研究生培养工作方面的一点体会

我校药理学教研室在195 6年就开始招收培养研究生,1978年研究生教育制度恢复后获得国家首批硕士学位授予权。改革开放二十多年来,毕业硕士生约4 0余人和博士生8人。目前在读硕士和博士研究生有2 0余人。在研究生教育长期的探索实践中,现将一些体会和感想与大家共同进行交流和探     

溶栓酶溶栓作用的实验研究

目的研究溶栓酶(TE)对血栓的溶解作用.方法家兔血栓模型采用动-静脉旁路法并测定血液纤溶和凝血系统相关参数指标.结果 TE(3.75、7.50 MIU/kg)对家兔动-静脉旁路所形成血栓有明显溶栓作用,可明显减轻血栓干、湿重量,并可明显降低血浆纤溶酶原含量,使血浆纤维蛋白降解产物转呈阳性反应.结论 TE有明显的血栓溶解作用.     

瑞芬太尼预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的KATP通道在瑞芬太尼预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤保护作用中的角 色。方法 雄性SD大鼠48只,体重200～250 g,建立Langendorff大鼠离体心脏模型,随机分为6组: 每组8只。缺血再灌注组(I／R组):缺血前用Krebs-Ringer灌注液持续灌注45 min;瑞芬太尼预处理组 (RPC组):缺血前用含100μg／L瑞芬太尼的灌注液灌注5 min,停5 min,共3次。HMR RPC、5-HD RPC组分别用含1×10-4mol／L肌浆网KATP(sac-KATP)通道阻断剂HMR-1098、1×10-5mol／L线粒体KATP (mito-KATP)通道阻断剂5-羟基葵酸盐(5-HD)与上述浓度的瑞芬太尼混合液的灌注液灌注,时间从瑞 芬太尼预处理前10 min至瑞芬太尼预处理后5 min(共计45 min)。HMR、5-HD组分别在缺血前用含有 上述两种KATP通道阻断剂的灌注液灌注45 min。测定心脏稳定15 min(基础值)、缺血前即刻、缺血30 min、再灌注120 min时冠脉流量(CF);测定再灌注5、10 min时冠脉流液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;再灌 注120 min时处死大鼠,计算心肌缺血梗死区(IS)体积及IS面积与缺血危险区面积比值(IS/AAR)。结 果 与I／R组比较,RPC、HMR RPC组IS体积和IS／AAR降低,RPC组在再灌注5、10 min时LDH活性 降低(P<0．01);5-HD RPC、HMR和5-HD组IS体积和IS／AAR差异无统计学意义(P>0．05)。与 RPC组比较,5-HD RPC、HMR和5-HD组IS体积和IS／AAR增大,5-HD RPC、HMR和5-HD组在再灌 注5、10 min时LDH活性升高(P<0．01)。与基础值相比,RPC组缺血前即刻CF增高,HMR RPC组降 低(P<0．05或0．01)。结论 通过激活心脏mito-KATP通道瑞芬太尼预处理对大鼠离体心脏缺血再灌 注损伤有一定的保护作用。     

抗血小板溶栓素对局灶性脑缺血/再灌注大鼠脑损伤的作用观察

目的:观察抗血小板溶栓素(anti-platelet thrombolysin,APT)对缺血性脑损伤的保护作用并初步探讨其作用机制。方法:SD大鼠,随机分为假手术组(Sham)、模型组(缺血再灌注组)、阳性组(依达拉奉注射液)、APT高、中、低组。双侧颈动脉结扎,建立脑缺血模型,测定大鼠脑含水量,HE染色观察脑组织病理改变;线栓法建立大鼠脑缺血/再灌注模型,进行行为学评分,酶联免疫法(ELISA)及免疫组化测定脑组织中Toll样受体4(TLR4)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、Bax蛋白含量。结果:与模型组比较,APT高、中剂量组可明显改善缺血再灌注后大鼠神经功能障碍症状,降低脑水肿程度,改善缺血后脑组织的病理改变,明显降低缺血后脑组织中TLR4、JNK、Bax蛋白表达。结论:APT对缺血性脑损伤有较好的保护作用,其机制可能与抑制脑组织中TLR4/JNK/Bax信号通路表达,从而抑制细胞凋亡有关。     

