胍(MNNG)、甲磺酸甲酯(MMS)及4-硝基喹啉氧化物(4NQO)后ADPRT活性明显升高。在细胞周期的不同阶段,MNNG/4NQO对ADPRT的刺激作用与细胞周期对它的影响呈叠加作用。但MMS对ADPRT活性的刺激作用却完全依存于基础酶活性。在基础酶活性最高时,MMS几乎不显示其ADPRT刺激作用。因而认为DNA-损伤剂引起的ADPRT刺激作用有不止一个机制存在。同步于G_1期的细胞最适合于显示DNA损伤后的ADPRT活性升高。上述细胞周期性影响可能同细胞周期中DNA修复的顺序性变化以及细胞对致癌物敏感性的周期性变化有关。     

SOS突变和突变抑制剂及其作用机制的研究

DNA损伤诱发的SOS反应和基因突变,以及SOS突变抑制作用是预防医学上亟待深入研究的课题。本研究对SOS突变和SOS突变抑制剂及其机制和相关技术进行了深入探索。     

FL细胞中细胞色素P450同工酶的诱导及其在诱变剂生物学检测系统中的应用

以芳烃羟化酶(AHH)、乙氧基异吩噁唑-O-去乙基酶(EROD)、乙氧基香豆素-O-去乙基酶(ECOD)及氨基比林-N-去甲基酶(APND)为标志酶、3-甲基胆蒽、β-萘黄酮、去甲肾上腺素及苯巴比安钠为诱导剂证明人羊膜FL细胞系有可诱导的细胞色素P450ⅠA及ⅡB基因的表达,有较宽的药物代谢酶谱。EROD及APND的最大诱导反应见于3-甲基胆蒽和去甲肾上腺毒复合诱导时。基础和诱导的AHH具有典型的细胞色素     

双-(O,O-二乙硫代磷酰)-二硫物诱发人培养细胞系的程序外DNA合成

双-(O,O-二乙硫代磷酰)二硫物〔Bis-(O,O-diethylphosphinothioyl)-disulfide〕(简称“二硫物”)是一种新合成的有机磷杀菌剂。“二硫物”的结构式是:田间试验证明:它对水稻白叶枯病的防治效果相当于或优于5-氧吩嗪(叶枯净);对水稻纹枯病和瓜类白粉病也有防治作用。而且它对柑桔、山楂、苹果和棉花红蜘蛛类也有防治作用,故可用作杀螨剂。我们发现