无神经节细胞症大鼠结肠上皮离子转运的变化

目的 建立一种适合骨髓间充质干细胞（mesenchymal stemcells，MSCs）移植的实验性无神经节细胞症大鼠模型，并探讨模型大鼠结肠上皮离子转运的变化。方法8～9周龄SD大鼠80只，随机分为二组。氯胺酮麻醉下开腹，实验组用0．1%苯扎氯铵（benzalkonium chloride，BAC）处理大鼠降结肠浆膜40min，温盐水冲洗后关腹，对照组用生理盐水代替苯扎氯铵。分别于术后1、2、3、4、8周进行大体观察、钡灌肠X线检查，结肠测压、取处理段结肠行组织学检查，利用短路电流技术检测结肠上皮离子转运的变化。结果BAC处理后1周，实验组大鼠出现腹胀，处理段结肠狭窄，反射性收缩消失，近端结肠扩张，且随着时问延长症状加重。组织学检查发现BAC处理后1周结肠神经节细胞明显减少、空泡变，3周后完全消失。短路电流检测提示，与对照组比较，实验组大鼠结肠上皮各时间点跨膜电压、基础电流明显降低，而钠离子吸收电流占基础电流的百分比升高。另外，由Forskolin所引起的氯离子分泌电流也明显高于对照组，但二苯胺-2，2’-二羧酸阻断Forskolin所引起的Isc的百分比下降且小于1。而结肠跨膜电阻二组之间无差异。结论①采用0．1％BAC处理降结肠浆膜成功建立了实验性无神经节细胞症大鼠模型，为进一步结肠内MSCs移植分化为神经细胞的研究奠定了基础；②实验性无神经节细胞症大鼠模型结肠黏膜屏障功能未受损伤，结肠上皮离子转运功能紊乱，提示巨结肠大便排空困难除与失神经之后的平滑肌和括约肌功能失调有关外，可能还与结肠离子转运的蛮化有关。     

长寿原来有指标——从美国调高老人高血压标准谈起

美国老人高血压标准为160/90毫米汞柱 高血压的确是中老年人致死的重要原因之一,但高血压并不是80岁以上高龄老人的危险因素。研究发现,近九成的百岁老人患有高血压,而他们都能独立生活。     

肠上皮内淋巴细胞对肠上皮屏障功能的影响

目的：研究在痢疾志贺菌F2a-12脂多糖刺激下，大鼠小肠上皮内淋巴细胞（IEL）对人结肠癌上皮细胞系Caco-2屏障功能的影响。方法：新鲜分离的大鼠小肠IEL与Caco-2共培养，并用F2a-12LPS刺激共培养细胞。通过检测短路电流、紧密连接相关蛋白表达及透射电镜来反映上皮屏障功能的变化。结果：共培养后跨上皮电阻增加，但在LPS刺激后显著降低；紧密连接相关蛋白ZO-2mRNA表达在共培养后增加，LPS刺激后共培养细胞ZO-1mRNA表达显著下降；透射电镜下可见共培养后细胞间紧密连接显著增强，但在LPS刺激后共培养细胞间的连接几乎消失。首次在电镜下发现上皮细胞与IEL间有连接样结构的存在，为其相互作用提供了形态学的证据。结论：IEL对上皮屏障功能具双向调节作用，在生理状态下增强，但在感染信号存在时降低。     

川芎嗪在促进大鼠结肠上皮细胞Cl-和HCO3-分泌中的作用

目的探讨川芎嗪对大鼠结肠上皮水、电解质转运的影响和内在的机制.方法在药物和特异性通道阻断剂的作用下,用短路电流(Isc)技术,体外测量结肠上皮短路电流的变化.结果离体大鼠远端结肠,在基础状态下的跨上皮电位差(PD)和Isc分别为(-5.5±0.8)mV(n=8)(黏膜面为负)和(60.3±6.7)μA/cm2(n=16),Rt为(94.9±5.9)Ω@cm2.在结肠上皮的基底膜加入川芎嗪(0.01～5 mmoL/L),能记录到一个呈剂量依赖性升高的短路电流,EC50为0.5 mmol/L(n=16);将Cl-或HCO3-从溶液中替换,分别抑制了该电流的58.4%(n=5,P＜0.01)和70.8%(n=4,P＜0.01),2种离子都被替换时,该电流减少了98.1%(n=6,P＜0.001);川芎嗪在结肠上皮产生的短路电流能被顶膜Cl-通道阻断剂DPC(2 mmol/L)(一种非选择性的Cl-通道阻断剂)和glibenclamide(1mmol/L)[囊性纤维变性跨膜电导调节器(CFTR)的特异性阻断剂]完全阻断,但对DIDS(100 mmol/L)[Ca2+激活的Cl-通道(CaCC)阻断剂]不敏感;在结肠上皮的顶膜加入Na+通道阻断剂amiloride(10 mmol/L)或将Na+从顶膜侧的溶液中替换,不影响随后川芎嗪产生的短路电流;将Na+从结肠上皮基底膜侧的溶液中替换或从顶膜和基底膜侧同时替换,完全抑制了川芎嗪在结肠上皮产生的短路电流;在结肠上皮的基底膜加入Na+-K+-Cl-共转运体(NKCC)阻断剂bumetanide(100 mmol/L)或基底膜Na+HCO3-共转运体(NBC)和Cl-/HCO3-交换器抑制剂DIDS(100 mmol/L)分别使川芎嗪产生的短路电流减少了89.3%(n=6,P＜0.001)和68.9%(n=4,P＜0.01),DIDS对川芎嗪的抑制作用与HCO3-从溶液中替换时产生的抑制作用相似,差异无统计学意义(P＞0.05);基底膜非选择性K+通道阻断剂Ba2+(3 mmol/L)完全抑制了川芎嗪在结肠上皮产生的短路电流(n=4,P＜0.001),基底膜Ca2+激活的K+通道阻断剂TEA(5 mmol/L)对此电流无影响;用BAPTA-AM(100 mmol/L)螯合细胞内、外的Ca2+,不影响川芎嗪在结肠上皮产生的短路电流.结论川芎嗪能刺激大鼠远端结肠上皮分泌Cl-和HC03-,作用呈量效关系;川芎嗪在结肠上皮产生的短路电流是由位于结肠上皮顶膜的CFTR,以及位于基底膜的Na+-K+泵、NKGC、NBC、Cl-/HCO3-交换器和基底膜K+通道共同作用的结果.     