3-巯基丙酮酸硫转移酶产生的硫化氢在大鼠脑血管张力和脑血管内皮细胞缺氧损伤中的作用

目的研究 3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,3?MST)产生的硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)在大鼠脑血管张力和血管内皮细胞缺氧损伤中的作用。方法将大鼠脑基底动脉血管按随机数字表法分为 Krebs Henseleit缓冲液对照组、 3MP组、 ASP组、 SIN?1组、 ASP＋SIN?1组、 3MP＋SIN?1组。通过微血管张力仪来测量大鼠脑基底动脉血管的张力,收集张力仪浴槽中的灌注液并测定灌注液中硫化氢含量。原代培养大鼠脑血管内皮细胞,将细胞按随机数字表法分为对照组、模型组、 3MP组、 ASP组、 SIN?1组、 3MP＋SIN?1组。除对照组外,其他 5组建造急性缺氧 4h模型,用药组分别给予相应的药物预处理。然后测定缺氧损伤后内皮细胞活力,上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,以及活性氧的含量。结果 3?MST底物硫基丙酮酸二水合物(3?mercaptopyruvate,3MP)和 3?MST激动剂 5?氨基 ?3?(4?吗啉基)?1,2,3?恶二唑鎓盐酸盐(3?morpholino sydnonimine hydrochloride,SIN?1)能够舒张血栓素 A2受体激动剂 U46619预收缩的大鼠脑基底动脉,最大收缩率为(94.67± 3.99)%;与单独使用 SIN?1相比, 3?MST抑制剂天门冬氨酸(L?aspartic acid,ASP)能够减弱 SIN?1舒张血管的作用,而 3MP能增强 SIN?1的血管舒张作用。同时, 3MP和 SIN?1可以增加血管灌注液中的硫化氢的含量(90.09±5.36)μmol,而 ASP可以减少 SIN?1增加的硫化氢。与急性缺氧组相比, 3?MST抑制剂 ASP能够进一步降低细胞活力,升高 LDH活性;而 3?MST激动剂 SIN?1和底物 3MP能够改善细胞损伤,提高细胞活力,降低 LDH活性(112.63±8.08)U/L,降低活性氧。结论 3?MST产生的硫化氢可介导脑血管舒张,保护脑血管内皮细胞。     

δ受体在吗啡预处理减轻慢性心力衰竭大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价δ受体在吗啡预处理减轻慢性心力衰竭大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠,体重220 ～ 250 g,尾静脉注射阿霉素2 mg/kg,每周1次,共6次,末次注射后2周取心脏,分离、培养心肌细胞,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=8):对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)、吗啡预处理组(MPC组)、吗啡预处理+阿片受体拮抗剂纳洛酮组(MPC+Naloxone组)和吗啡预处理+δ受体拮抗剂纳曲吲哚组(MPC+ Natrindole组).C组正常培养,余组细胞行缺氧3h,复氧1h.MPC组于缺氧前即刻行吗啡预处理.MPC+ Naloxone组和MPC+ Natrindole组于吗啡预处理前10 min时分别加入纳洛酮(终浓度10 μmol/L)和纳曲吲哚(终浓度1μmol/L).于复氧1h时采用MTT法测定心肌细胞活力,检测乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性,Hoechst 33234染色法检测心肌细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率.结果 与C组比较,H/R组、MPC+ Naloxone组和MPC+Natrindole组心肌细胞活力降低,LDH、CK活性和心肌细胞凋亡率升高(P＜0.05);与H/R组比较,MPC组心肌细胞活力升高,LDH、CK活性和心肌细胞凋亡率降低(P＜0.05),MPC+ Naloxone组和MPC+Natrindole组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 吗啡预处理通过激活δ受体抑制慢性心力衰竭大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

水蛭对实验性脑出血后病理学改变的影响

目的：观察大鼠实验性脑出血经饲喂水蛭后的病理学改变。方法：将５６只ＳＤ大鼠分为水蛭大、中、小剂量治疗组（分别相当于生药９００、４５０、２２５ｍｇ·ｋｇ－１），实验对照７天、１４天及假手术组。利用脑立体定向仪在左尾状核处注入２５μｌ自体血制作脑出血模型。应用ＨＥ、ＶＧ、银染、胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色及透射电镜观察脑组织的病理形态学改变并测量脑水含量。结果：药物治疗组脑水肿、脑组织坏死及神经元缺血变化减轻；新生毛细血管、格子细胞、星形细胞数目明显增加，胶质纤维生成增多。大剂量治疗组作用最明显。结论：水蛭对实验性鼠急性脑出血有明促进毛细血管和胶质细胞的增生的作用，从而可能有利于血肿的清除     

脑阿片受体在侧脑室注射吗啡预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

Objective To investigate the role of cerebral opioid receptors in the protective effects of intracerebro-ventricular (ICV) morphine preconditioning (MPC) against myocardial ischemia-reperfusion (I/R) injury in rats. Methods Male SD rats weighing 320-370 g were used in this study. A needle was inserted through a surgically created hole into the cerebro-ventricle using a stereotactic instrument and fixed. Sixty male SD rats in which ICV needle was successfully placed without complication were randomly divided into 10 groups of 6 animals each. In group I sham operation was performed (S). In group]] myocardial I/R was produced (I/R) . In group Ⅲ (ischemic preconditioning), the animals were subjected to 3 episodes of 5 min myocardial ischemia at 5 min intervals before ischemia (IPC) . In group IV morphine was given ICV in 3 repeated doses of 1 μg/kg at 5 min intervals before ischemia (MPC). Three types of opioid receptor antagonists -nor-binaltorphimine (nor-BNI) (κ receptor antagonist), D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Orn-Thr-Pen-Thr-NH2(CTOP) (μ receptor antagonist) and naltrindole (NTD) (S receptor antagonist) 15 nmol were given ICV in group V . VI and VIⅡI respectively at 10 min before MPC. In group VIII,IX and X , nor-BNI, CTOP and NTD 15 nmol were given ICV respectively at 40 min before ischemia. Myocardial I/R was produced by occlusion of left anterior descending branch of coronary artery for 30 min followed by 120 min reperfusion. At the end of 120 min, femoral venous blood samples were taken for determination of lactate dehydrogenase ( LDH) and creatine kinase (CK) activities and calcitonin gene-related peptide (CGRP) concentration. The animals were then killed and hearts removed for measurement of area at risk (AAR) and infarct area (IA) . IA/AAR ratio was calculated. Results The size of IA was smaller and IA/AAR ratio lower and significantly less LDH and CK and more CGRP were released in group IPC and MPC ( group Ⅲ and IV) than in group I/R (group II ) . The protective effects of MPC were abolished by pretreatment with nor-BNI, CTOP and NTD. Conclusion Cerebral μ, k and δ opioid receptors are involved in the protective effects of ICV morphine preconditioning against myocardial I/R injury through CGRP released from peptidergic nerve fibers of heart.     

心得快抗大鼠心动过缓的作用

目的　研究心得快抗心动过缓作用。方法　分别用普萘洛尔和乙酰胆碱制造大鼠心率减慢模型 ,用硫代巴比妥酸测定脂质过氧化物含量 ,用Green法测一氧化氮的含量。结果　ig心得快在 40～ 16 0mg·kg-1范围内抑制普萘洛尔心率减慢和缩短乙酰胆碱致心率下降的持续时间 ,并可降低大鼠心肌组织一氧化氮的含量。 16 0mg·kg-1心得快还降低大鼠心肌组织脂质过氧化产物的含量。结论　心得快有一定的抗心动过缓作用 ,其作用机制可能与抑制一氧化氮生成及抗氧化作用有关。     

金丝桃苷抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡作用的机制

目的研究金丝桃苷(hyperin,Hyp)对大鼠心肌缺血再灌注诱导的细胞凋亡的保护作用。方法用荧光显微镜和电子显微镜观察;原位末段标记法(TUNEL)和流式细胞术检测等。结果Hyp(25,50 mg·kg^-1)对缺血30 min后再灌注3.5 h导致大鼠心肌细胞凋亡有保护作用;对培养的乳大鼠心肌细胞缺氧6 h再给氧24 h引起的细胞凋亡,Hyp(0.5～50.0 μmol·L^-1)可以减少凋亡细胞的形成。结论金丝桃苷对缺血再灌注引起的大鼠心肌细胞损伤有保护作用;其作用机制可能与金丝桃苷抗心肌细胞凋亡有关。