转录因子CaRF在大鼠皮肤创面愈合中的作用

目的 探讨转录因子(calcium-responsive factor, CaRF)在大鼠皮肤创面愈合中的作用.方法 建立大鼠背部皮肤全层切割伤模型,随机将大鼠分为3组:盐水对照组,CaRF过表达处理组,CaRF RNAi处理组,以脂质体转染的方式将CaRF和CaRF RNAi导入创面组织,观察3组大鼠背部皮肤伤口愈合状况.结果 CaRF过表达组大鼠皮肤愈合快, 愈合质量好,CaRF RNAi 组大鼠皮肤愈合最慢,愈合质量差.结论 CaRF促进大鼠皮肤创面愈合,为临床创面愈合提供了新的思路.     

附睾阴离子分泌调控机制

附睾是男性生殖系统的一个重要组成部分,精子成熟就是在附睾里发生的。影响精子成熟的附睾内微环境取决于附睾上皮的分泌。因此研究附睾阴离子分泌调控机制将有助于进一步揭示附睾功能及其对精子成熟的重要作用。本研究基于这样的一个设想,假如精子成熟依赖于附睾阴离     

Peyer''s结淋巴细胞对上皮屏障功能的影响

目的 :体外建立稳定的上皮细胞与Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)共培养体系 ,进一步研究该体系中的上皮细胞生理学特性。方法 :采用短路电流检测单层上皮细胞跨上皮电阻 (TER)的变化、半定量RT PCR方法检测上皮细胞间的紧密连接相关蛋白ZO 1和ZO 2mRNA的表达。结果 :①Caco 2细胞单层与PPL共培养的第 2天 ,无论是混合共培养还是上下共培养组的TER均与对照有统计学差异 (P <0 0 5 ) ;②同时上下共培养或混合共培养组在第 8天TER仍保持较高水平 ,与对照有统计学差异 (P <0 0 5 ) ;③在上下共培养和混合共培养组中 ,半定量RT PCR检测ZO 1mRNA的表达也均明显高于对照。结论 :Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)可以较好地维持上皮屏障功能。     

苯扎氯铵对大鼠降结肠上皮离子转运的影响

目的探讨苯扎氯铵对大鼠降结肠上皮离子转运的影响。方法8～9周龄SD大鼠40只,随机分为两组。氯胺酮麻醉下开腹,实验组用0.1%苯扎氯铵处理大鼠降结肠浆膜40min,温盐水冲洗后关腹,对照组用生理盐水代替苯扎氯铵。分别于术后1,2,3,4,8周取处理段结肠,利用短路电流技术检测结肠上皮离子转运的变化。结果实验组大鼠结肠上皮各时间点跨膜电压、基础电流明显降低,钠离子吸收电流占基础电流的百分比升高。另外,由Forskolin所引起的氯离子分泌电流也明显高于对照组,但DPC阻断Forskolin所引起的短路电流的百分比下降且小于100%(对照组大于100%),而结肠跨膜电阻两组之间无差异。结论苯扎氯铵不影响大鼠结肠黏膜屏障功能,但可造成结肠上皮离子转运功能紊乱,提示与结肠失神经有关。     

葡萄糖及细胞因子对胰岛素瘤相关蛋白-2表达水平的影响

目的探讨葡萄糖、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ对胰岛细胞自身抗原胰岛素瘤相关蛋白(IA)-2表达水平及胰岛素分泌水平的影响。方法以不同浓度的葡萄糖(3、7、11、30mmol/L)、10ng/mlIFN-γ及100ng/mlTNF-α分别刺激胰岛细胞系RIN5F24h和48h,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组RIN5F细胞中IA-2的mRNA表达水平,并用放射免疫法检测上清中胰岛素的浓度。结果RT-PCR结果显示以不同浓度葡萄糖(3、7、11、30mmol/L)分别刺激RIN5F细胞系后IA-2mRNA水平呈浓度依赖性和时间依赖性增加;TNF-α可抑制IA-2mRNA的水平,并且作用48h后IA-2表达水平显著降低(P<0.05);IFN-γ作用24h及48h均可显著抑制IA-2的表达(P<0.05)。TNF-α或IFN-γ刺激RIN5F细胞系后,上清中胰岛素水平均较基础值降低,并且作用48h后差异有统计学意义(P<0.05)。结论葡萄糖可使IA-2的mRNA水平呈剂量依赖性和时间依赖性增加,TNF-α、IFN-γ可抑制IA-2的mRNA表达和胰岛素分泌浓度。